摘要：目的·评价翼状胬肉术中应用博来霉素预防术后复发的临床疗效。方法·回顾性研究59例(82眼)翼状胬肉患者资料,在胬肉切除联合自体结膜瓣移植手术中局部使用博来霉素(3mg/mL),观察术后角膜、结膜愈合情况,评价术后复发率和并发症。结果·所有患者术后观察随访6个月及以上,平均(18.5±9.7)个月,术眼角膜透明,结膜瓣愈合良好,与周围组织融合,无明显瘢痕增生,随访期间胬肉无复发;所有患者均未发生持续性角膜上皮缺损、巩膜缺血溶解、睑球粘连、继发性青光眼和白内障等并发症。结论·抗代谢药博来霉素的局部应用可能可以降低翼状胬肉的术后复发率,且不引起严重的并发症。

摘要：目的:探讨自噬相关基因在博来霉素诱导的小鼠皮肤纤维化中的表达及作用。方法:(1)取72只6周龄雄性BALB/c小鼠,采用随机数字表法分为空白对照组、单纯磷酸盐缓冲液(PBS)组和博来霉素组,每组24只。空白对照组小鼠不予任何处理;单纯PBS组和博来霉素组小鼠背部皮肤分别皮下注射100 μL PBS、博来霉素(1 mg/mL),每天1次,连续注射28 d。注射7、14、21、28 d,每组分别取6只小鼠,肉眼观察小鼠背部皮肤变化,观察结束后处死小鼠,取背部皮肤组织。取注射28 d皮肤组织,行常规苏木精-伊红染色,测量皮肤组织厚度;Masson染色行皮肤组织形态学观察。取注射7、14、21、28 d皮肤组织,酶联免疫吸附测定法检测羟脯氨酸含量,实时荧光定量反转录PCR法和蛋白质印迹法分别检测p62、微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ(LC3 Ⅱ)和Beclin-1的mRNA和蛋白表达。(2)取实验(1)中空白对照组小鼠皮肤组织,收集第3~6代成纤维细胞(Fb),采用随机数字表法分为空白对照组、单纯PBS组、博来霉素组,每组6孔。空白对照组细胞不予任何刺激,单纯PBS组、博来霉素组细胞分别加入20 μL PBS、博来霉素(1 mg/mL)刺激72 h,细胞免疫荧光染色观察LC3 Ⅱ的表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、 t检验及Bonferroni校正。 结果:(1)空白对照组和单纯PBS组小鼠注射7、14、21、28 d背部皮肤菲薄、红润、静脉血管清晰,单纯PBS组从注射14 d起穿刺部位可见数个隆起的皮丘。博来霉素组小鼠注射7 d皮肤红润,穿刺点处可见数个隆起的皮丘;注射14 d,皮肤轻微变白;注射21 d,皮肤明显变白,周围血管不清晰;注射28 d,皮肤变白,周围血管无法辨认。(2)注射28 d,空白对照组与单纯PBS组小鼠皮肤组织厚度相近( t=0.79, P>0.05),博来霉素组小鼠皮肤组织厚度较空白对照组和单纯PBS组明显增加( t=0.50、0.50, P<0.01)。(3)注射28 d,空白对照组与单纯PBS组小鼠皮肤组织结构相似,均可见少量胶原,胶原排列整齐有序,毛囊分布均匀;博来霉素组小鼠皮肤胶原数目显著增多,但排列杂乱无序,毛囊数明显减少。(4)注射7、14、21、28 d,博来霉素组小鼠皮肤组织中羟脯氨酸含量明显高于空白对照组、单纯PBS组( t=0.99、0.98、0.50、0.51,0.50、0.50、0.52、0.51, P<0.05或 P<0.01)。(5)注射7 d,博来霉素组小鼠皮肤组织p62的mRNA表达明显低于单纯PBS组( t=0.93, P<0.05)。注射14、21 d,博来霉素组小鼠皮肤组织p62、LC3 Ⅱ、Beclin-1的mRNA表达明显高于空白对照组( t=0.74、0.70、0.58,0.49、0.51、0.74, P<0.05)和单纯PBS组( t=0.94、0.65、0.65,0.77、0.49、0.51, P<0.05)。注射28 d,博来霉素组小鼠皮肤组织p62、Beclin-1的mRNA表达明显低于空白对照组( t=0.50、0.44, P<0.05)和单纯PBS组( t=0.97、0.55, P<0.05),而LC3 Ⅱ的mRNA表达仍显著高于空白对照组和单纯PBS组( t=0.51、0.98, P<0.01)。(6)注射7、14、21、28 d,空白对照组、单纯PBS组、博来霉素组小鼠皮肤组织LC3 Ⅱ的蛋白表达为0.167±0.042、0.122±0.016、0.553±0.078、0.118±0.035,0.120±0.023、0.117±0.061、0.581±0.039、0.159±0.065,0.233±0.027、0.304±0.031、1.020±0.010、0.089±0.045。注射14 d,博来霉素组小鼠皮肤组织p62和Beclin-1的蛋白表达明显高于空白对照组( t=0.86、0.89, P<0.05)和单纯PBS组( t=0.42、0.89, P<0.05)。注射21 d,博来霉素组小鼠皮肤组织p62、LC3 Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达明显高于空白对照组和单纯PBS组( t=0.82、0.45、0.50,0.79、0.51、0.50, P<0.01)。注射28 d,博来霉素组小鼠皮肤组织p62、LC3 Ⅱ和Beclin-1的蛋白表达明显低于空白对照组和单纯PBS组( t=0.77、0.54、0.52,0.50、0.51、0.50, P<0.05)。(7)培养72 h,博来霉素组Fb中LC3 Ⅱ的表达明显低于空白对照组、单纯PBS组。 结论:博来霉素刺激皮肤纤维化过程中,自噬相关基因先升高后降低,自噬过程被激活,有望逆转皮肤纤维化

