摘要：目的基于赤霉素(gibberellin A3,GA3)处理下的南方红豆杉Taxus chinensis ***转录组数据鉴定和分析SSR位点,开发可用于南方红豆杉种质资源鉴定和遗传多样性分析的SSR标记。方法使用MISA软件对南方红豆杉转录组数据进行SSR分析,搜索SSR位点。可搜索单核苷酸、二核苷酸、三核苷酸、四核苷酸、五核苷酸和六核苷酸,最小重复数分别设置为10、6、5、5、5、5次。采用Primer 3(2.3.5版,默认参数)进行SSR引物设计。通过毛细管荧光电泳检测,最终选定多态性好,扩增成功率高的SSR引物用于后续数据分析;通过MEGA进行UPGMA聚类分析,构建聚类树。结果转录组测序共获得202361条Unigene,采用MISA软件搜索出12008个SSR位点,分布在10894条Unigenes上,发生频率为5.38%,平均距离为1/7.64 kb。单核苷酸重复类型最丰富,占总SSR位点的51.74%,其次为三核苷酸(20.92%)和二核苷酸重复类型(20.88%)。A/T、AG/CT是优势重复基序,分别占总SSR重复类型的49.60%和10.93%。随机抽选96对SSR引物,以4个地区12份南方红豆杉种质进行引物有效性和多态性验证,筛选出13对具多态性的SSR引物,多态性引物比率为13.54%。13对引物在东北红豆杉Taxus cuspidata扩增效率高达100%,但在曼地亚红豆杉Taxus×media扩增效率仅为23.08%。聚类分析表明太行山地区南方红豆杉聚为一类,浙江、福建和湖南等南方来源的南方红豆杉聚为一类,后三者彼此之间遗传距离更近。结论南方红豆杉转录组测序产生的Unigene信息可以用来开发SSR分子标记,开发的13个标记将有助于南方红豆杉物种遗传多样性、分子育种、资源保护等方面的研究。

摘要：目的研究南方红豆杉愈伤组织的出愈时间、诱导率、生长率、生长状态、褐变程度,比较愈伤组织中紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的量。方法采用单因素比较、正交试验设计,研究影响南方红豆杉愈伤组织诱导和生长的各种因素;采用HPLC法测定不同来源愈伤组织中10-脱乙酰基巴卡丁Ⅲ(10-DAB)、巴卡亭Ⅲ、三尖杉宁碱、紫杉醇和东北红豆杉素5种紫杉烷二萜类成分的量;采用加权评分综合考虑以上各因素优选组织培养条件。结果外植体脱分化形成愈伤组织的能力,以完整叶片及茎段最好;暗培养有利于紫杉醇等5种萜类成分的富集;愈伤组织诱导的最适培养基为B5+2,4-D 3.0mg/L+6-BA 1.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L+KT 0.5 mg/L。结论南方红豆杉愈伤组织诱导、培养与外植体种类、培养基种类、光照有较大关联,紫杉醇等5种紫杉烷二萜类成分的富集受植物生长调节剂种类及浓度影响显著。

摘要：根据GeneBank中公布的GGPPS基因保守区设计特异引物,克隆南方红豆杉GGPPS基因的DNA和cDNA序列,并通过生物信息学方法对其核苷酸序列和蛋白质结构进行分析预测。结果表明,GGPPS基因DNA和cDNA序列都为1 182 bp,DNA序列中无内含子,cDNA序列为一个编码393个氨基酸残基的开放式阅读框;GGPPS的理论相对分子质量为42 590,等电点为5.68。核苷酸同源性分析显示,它与Taxus canadensis(AF081514)同源性为98.8%;推导出的氨基酸序列与Taxus canadensis(AAD16018)同源性达99.0%。利用Protparam、SignalP、ProtScale、SOPMA、Swiss-Modeling、Scan Prosite和MEGA4.0等生物信息学工具分别对其理化性质、信号肽、疏水性、亲水性、二级结构、三级结构和进化树进行分析,为其功能研究和生物合成紫杉醇研究提供分子基础。

摘要：以南方红豆杉的红色和黄色假种皮为材料,初步分析了其理化性质和呈色不同的原因。结果显示,南方红豆杉假种皮色素主要由类胡萝卜素和黄酮类物质组成,抗氧化剂和金属离子(K+,Na+,Ca2+,Al3+,Cu2+和Fe3+)对色素的稳定性影响较大;根据HPLC-MS结果推测紫杉烷类物质是南方红豆杉假种皮呈现红色,而黄酮类物质可能是假种皮呈现黄色的主要原因。

