摘要：目的探讨C-MYC和PD-L1基因和蛋白在间变性淋巴瘤激酶阴性的间变性大细胞淋巴瘤(ALK-ALCL)患者中的表达,探讨两者在ALK-ALCL发病机制中的作用以及与临床病理特征的关系。方法收集福建省立医院病理科2003年1月至2017年1月ALK-ALCL患者37例,应用荧光原位杂交(FISH)技术检测C-MYC和PD-L1基因异常情况;应用免疫组织化学方法检测C-MYC和PD-L1蛋白表达情况。统计分析C-MYC和PD-L1基因及蛋白异常的关系以及与各临床病理参数间的关系。结果37例ALK-ALCL肿瘤组织中,C-MYC蛋白阳性率为45.9%(17/37),PD-L1蛋白表达阳性率是37.8%(14/37),C-MYC和PD-L1蛋白表达之间存在显著相关性(r=0.990,P=0.014)。C-MYC和PD-L1蛋白表达率均随ALK-ALCL临床分期的增加而升高,且在国际预后指数(IPI)高危组中表达率高于低危组(P<0.05)。FISH检测结果:37例ALK-ALC肿瘤组织中,检测到C-MYC基因多拷贝9例(24.3%),所有病例均未检测到C-MYC基因断裂;检测到PD-L1基因扩增2例(5.4%)。37例ALK-ALCL患者中,C-MYC蛋白阳性表达组3年总生存率明显低于阴性表达组,差异具有统计学意义(P<0.01);PD-L1蛋白阳性表达组3年总生存率明显低于阴性表达组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论C-MYC蛋白和PD-L1蛋白表达与ALK-ALCL临床分期、国际预后指数以及总生存率相关,可作为判断ALK-ALCL恶性程度和预测预后的指标;ALK-ALCL中PD-L1的表达可能受C-MYC基因的调控,可能为设计针对部分ALK-ALCL患者的靶向治疗和免疫检查点阻断的组合治疗提供了生物学基础。

摘要：目的应用双色荧光杂交芯片技术检测CYP2C19单核苷酸多态性,为相关研究提供方法和依据。方法设计丙烯酰胺标记引物,以87位中国江苏地区汉族健康志愿者的基因组DNA为模板进行目标序列的PCR扩增,并将产物固定于氨基玻片上,变性后再与荧光标记的寡核苷酸探针进行杂交,通过基因芯片扫描仪检测荧光信号,判断CYP2C19基因型,并采用DNA直接测序法验证结果。结果所有芯片法检测结果均经DNA直接测序验证,2种方法分型结果完全一致。87位志愿者中CYP2C19*2和CYP2C19*3的发生频率分别为9%和42%,其中CYP2C19弱代谢者(CYP2C19*2/*3、*3/*3)的发生频率为8%。结论双色荧光杂交芯片技术检测CYP2C19单核苷酸多态性特异性高,其高通量特点适用于大规模人群的检测。

摘要：目的自主研制用于检测白血病染色体PML/RARα融合基因的双色荧光原位杂交(FISH)检测试剂盒。方法根据染色体基因图谱,选定合适的细菌人工染色体(BAC)克隆重叠群分别作为PML基因探针和RARα基因探针。对入选的BAC克隆进行STS-PCR鉴定和荧光原位杂交鉴定。最后将完成鉴定的PML探针标记红色荧光素,RARα探针标记绿色荧光素,加上配套试剂组成FISH检测试剂盒。用双盲法检测白血病临床样本37例,对自制探针和同类进口探针在各项技术参数上进行对比研究。结果自制试剂盒检测PML/RARα融合基因与进口探针相比,其阴、阳性率和同类进口产品完全符合;自制探针的荧光信号更强,信噪比更高。结论自主研制的PML/RARα融合基因FISH检测试剂盒设计合理、质量可靠,可用于替代价格昂贵的进口产品。

摘要：目的 通过荧光原位杂交(FISH)方法检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因重排。 方法 根据ALK断裂重排方式及特点，设计并制备红/绿双色荧光探针。以人外周血培养细胞为检测对象评价ALK融合基因检测探针的敏感性和特异性，以NSCLC石蜡组织样本为对象进行ALK基因重排检测以评价探针的性能。 结果 本研究制备的荧光探针在EB病毒(EBV)转化的人淋巴细胞检测中的特异性和敏感性均可达到100%。在对2例NSCLC患者石蜡包埋组织样本检测中，检测阴性、阳性各1例，检测结果与免疫组织化学检测结果一致。 结论 本研究中制备的双色荧光探针可用于NSCLC ALK基因重排的检测。

摘要：目的自主研制可以检测白血病染色体MLL基因断裂的双色FISH检测试剂盒。方法根据染色体基因图谱,选定合适的BAC克隆重叠群分别作为MLL基因断裂点5'端探针和3'端探针。采用缺口平移法,制作出5'端标记绿色荧光素,3'端标记红色荧光素的探针。用双盲法检测白血病临床样本40例,对自制探针和同类进口探针在各项技术参数上进行对比研究。结果自制探针检测MLL基因断裂(易位)的阴、阳性率与同类进口产品完全相符;在Spectrum Green和Cy3?v1通道中,自制探针的平均荧光信号强度比进口探针明显提高(自制探针分别为:2930.5±38.00,2766±59.54;进口探针分别为:2239±45.13,1986±59.56;P<0.01),自制探针信噪比分别为进口探针的2.4倍和1.9倍。结论自制的MLL基因FISH检测探针设计合理、质量可靠,与进口探针相比,荧光信号更强,信噪比更高,将来可能替代价格昂贵的进口产品。