摘要：目的:构建一个基于博来霉素筛选的核糖体区基因打靶载体,为后续的基因打靶研究奠定基础.方法:首先选择含有博来霉素(zeocin)抗性的目的片段与载体连接,并进行单酶切及测序鉴定,最终构建基于博来霉素筛选核糖体基因打靶载体平台.结果:构成pUC19-DS1-SV40-Zeocin-polyA-DS2基因打靶载体与预期一致,测序结果与实验设计相同.结论:成功构建了含有抗性基因的pUC19-DS1-SV40-Zeocin-polyA-DS2水牛基因通用打靶载体平台,便于不同外源基因的插入,为转基因动物模型的建立提供了基础工具.

摘要：博来霉素广泛用于多种癌症的治疗中,但其在临床使用中存在一些毒副作用。通过设计一个电化学DNA传感器来简单、快速地检测微量博来霉素,试验结果表明该传感器检测博来霉素的最低检测限达到0.3 ng/mL,并且证明这个传感器在血清中也有良好的稳定性,在30 min就可以完成整个检测过程。

摘要：特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种致病原因不明、进行性、慢性不可逆的间质性肺疾病。为探讨富含亮氨酸重复蛋白15(leucine-rich repeat-containing protein 15,LRRC15)在IPF的作用及调节机制,本研究构建了博来霉素(bleomycin,BLM)诱导的小鼠肺纤维化和A549细胞损伤模型,检测了LRRC15的表达变化。转染siLRRC15后分别采用MTT、GFP-RFP-LC3双荧光标记系统和免疫印迹等方法检测了细胞活性和自噬的变化。结果表明:BLM处理后,小鼠肺组织和A549细胞中LRRC15表达显著上调;将设计和合成的siLRRC15转入A549细胞,LRRC15的表达极显著降低,可以部分恢复BLM引起的细胞损伤;BLM处理A549细胞后,LC3-Ⅱ和P62蛋白呈现上升的趋势;GFP-RFP-LC3双荧光标记检测发现,BLM处理后自噬体数量明显增多;进一步用siLRRC15处理A549细胞后发现,自噬关键蛋白LC3-Ⅱ、ATG5、ATG7的表达增加,P62蛋白表达下调,自噬流的强度增加。以上研究结果说明LRRC15是IPF中上皮细胞损伤的指示剂,可能通过调节自噬参与纤维化过程中的调节,本研究为进一步阐明IPF的机制提供了必要的理论依据。