摘要：利用基因组勘测序列(GSS序列)探讨开发南方红豆杉(Taxus wallichiana ***)SSR标记的可行性。从1923条GSS序列中搜寻到184个SSR位点。其中二核苷酸、三核苷酸和四核苷酸重复所占比例分别为88.6%、10.3%和1.1%。不同核苷酸在重复序列中的频率分析表明,a和t所出现的频率远远高于c和g的频率。对所获得的184个SSR位点设计引物,开发出90个候选SSR引物。在所获得的获选标记中选取20对引物在南方红豆杉中进行试验检验,结果19对(95%)SSR引物能够获得清晰稳定的主带,表明GSS序列可以高效地用于开发基因组SSR标记,这些标记将为南方红豆杉的相关研究奠定基础。

摘要：通过不同的试验设计,进行不同播种方法、播种时间及遮荫等措施对南方红豆杉苗木生长及质量的影响研究。试验表明:点播苗木平均单株生物量分别比条播和撒播增加67%和229%,高度分别比条播和撒播增加18%和49%;而且播种育苗宜选在2月15日左右。100%遮荫的苗高、地径和冠幅分别是75%遮荫的1 36倍、1 18倍和1 09倍,分别是50%遮荫的1 49倍、1 32倍和1 11倍。

摘要：对中国重要药用植物南方红豆杉中的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因进行分离、测序以及生物信息学分析。根据GenBank中已登录的10-去乙酰巴卡亭Ⅲ-10-乙酰转移酶(DBAT)基因cDNA序列设计引物,采用RT-PCR技术从南方红豆杉叶片中克隆了1个DBAT基因Tc-DBAT的全长cDNA。结果显示,Tc-DBAT cDNA含有1个1 323 bp的开放阅读框(open reading frame,ORF),编码440个氨基酸,对应基因组序列含有1个内含子。Tc-DBAT蛋白N端含有5个N-酰基化作用位点和2个保守的N-糖基化作用位点,具有1个保守的B ig-1结构域,多个重要的磷酸化位点以及1个类似钙结合蛋白重复结构。序列同源性比较、系统发生分析以及蛋白质高级结构预测均表明,Tc-DBAT属于转移酶超家族(transferase superfamily),是一个具有乙酰转移酶活性的功能蛋白,能够催化10-去乙酰巴卡亭Ⅲ(10-DAB)10位的乙酰化,从而生成抗癌新药紫杉醇生物合成途径中的最后一个双萜中间体——巴卡亭Ⅲ。有望通过成功克隆和鉴定紫杉醇生物合成途径中的关键酶基因达到提高其半合成前体巴卡亭Ⅲ产量的目的,并且为进一步利用组合表达系统商业化生产紫杉醇奠定基础。

摘要：以南方红豆杉2年生容器苗为培育对象,采用析因试验设计,系统研究育苗密度、缓释肥施用量和容器规格对其生长及根系发育的影响,并运用隶属函数法对各处理组合的育苗效果进行综合评价,提出优化育苗方案。结果表明:3个主因素中,容器规格对育苗效果影响最大,育苗密度其次,两者对绝大部分育苗指标的影响达到显著水平;缓释肥施用量影响相对较小,仅对苗高、整株干质量、苗木质量指数和根系发育指标有显著影响。两因素交互效应中,育苗密度×容器规格互作对所有地上指标均有极显著影响,但对根系发育的影响较小,缓释肥施用量×容器规格互作主要显著影响根系生长指标,育苗密度×缓释肥施用量互作效应较小,对所有育苗指标均无显著影响。3因素交互效应对绝大部分育苗指标影响显著。隶属函数法综合评价表明:采用10 cm×15 cm规格容器、30株·m^-2的育苗密度和增施2.5 kg·m^-3缓释肥的育苗方案最优,另外,还选出4种较优育苗方案。筛选出的5种优化育苗方案可供育苗单位根据南方红豆杉不同等级苗木的市场价格波动和各种生产要素成本变化灵活应用。

摘要：以南方红豆杉DNA为模板,采用正交试验设计对影响南方红豆杉ISSR-PCR扩增的参数进行了优化。结果表明较佳的南方红豆杉ISSR-PCR的反应体系(20μL)为模板DNA 60 ng,10×PCR buffer 2.0μL,25 mmol/L的MgCl21.0μL,2.5 mmol/L的dNTPs 1.0μL,10μmol/L的引物1.0μL和反应酶0.2 U。适宜的扩增条件为94℃预变性4 min,41个PCR循环(94℃变性30 s,54.5℃退火45 s),72℃延伸80 s,72℃延伸5 min,4℃保存。

摘要：以南方红豆杉幼茎和叶片为试材,采用正交实验设计研究了不同浓度6-BA、NAA和AgNO3对南方红豆杉愈伤组织诱导率及褐化的影响。结果表明:最适南方红豆杉愈伤组织诱导的激素组合为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 1.0mg/L+AgNO31.0mg/L,其诱导率达94%,适量的AgNO3能降低南方红豆杉愈伤组织的褐化现象。