摘要：目的探讨在即时检测CYP2C19基因型的精准指导下,不同双重抗血小板方案治疗高危非致残性缺血性脑血管事件(HR-NICE)的有效性及安全性。方法采用单中心、前瞻性、随机、开放标签、终点盲法设计。连续收集2020年7月至2022年1月于徐州市中心医院脑卒中绿色通道及神经内科病房收治的HR-NICE患者,对所有患者无创刮取颊黏膜行即时检测,筛选CYP2C19功能缺失等位基因CYP2C19*2和CYP2C19*3的携带者,携带1个功能缺失等位基因为CYP2C19中代谢,携带2个功能缺失等位基因为CYP2C19慢代谢,使用全自动医用PCR分析仪进行即时检测CYP2C19基因型,将检测周转时间缩短至1 h。将CYP2C19基因型为中慢代谢的患者按照随机数字表法分为常规治疗组(氯吡格雷75 mg,1次/d)、替格瑞洛组(替格瑞洛90 mg,2次/d)和强化剂量组(氯吡格雷150 mg,1次/d),分别联合阿司匹林100 mg,1次/d双重抗血小板治疗21 d。收集3组患者的一般基线资料、急性卒中Org10172治疗试验分型及90 d改良Rankin量表(mRS)评分、不良事件及严重不良事件发生等情况。主要疗效结局为90 d内新发卒中,主要安全结局为90 d内严重或中度出血。结果共纳入716例HR-NICE患者,常规治疗组240例、替格瑞洛组240例、强化剂量组236例,3组患者基线资料差异均无统计学意义(均P>0.05)。90 d新发卒中患者常规治疗组26例(10.8%),替格瑞洛组11例(4.6%),强化剂量组4例(1.7%),3组间差异具有统计学意义(χ^(2)=19.28,P0.05)。90 d中重度出血患者常规治疗组1例(0.4%),替格瑞洛组6例(2.5%),强化剂量组0例,3组间差异具有统计学意义(χ^(2)=7.23,P0.05)。在强化剂量组90 d卒中复发患者中,CYP2C19中代谢0例(0/159),CYP2C19慢代谢4例(4/77,5.2%),差异有统计学意义(P=0.011),在常规剂量组和替格瑞洛组差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过即时检测筛选CYP2C19功能缺失等位基因的携带者,可快速精准指导非心源性HR-NICE的抗血小板治疗。强化氯吡格雷剂量(150 mg,1次/d)联合阿司匹林治疗能够有效减少患者卒中复发及出血和不良事件的发生,且CYP2C19中代谢者可能为强化氯吡格雷剂量的最佳获益人群。

摘要：合成生物学专注于可重复利用模块和元件的工程化设计,并在生物系统中表现出良好的行为和功能。在无细胞蛋白表达系统中,核糖核酸调节子作为即时检测中的重要传感元件,通过靶标分子的诱导使其自身结构发生变化,进而调控下游基因的表达。系统介绍不同类型的核糖核酸调节子及其作用原理,包括一代核糖核酸调节子、toehold开关、功能拓展的核糖核酸调节子和核糖开关。详细阐明构建核糖核酸调节子的设计-测试-分析过程:计算机辅助设计、基因表达测试和结构功能化分析。汇总基于核糖核酸调节子的体外即时检测应用,重点总结toehold开关介导的病原菌核酸检测和核糖开关参与的小分子检测。讨论当前无细胞即时检测的特点、挑战和发展趋势,为开发新型核糖核酸调节子和即时检测工具提供思路和参考。

摘要：聚合物即时检测(POCT)芯片通道自身表面张力不足,液体在通道中前进会造成前端流动形状不稳定,或引起断流现象,严重影响检测结果。设计并制作即时检测芯片,利用二氧化钛(Ti O_2)亲水浸渍提拉涂膜的方法对芯片通道进行改性研究。研究结果显示,亲水涂层使材料表面羟基含量提高,增强了其亲水性;亲水涂覆后,液体在芯片通道中流动形状与流动速度稳定;亲水膜表面成膜质量较好,成膜厚度在百纳米级,不会影响通道微结构; c Tn I荧光检测峰值稳定。

摘要：针对病原体的核酸即时检测需求,设计了一种集核酸提取和扩增功能于一体的微流控芯片,利用一次性注射器驱动芯片上的液体流动,借助紫外线验钞笔便可用肉眼直接读出核酸检测结果。芯片分为提取区、混合区和扩增区,在提取区设计了裂解池和清洗池,利用磁珠法完成核酸提取;在混合区设计了洗脱池、扩增试剂池和方波型混合器,用于核酸的洗脱以及与扩增试剂的混合;在扩增区,为了实现多靶标检测,一共设计了16个扩增反应池,采用一种滑动式芯片结构,实现各反应池之间的物理隔离。采用模拟仿真和实验,对方波混合器的混合性能进行了验证,表明其可以实现核酸洗脱液与扩增试剂的均匀混合。在微流控芯片上,利用荧光素钠溶液模拟了环介导等温扩增反应过程,证明了滑动式扩增反应池结构能够满足多靶标检测的物理隔离要求。

