摘要：利用RT-PCR技术从溆浦鹅卵泡的颗粒细胞总RNA中扩增出了抑制素α亚基成熟区序列,经RCR扩增出354bp片段,该片段与pMD 18T载体连接,转化JM109感受态细胞,所得阳性克隆进行双酶切鉴定和PCR鉴定,并进行了测序分析,得到的克隆序列与设计的序列基本一致。表明已成功地获得了抑制素α亚基编码序列的克隆载体。

摘要：利用RT-PCR技术从鹅的卵泡颗粒细胞中得到抑制素的总RNA,根据Genbank中家禽的抑制素基因的序列设计引物,扩增克隆抑制素α亚基片段,构建出克隆和表达载体,将鉴定为阳性的原核表达载体质粒(IB-pET28a-BL21,)经IPTG诱导4.5h后收集菌体,经电泳可见约1.4kD的蛋白带。

摘要：为了克隆也木勒白羊抑制素α(inhibinα,INHα)亚基基因和表达其重组蛋白质,本试验采集发情期也木勒白羊卵巢组织,并从中快速抽提总RNA,以此作为模板并根据白羊INHα亚基基因编码区序列(GenBank登录号:XM_004004955.1)设计合成1对引物,经反转录扩增获得了也木勒白羊INHα亚基基因编码区全长序列。并将扩增产物克隆到表达载体(pEGFP-N1)的ScalⅠ和EcoRⅠ酶切位点之间,构建重组质粒pEGFP-INHα并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,后进行鉴定、测序,证明成功构建了INHα亚基基因的真核表达载体。将也木勒白羊INHα亚基基因与人、大猩猩、牛等动物的INHα亚基基因序列进行同源性比对分析,相似度都在50%以上,说明了抑制素基因具有高度保守性。用RT-PCR和Western blotting方法验证了INHα亚基基因的真核表达载体在BHK细胞中的成功表达及蛋白表达。