摘要：目的·研究维生素E能否对双酚A(BPA)的雌性性激素干扰效应起拮抗作用,探索拮抗作用的适宜浓度。方法·提取大鼠卵巢原代颗粒细胞。不同浓度BPA(0、0.01、0.1、1、10、100μmol/L)孵育48 h后,收集并用ELISA法测定细胞培养基中的雌二醇(E_2)及孕酮(P_4)浓度。采用健康女性卵泡液中的平均浓度(简称"人体平均浓度",5μmol/L)或高浓度(25μmol/L)维生素E(α-生育酚)单独孵育或与BPA(10、100μmol/L)共同孵育颗粒细胞48 h后,测定培养液中性激素浓度。结果·10μmol/L及100μmol/L BPA可使大鼠原代卵巢颗粒细胞分泌性激素水平呈浓度依赖性降低(P0.05)。结论·人体平均浓度及高浓度维生素E均可拮抗BPA导致的性激素降低效应,而高浓度维生素E的改善效果相对显著。

摘要：本试验通过分离与培养小鼠、鸡不同等级卵泡颗粒细胞,比较其培养和形态差异,并对提取方法进行优化。试验选取3周龄雌性昆明系小鼠,200日龄的海蓝褐蛋鸡,分别采用优化的方法分离培养卵巢颗粒细胞,通过观察细胞形态、H.E.染色和间接免疫荧光,对比不同种属颗粒细胞提取方法、培养条件及生长状态。结果表明,与采用机械法分离的小鼠卵巢颗粒细胞相比,采用酶消化法分离的鸡不同等级卵泡颗粒细胞贴壁较快、生长速度快、伪足较多。分析得出小鼠与鸡不同等级卵泡颗粒细胞的分离,培养条件均有差异,且对已有提取方法进行优化,所培养的颗粒细胞状态良好。

摘要：为研究TGF-β通路对猪颗粒细胞增殖、凋亡的影响,本研究对TGF-β通路基因进行调控处理,设计并筛选可高效干扰TGFβRⅠ及TGFβRⅡ表达的载体,转染不同干扰载体及添加10 ng/m L TGFβ1和25 ng/m L FSH,采用Westernblot、MTT和流式细胞法检测不同处理对颗粒细胞TGFβ RI和TGFβ RII蛋白表达量和细胞增殖凋亡的影响。结果表明:成功筛选出干扰效率最高的p OSP1-TGFβRⅠ-sh5和p OSP1-TGFβRⅡ-sh3载体,对TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的抑制率分别为78.00%和84.10%;转染后TGFβRⅠ干扰组的TGFβRⅠ蛋白表达量显著低于其阴性对照组;TGFβRⅡ干扰组、TGFβ1组和FSH组的TGFβRⅡ蛋白表达量显著低于其阴性对照组;TGFβ RI干扰组、TGFβ RII干扰组的增殖抑制率极显著高于PLL3.7空载体组,TGFβ 1组细胞增殖抑制率极显著高于空白对照组且FSH组的增殖抑制率显著高于空白对照组;TGFβRⅠ干扰组和TGFβRⅡ干扰组细胞凋亡率极显著高于PLL3.7空载体组;TGFβ1组和FSH组细胞凋亡率极显著高于空白对照组。总之,RNAi介导的TGFβRⅠ和TGFβRⅡ沉默和外源因子(10 ng/m L TGFβ1和25 ng/m L FSH)引起的TGFβRⅡ蛋白下调,均会减弱TGF-β信号传导通路对卵泡颗粒细胞的促进作用,进而抑制卵泡颗粒细胞的增殖,促进其凋亡。