摘要：【目的】呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus, RSV)是婴幼儿急性呼吸道感染的最常见原因。基于RT-ERACRISPR/Cas12a技术,建立一种RSV快速特异性的检测方法。【方法】针对RSV N基因保守区域设计合成特异性crRNA及酶促重组等温扩增(ERA)引物,筛选最佳扩增引物-crRNA组合建立检测体系;通过荧光法检测RSV核酸,确定检测方法的灵敏度及特异性。【结果】根据Cas12a的激活原理,针对A型及B型RSV分别设计合成RSV-crRNA1及RSV-crRNA2,二者混合加入检测体系,可同时检测到A型及B型RSV,并具有协同作用;实验筛选出一组最佳引物组合(RSV-F+RSV-R3J),最低检出限为5×10^(2) copies/mL,可在39℃恒温条件下,35 min内完成检测;该方法与其他核酸测试样本无交叉反应,只能检测出RSV核酸,具有较高的特异性。【结论】基于RT-ERA-CRISPR/Cas12a技术,成功建立了一种灵敏度高、特异性强、快速、低成本的RSV核酸检测方法,该方法不依赖复杂的检测仪器,任何能够提供恒温环境和检测荧光信号功能的仪器均可适用。因此,该方法适用于RSV即时检测,还可能应用于其他病原体感染的检测。

摘要：研究旨在建立一种快速检测圆圈病毒人源1型(GyH1)的方法。试验通过比对GenBank中GyH1基因组序列,基于序列保守区设计特异性引物和探针,经过筛选和优化,建立GyH1实时荧光重组酶介导核酸等温扩增(RAA)检测方法。结果显示:建立的实时荧光RAA方法可在20 min内鉴定GyH1;该方法特异性强,与圆圈病毒禽源1型(GyVg1)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)、新城疫病毒(NDV)、禽传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、鸡细小病毒(ChPV)、J亚群禽白血病病毒(ALV-J)、鸡毒支原体(MG)、禽滑液囊支原体(MS)无交叉反应;敏感性高,筛出的引物探针可有效扩增,优化反应条件后检测限可达10~2拷贝/μL;重复性好,批内和批间变异系数均小于4%。采用该方法与荧光定量PCR方法同时对231份样品进行检测,两者检测结果相符。研究表明,成功建立了实时荧光RAA方法,可用于GyH1的鉴别检测,为基层快速检测GyH1提供了新的技术手段。

摘要：糖尿病已成为继心血管疾病和癌症之后威胁人类健康的三大杀手之一.糖化血红蛋白（glycated hemoglobin,Hb A1c）是反映血糖控制状况的重要指标,可预示并发症发生的风险,具有重要的临床研究价值.美国糖尿病协会（ADA）与世界卫生组织（WHO）于2010~2011年相继推荐其为糖尿病诊断的新标准,并采用Hb A1c≥6.5%作为临床诊断切点.中国关于Hb A1c的研究起步较晚,尚无国家化的标准检测方法,检测质量与国际标准法存在较大差距.同时,由于种群之间的差异性,国际标准所推荐的糖尿病诊断切点,不一定适用于中国人群.为此,本文综述了：*** A1c的测定标准法,简介了国际及国家标准法的发展建立,以及两类标准方法的相互关系;*** A1c的临床检测,概述了亲和层析法、免疫法及酶法在其测定中的应用;*** A1c的即时检测,介绍了数种商业化即时检测仪的信息.旨在为促进国内Hb A1c临床检测技术的发展以及家用化Hb A1c检测仪的设计提供信息支持.

摘要：逆转录-实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)已经广泛应用于核酸检测。然而,如何实现准确、快速即时检测仍然是亟待解决的关键问题。本研究设计了一种使用胍基修饰的荧光碳点(GCDs),用于高灵敏度以及高特异性的快速核酸检测。当GCDs与分子信标(Beacon)通过氢键作用结合后,GCDs的荧光被Beacon的荧光基团淬灭。当遇到目标核酸(Target DNA)之后,Beacon与Target DNA进行碱基互补配对,GCDs与Beacon脱离,GCDs自身荧光恢复。基于这种灵敏的荧光“off-on”,可实现在5 min内快速准确核酸检测,并可检测到体系内0.005 fmol∙L^(−1)(约300 copys∙mL^(−1))的核酸序列,相比于RT-qPCR所需要的2–4 h,该方法不需要进行核酸扩增,缩短了检测时间,有望为目前的核酸检测提供一个便捷有效的方法。

摘要：核酸检测在临床疾病诊断、公共卫生、食品安全、分子育种、法医鉴定等领域发挥着重要的作用。常规实验室核酸检测分为样品预处理、核酸提取和扩增检测等3个步骤,需要在实验室分区域分步进行,需要多步手工操作和配套的多台仪器设备,操作繁琐,整个检测流程耗时长,且易产生交叉污染。因而发展全集成自动化的核酸检测及分析系统是必然趋势。目前便携式全集成核酸分析系统更是需求紧迫,借助微流控技术,有望实现相关系统的设计需求,为满足床旁检测和现场即时核酸检测提供可能。综述便携式全集成核酸检测系统所涉及的核酸生物检测技术和全集成核酸分析核心器件技术,对比一些代表性的全集成核酸分析系统,概括出具有多学科交叉化、技术路径多样化、高度集成化和功能拓展化的技术特点。最后,面对分子诊断需求复杂、快速检测要求高、全自动操纵和低成本的挑战,概述便携式全集成核酸检测系统技术的发展方向。

摘要：快速、灵敏检测食品中各类危害因子是保障食品安全,提高人类健康水平的关键所在。免疫层析试纸条具有成本低廉、操作简单、检测时间短、不依赖复杂设备和专业技术人员等优点,是食品安全现场快速筛查检测的主要技术手段。多重免疫层析试纸可提高检测通量,缩短总体分析时间,为食品中多种危害因子的同时检测提供技术保障。作者介绍了5种常用的信号输出模式(比色、荧光、表面增强拉曼散射、化学发光和磁信号),并简述了上述信号输出方式整合多重免疫层析技术同时检测食品危害因子的研究进展,旨在为多重免疫层析试纸的设计、构建及应用提供一定的理论依据。