摘要：目的了解上海市艾滋病自愿咨询检测（VeT）门诊就诊MSM人群HIV与梅毒、单纯疱疹病毒2型（HSV-2）共感染情况及其可能影响因素。方法采用横断面研究设计，用方便抽样法选取上海市与普陀区的2个VCT门诊，于2015年3—8月招募≥18岁、最近1年发生过同性插入性性行为的MSM作为调查对象，招募756名MSM，使用疋。检验和logistic回归法分析。结果共调查732名MSM，调查对象HIV与梅毒共感染率为3．3％（24／732），HIV与HSV-2共感染率为1．9％（14／732），HIV与梅毒、HSV-2共感染率为0．7％（5／732）。梅毒感染者的HIV感染率45．3％（24／53）显著高于非梅毒感染者7．2％（61／679）（r=63．11，P〈0．001）；HSV-2感染者的HIV感染率34．1％（14／41）显著高于非HSV-2感染者10．3％（71／691）（z。=21．49，P〈0．001）。多因素logistic回归分析显示，调查对象HIV与梅毒共感染的可能危险因素包括外地户籍（OR=3．50，95％C1：1．01～12．17）、初中及以下文化程度（OR=4．46，95％CI：1．54。12．87）和曾使用毒品（OR=4．25，95％CI：1．67～10．82）；HIV与HSV-2共感染的可能危险因素：高中及以下文化程度（OR=6．87，95％CI：1．86—25．42；OR=9．82，95％CI：2．25—42．85）。结论上海市VCT门诊就诊的MSM中存在一定比例的HIV和梅毒、HIV和HSV-2共感染情况。应关注外来务工人员、文化程度低者和使用毒品者。

摘要：目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。

摘要：目的建立实时荧光PCR定量检测单纯疱疹病毒2型(HSV2)ICP4基因的方法。方法依据HSV2ICP4基因序列设计引物,PCR纯化后克隆到pMD-18T载体上进行测序,抽提重组质粒作为标准品。根据测序结果设计荧光定量PCR的引物和探针,质粒标准品10倍稀释后进行扩增,建立标准曲线,并进行灵敏度和可靠性分析。结果测序结果显示在扩增的PCR片段中有在A-G无和T-C的无义突变。标准品101以下没有检测信号,101具有明确的检测信号,因而检测的灵敏度为10。可靠性测定结果:107～101进行10次重复Ct值的平均值分别为14.275±0.137、17.988±0.162、22.081±0.259、25.957±0.345、29.565±0.203、33.269±0.287、37.737±0.698,变异系数分别为0.965%、0.902%、1.174%、1.329%、0.686%、0.862%、1.851%。Ct值与标准品浓度的对数之间存在良好的线性关系。回归系数为0.998。结论成功建立了HSV2ICP4基因实时定量荧光PCR检测的方法,灵敏度高,重复性好,可用于HSV2ICP4基因的定量分析。

摘要：目的建立一种可准确、快速检测沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型3种病原体DNA的多重荧光定量PCR检测方法。方法本研究针对沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型分别设计了一对特异性探针引物,构建了可同时检测沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型、人乳头瘤病毒16型的多重荧光PCR反应体系,并与商业试剂同时检测300例临床标本,评估其一致性。结果性能评价结果显示,所建立的多重荧光PCR检测方法具有较好的特异性和敏感性,与对照商业试剂检查结果符合率达到100%。结论所建立的多重荧光PCR检测方法能实现3种病原体的快速、正确定量检测。

摘要：目的建立双重实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型的方法。方法针对沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型基因组保守序列,设计引物和探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性,并与常规单重荧光PCR方法比较。结果成功建立了双重实时荧光定量PCR检测沙眼衣原体和单纯疱疹病毒2型的方法,检测限均为1000copies/μL,敏感性和特异性均为100%。应用该方法检测了50份患者标本,与试剂公司提供的单重荧光PCR试剂检测结果一致性为100%。结论该研究建立的快速、准确,可同时检测沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型的双重实时荧光定量PCR法,具有较高的敏感性、特异性和稳定型,操作简单,可用于沙眼衣原体、单纯疱疹病毒2型的临床筛查和诊断。