摘要：抑制素βA基因(inhibin-βA,INHβA)的表达与绵羊(Ovis aries)的产羔数有一定关系。为了观察INHβA对绵羊发情性状的影响以及在目的基因沉默后,引起的发情性状相关激素变化的情况,本研究利用RNAi技术构建载体干扰INHβA的表达。根据GenBank上绵羊INHβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段,通过酶切和测序验证,成功构建了4个INHβA基因RNAi质粒载体PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G-shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3(I-3)、PLLU2G-shINHβA-4(I-4)和1个空载体(赛亚公司的PLLU2G)阴性对照;在成功分离卵巢颗粒细胞并建立培养体系后,利用Lip2000介导干扰载体转染细胞,通过荧光定量RT-PCR检测干扰前后INHβA的表达量。结果显示,4个干扰载体的干扰效率依次为34%,58%,39%,19%,其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好。通过卵巢注射干扰载体I-2,检测干扰后绵羊血清INHβA、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和雌二酮(E2)的含量。结果显示,注射干扰载体后INHβA和FSH分别呈现明显的下降和上升波峰,而血清中LH和E2水平没有发生明显变化。

摘要：抑制素βA基因(Inhibin-βA,INHβA)的表达与绵羊(Ovisaries)的产羔数有一定关系。利用RNAi技术构建载体用来干扰INHβA的表达。根据GenBank上绵羊INHβA(GenBank:NW_004080167.1)mRNA的序列设计干扰片段4个PLLU2G-shINHβA-1(I-1)、PLLU2G--shINHβA-2(I-2)、PLLU2G-shINHβA-3(I-3)、PLLU2G-INHβA-4(I-4),其中I-2对INHβA表达的沉默效果最好。实验研究结果为绵羊繁殖性状和发情性状的研究奠定了良好的理论基础,构建的干扰载体有望进一步应用于提高绵羊繁殖性能的生产实践中。

摘要：旨在探究SRD5 A2基因对山羊产羔性状相关基因表达的影响。本研究选择健康的(2~3岁)黔北麻羊经产母羊3只,体重约32 kg,采集卵巢组织并成功培养卵巢颗粒细胞。通过在线软件设计SRD 5A2基因的4对siRNA干扰序列和1对阴性对照序列,连接pGPH1/GFP/Neo载体后,将构建成功的干扰载体转染至黔北麻羊卵巢颗粒细胞。利用qRT-PCR方法筛选出干扰效率最佳的载体,检测其对SRD 5A2基因表达的影响。运用qRT-PCR检测沉默SRD 5A2基因对山羊产羔性状相关基因骨形态发生蛋白15(BMP 15)、生长分化因子9(GDF 9)、骨形态发生蛋白1B(BMPR-1B)和卵泡刺激素β亚基(FSHβ)表达的影响。结果表明,本试验在培养黔北麻羊卵巢颗粒细胞的基础上,成功构建了黔北麻羊SRD 5A2基因的干扰载体,并筛选出shRNA-SRD5A2-1干扰效果最佳(P<0.01);抑制SRD 5A2基因表达后,qRT-PCR检测产羔性状相关基因BMP 15、BMPR-1B、GDF 9和FSHβ的表达量均显著降低,BMP 15的表达量极显著低于shRNA-NC对照组(P<0.01),BMPR-1B、GDF 9和FSHβ的表达量显著低于shRNA-NC对照组(P<0.05)。本研究成功构建了SRD 5A2基因干扰载体并转染至卵巢颗粒细胞,发现体外沉默SRD 5A2基因可抑制产羔性状相关基因的表达,提示SRD 5A2基因与黔北麻羊产羔性状密切相关,本试验结果为进一步研究SRD 5A2基因对黔北麻羊产羔性状的调控机制提供了基础。

摘要：细胞和细胞外微环境之间的机械力对于许多生理过程至关重要,如癌症转移和干细胞分化等。有丝分裂在所有这些过程中都起着至关重要的作用。因此,对有丝分裂过程中作用力的深入了解有助于深入了解疾病和疾病治疗。本文开发了一种基于单层荧光颗粒的三维牵引力显微镜方法,用于测量有丝分裂细胞的弱牵引力(~10 Pa)。量化了整个细胞周期中,人类卵巢颗粒细胞(KGN细胞)产生的三维牵引力。本文的研究结果揭示了细胞牵引力在细胞周期中如何变化。