摘要：目的探索甘草次酸衍生物TY501对博莱霉素(BLM)诱导的肺纤维化模型大鼠的抗肺纤维化作用及初步机制。方法将40只大鼠随机分成5组:假手术组、模型组、吡非尼酮组、TY501高剂量组和低剂量组。经气道给予BLM制备大鼠肺纤维化模型,每天灌胃给予受试药。实验结束后,测定肺系数、氧分压(Pa O2),测定BALF中ALB、ALP、LDH以及肺组织中GSH、HYP含量,测定血清Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(COL4)含量。结果 1肺纤维化早期肺泡炎阶段相关指标:各治疗组与模型组相比,肺系数显著下降(P<0.05)、Pa O2明显升高(P<0.05);与模型组相比,各治疗组大鼠BALF中ALP、ALB以及LDH呈下降趋势(P<0.05);模型组肺组织匀浆中GSH含量反馈性增高,与假手术组相比存在明显差异(P<0.05),各治疗组较模型组含量降低(P<0.05);(2)肺纤维化晚期肺间质纤维化阶段:大鼠肺组织HYP、血清PCⅢ(TGF-β通路指标)、血清COL4(MMPs通路指标)含量,各治疗组较模型组呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05)。结论 TY501对肺纤维化治疗存在价值,能够减轻BLM诱导的肺纤维化程度。TY501可能通过阻断TGF-β的作用、抑制MMPs等多途径抑制肺纤维化的发生,减轻肺纤维化症状。

摘要：背景:肺纤维化是一种发病机制不明,预后极差的慢性肺组织损伤疾病,目前常用的肺纤维化动物模型多见于由生物因素或非生物因素诱导,对研究肺纤维化的发病过程、形态功能改变及治疗具有重大意义。但是大多数研究并没有系统阐明生物因素及非生物因素引起的肺纤维化模型动物的差异。目的:综述肺纤维动物模型的构建方法,为临床上该病的进一步研究提供参考,同时对今后进一步完善肺纤维化模型提供设计思路。方法:通过查阅1998-2021年为主的文献,检索数据库包括中国知网、万方数据、PubMed、Coremine、SCI-HUB和GeenMedical数据库;以“肺纤维化、肺纤维化动物模型、生物因素、非生物因素”作为中文关键词;以“Pulmonary fibrosis,Animal model of pulmonary fibrosis,Biological factors,Abiotic factors”为英文检索词进行检索;最终共纳入51篇文献进行综述分析。结果与结论:①肺纤维化动物模型的建立方法主要分为生物因素及非生物因素2大类。②采用非生物因素诱导建立肺纤维化模型的方法虽然在产生肺纤维化程度上较为不稳定,但在药物选择和给药途径方面具有多样性,且操作简单,价格低廉,所以在造模方式的选择上较为常见,非生物因素诱导建立的肺纤维化模型主要包括药物/毒物因素(博来霉素、胺碘酮、油酸、百草枯及异硫氰酸荧光素)、环境因素(二氧化硅、石棉及高浓度氧)和其他因素(人源化及老年化)诱导的模型构建建模方法。③生物因素诱导的肺纤维化模型,多见于选择细胞因子过表达或靶向Ⅱ型肺泡上皮细胞损伤,这类模型与肺纤维化临床后期表现更为相似,且模型稳定性好,但是价格较昂贵。④诸多肺纤维化动物模型造模方法中以博来霉素诱导的建模方法较为常用,此法可选择多样化的给药方式、且在使用鼻饲给药时稳定性较高,造模时相对安全不易产生意外导致小鼠死亡、造模的周期短和建模价格低廉,但此方法的缺点是诱导的纤维化只是间质性纤维化的一般形态而不具有特异性;而在环境因素诱导的建模中,最推荐的诱导物为二氧化硅,但由于环境因素在造模的过程中对人体损害很大,现已很少使用。⑤文章综合考虑认为,通过对肺纤维化动物模型的生物因素及非生物因素造模方法进行比较,有助于在动物实验过程中选择合适的模型;根据研究者自身的实验目的及需求,以博来霉素鼻饲诱导建立肺纤维化动物模型是较好的选择。