摘要：目的：探讨在RNA干扰技术条件上，干扰α27基因的表达对单纯疱疹病毒（ HSV）-2复制的影响。方法体外合成针对α27基因的四对siRNA（ R1、R2、R3和R4组）和阳性、阴性对照siRNA，用Lipofectamine2000转染vero细胞后接种HSV-2，感染后分别于12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h测定上清液病毒滴度。结果α27基因特异性siR-NA转染组在病毒复制早期（12～24 h）即出现明显的病毒滴度降低，病毒复制晚期，其病毒滴度仅稍微降低；其中，R2和R4组在病毒复制早期到晚期病毒滴度均较其它组低。结论α27基因特异性siRNA能够抑制HSV-2的复制，降低子代病毒滴度。按照同样设计原则合成的不同序列siRNA，其抑制效果存在明显差异。

摘要：目的:探讨巢式PCR方法检测单纯疱疹病毒(HSV)的临床应用价值,同时对HSV-1、HSV-2在生殖器疱疹(GH)、梅毒(syphilis)、念珠菌病(candidiasis)、非淋菌性尿道炎(NGU)、淋病(gonorrhea)、尖锐湿疣(CA)6种性病患者(STD)及其性伴和健康人群中的感染情况及分布特点进行对比研究。方法:应用HSV-1糖蛋白D(gpD)基因序列和HSV-2糖蛋白G(gpG)基因序列为靶基因,设计了普通PCR和巢氏PCR方法,检测6种STD患者及其性伴和健康人群中HSV的感染情况。结果:6种STD患者共1223人,HSV-1阳性率15.70%(192/1223),HSV-2阳性率28.29%(346/1223),HSV总阳性率43.41%(538/1223);检测性伴153例,HSV-1阳性率12.42%(19/153),HSV-2阳性率21.57%(33/153),HSV总阳性率34.0%(52/153);检测健康人群263例,HSV-1阳性率3.42%(9/263),HSV-2阳性率6.08%(16/263),HSV总阳性率9.51%(25/263)。结论:STD患者中HSV-2感染率高于HSV-1感染率;STD患者及其性伴中HSV-1、HSV-2感染率均高于健康人群。

摘要：目的利用CRISPR/Cas9(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeat/CRISPR-associated nuclease 9)技术构建携带增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)基因的单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus 2,HSV-2)。方法利用CRISPR/Cas9技术对外源基因EGFP插入HSV-2基因组的策略进行探索,设计如下4种插入策略:(1)经典的同源重组修复模式,即环状双侧同源臂供体介导的基因敲入;(2)线性化单侧同源臂供体介导的基因敲入;(3)同源性非依赖介导的基因敲入;(4)利用稳表达Cas9和sgRNA的细胞株,进行环状双侧同源臂供体介导的基因敲入。结果使用策略2、3和4均成功构建了携带EGFP的HSV-2,其中策略2的基因敲入效率最高,然后依次为策略3、策略4,策略1未观察到重组病毒的产生。蚀斑纯化后的重组病毒在7代内能稳定表达绿色荧光蛋白,并且和亲本株在Vero细胞上具有相似的生长特性。结论线性化单侧同源臂供体介导的基因敲入效率更高,敲除载体的稳转细胞株能够有效地提高同源重组修复机制介导的基因敲入效率。

摘要：目的建立一种快速、特异、准确定量的单纯疱疹病毒2型（HSV-2）检测方法.方法构建重组质粒pMD18-T-gG作为标准品.以HSV-2的gC基因区为靶基因区,设计合成引物和探针,采用TaqMan MGB技术对HSV-2进行实时定量PGR检测,优化反应体系,并进行方法学评价.结果成功构建重组质粒pMD18-T-gG.建立利用TaqMan MGB技术的real-time PGR方法,其重复性较好[批内CV（变异系数）值为2.29%,批间CV值为4.76%]、特异性较好（对HSV-1、Veto细胞、巨细胞病毒、弓形虫等无特异性扩增）、线性范围好（4.75×10^1～4.75×10^6 copies/μl,r=0.998）,灵敏度达到47.5 copies/μl;与ELISA法进行比较,认为前者的灵敏度更高、检测时间更短.结论建立的TaqMan MGB PGR方法能够快速准确、特异、灵敏地对HSV-2进行定量分析,可为临床诊断提供帮助.

摘要：目的设计单纯疱疹病毒2型(HSV-2)诊断芯片的O ligo探针。方法利用BLA ST软件对HSV-2的DNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;用生物学软件O ligo6.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的O ligo探针。结果获得13条60-m er O ligo探针。结论利用BLA ST系统和生物学软件O ligo6.0设计HSV-2诊断芯片的探针,可为后期打印成DNA芯片,用于HSV-2的检测打下基础。