摘要：目的:观察脂多糖和博来霉素两种诱导剂对小鼠不同时间点氧化/抗氧化状态的干预作用,为采用以上诱导剂建立气虚痰阻型(COPD)动物模型提供实验依据。方法:96只小鼠随机分为正常组、博来霉素组、脂多糖组,每组32只。博来霉素组、脂多糖组小鼠采用滴鼻一次诱导分别给予浓度为3.75μg·μL-1的博来霉素40μL,5μg·μL-1的脂多糖40μL建立慢性阻塞性肺疾病动物模型。各组小鼠于造模第1天、7天、14天、28天观察记录小鼠整体状态、活动情况,并在采集四肢皮肤颜色、舌底颜色、尾巴颜色等中医体征后处死动物,每个时间点处死8只,取出肺组织,检测肺组织匀浆液中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、超氧化歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)含量。结果:与正常组比较,博来霉素组小鼠双目略显呆滞,毛发干枯无光泽,被毛蓬松直立,耳廓及四爪颜色紫暗,精神倦怠,不喜活动,偶见出现咳嗽、气喘、气急等;在7天、14天、28天时肺组织GSH含量明显降低(P<0.05或P<0.01);1天、7天、14天、28天时MDA、SOD、T-AOC含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。与正常组比较,脂多糖组小鼠双目略显呆滞,被毛柔顺稍有光泽,耳廓及四爪颜色淡红,精神倦怠,部分小鼠有扎堆现象;1天、7天时肺组织GSH、SOD含量明显降低(P<0.05或P<0.01),1天、7天、14天时MDA、T-AOC含量明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论:博莱霉素组小鼠肺组织在第7天开始出现明显氧化抗氧化的失衡,随后有所减缓,氧化失衡持续持续至造模结束。脂多糖组小鼠肺组织在第1天开始出现明显的氧化抗氧化的失衡,随着时间的推移,氧化/抗氧化失衡得到调整至正常。

摘要：为了研究PM_(2.5)混悬液对博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化小鼠的影响以及新对叶百部碱(NTS)的干预作用,本实验采用析因实验设计研究了PM_(2.5)混悬液给药次数(每周1次或2次)和BLM剂量(1.5、3.0 U/kg)对小鼠肺纤维化模型的影响。小鼠于第0天经气管滴注1.5或3.0 U/kg的BLM;从第1天开始,小鼠每周1次或2次气管滴注5 mg/kg的PM_(2.5)混悬液;从第8天开始,给药组小鼠每天1次灌胃给予30 mg/kg的NTS直至21 d;21 d后观察肺组织病理切片的苏木精-伊红(HE)染色和Masson染色结果,计算小鼠肺系数、肺组织羟脯胺酸(HYP)含量和基于病理切片的HE炎性评分和胶原容积分数(CVF)。结果显示,对于单独滴注PM_(2.5)混悬液的小鼠,每周1次时只有HE炎性评分显著升高,每周2次时HYP和HE炎性评分增加但CVF无显著升高;而PM_(2.5)与BLM联合滴注的各组小鼠的CVF均显著增加;新对叶百部碱能够显著改善联合滴注小鼠的肺组织病理改变、减少胶原沉积,降低小鼠的CVF和α-SMA蛋白的表达,具有抑制肺纤维化的作用。本研究结果表明,单独滴注PM_(2.5)主要引起肺部炎症,即使多次给药引起肺纤维化的可能性也较小;但PM_(2.5)与BLM联合滴注则小鼠肺组织胶原沉积显著增加,大大加重了BLM引起的肺纤维化,提示PM_(2.5)对有呼吸系统疾病或基础性疾病的患者影响很大,而新对叶百部碱对联合滴注模型小鼠的肺纤维化具有明显的改善作用。

摘要：目的评价新辅助介入化疗及BOMP方案用于宫颈癌的疗效。方法对宫颈癌28例,其中I B2 19例,ⅡA-B 6例, ⅢA-B 3例,化疗方案为博来霉索16mg,长春新碱2mg,丝烈霉素10mg,卡铂400mg(BOMP),采用股动脉穿刺,髂内动脉灌注化疗,超选择栓塞技术,于一疗程化疗后根据检查决定,或进入第二疗程化疗或手术或放疗。分析临床近期疗效,病理缓解率、手术率;以及化疗后与手术间隔期。结果新辅助介入化疗的BOMP方案临床近期总有效率26例(92.8%),其中完全缓解率14例(50. 0%),部分缓解率12例(42.8%);术后病理完全缓解率10例(35.7%),26例手术病例无宫旁浸润,淋巴转移和阴道切缘阳性。化疗后行宫颈癌根治术加盆腔淋巴结清扫术26例(92.8%),行根治性放疗2例(7.1%),其中一疗程化疗后手术22例(78.6%),二疗程化疗后手术4例(14.3%)。全部手术病例均在化疗后第3周施行。结论BOMP化疗方案作为宫颈癌术前辅助化疗疗效明显;绝大多数局部晚期病例术前可设计一疗程化疗,从而缩短辅助治疗手段的时间;化疗后第3周施行手术,较为合适,降低了手术难度。