摘要：原虫生活史复杂,大部分难以通过体外培养完成整个生活史,缺乏高效的基因编辑系统。CRISPR/Cas9系统可以通过人工设计的方式,实现基因的精确、高效、快速编辑,被广泛应用于基因工程各个领域。CRISPR/Cas9系统为原虫的未知功能基因研究开辟了新途径。本文介绍CRISPR/Cas9系统的原理和目前在寄生原虫中的基因定位、基因功能研究、高通量基因家族筛选等方面的应用。

摘要：采用体外产气量法 ,以球磨与未球磨玉米秸细胞壁为底物 ,对瘤胃微生物不同区系降解植物细胞壁的相对贡献和发酵特征进行了研究。用化学试剂和抗生素来分离瘤胃细菌、原虫和真菌 ,并设计下列微生物区系 :全瘤胃液 (WRF)、细菌 (B)、原虫 (P)、真菌 (F)、细菌 +原虫 (B +P)、细菌 +真菌 (B +F)、原虫 +真菌 (P +F)和负对照(CON)。结果表明 ,细胞壁经球磨后可以显著提高瘤胃微生物的产气量和降解率 (P <0 .0 1) ,但不改变发酵类型 ;不同微生物区系的产气量和降解率具有极显著的差异 (P <0 .0 1) ,WRF的产气量和降解率最高 ,其次是混合培养(B +P、P +F、B +F) ,而单培养 (B、P、F)的最低 (P <0 .0 1)。结果说明植物细胞壁在瘤胃内的降解是在细菌、原虫和真菌的协同作用下完成的 ,对植物细胞壁的降解程度可能不是某一种或二种微生物所能及第的。B +P的产气量和降解率仅次于WRF ,表明瘤胃细菌和原虫在降解植物细胞壁过程中存在协同效应 ,对细胞壁降解的贡献率较大。另外 ,随着产气量和降解率的提高 ,发酵液的pH值降低、总VFA、氨态氮和甲烷气体的含量升高 ,进一步证明植物细胞壁的发酵程度提高了。

摘要：为建立一种能同时快速检测弓形虫、环形泰勒虫、新孢子虫3种甘南牦牛血液原虫的多重PCR检测方法,掌握3种血液原虫在甘南牦牛中的流行情况,本研究以弓形虫hypothetical protein基因、环形泰勒虫Tams1基因、新孢子虫Nc-p43基因为靶标设计3对特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立检测3种血液原虫的多重PCR方法,并检测甘南地区629份牦牛血清样品,进行流行病学分析。结果显示,建立的牦牛3种血液原虫多重PCR检测方法,具有特异性强、敏感性高和重复性好的优点,检测弓形虫、环形泰勒虫和新孢子虫DNA的最低浓度分别为0.01、0.02、0.01 ng·μL^(-1);流行病学调查结果显示,弓形虫、环形泰勒虫和新孢子虫的阳性率分别为4.29%、3.66%、5.88%,并存在混合感染现象,整体混合感染率为13.68%;季节性流行病学分析显示,3种原虫单一感染率均为冬季最高、春季最低(P>0.05),整体感染率为冬季最高、夏季最低(P>0.05)。按不同年龄分析,0~3岁牦牛3种原虫的整体感染率为27.83%,大于3岁的整体感染率27.46%(P>0.05)。分析风险因素发现,季节和年龄均不是牦牛感染3种原虫的风险因素(P>0.05)。本研究成功建立的多重PCR检测方法,可用于牦牛弓形虫、环形泰勒虫和新孢子虫的鉴别检测和流行病学调查,并检测了甘南地区牦牛三种血液原虫的流行情况,为该病的预防提供了重要的数据支撑。

摘要：以4只瘘管山羊为试验动物,采用4×4拉丁方设计,使用克隆测序、遗传指纹以及细胞显微计数等技术,研究以羽毛粉(A)、玉米蛋白粉(B)、豆粕(C)和鱼粉(D)4种蛋白补充料分别配合的混合日粮对瘤胃细菌和原虫群体结构的影响。结果表明:细菌的***、***、R-7、Roseburia faecalis、Uncultured T33H60F48、Uncultured GRANT42及1个尚不能定性的类群在组间存在显著差异(P<0.05);原虫的内毛虫、前毛虫、头毛虫、等毛虫4个类群在处理间差异显著(P<0.05)。综上可见,蛋白质源对瘤胃细菌和原虫类群结构有显著影响。

摘要：试验旨在研究苜蓿皂苷对山羊瘤胃原虫体外发酵功能的影响。选择4只体况良好、安装永久性瘤胃瘘管的徐淮白山羊,晨饲后3 h采集瘤胃液,分离出原虫,采用体外批次培养设计进行体外发酵。根据苜蓿皂苷的添加量分为4个处理组:对照组不添加(0),3个试验组分别添加1%、2%及3%的苜蓿皂苷,每组3个重复,体外厌氧培养24 h后,分别测定pH值、氨态氮(NH3-N)浓度、微生物蛋白(MCP)浓度及挥发性脂肪酸(VFA)含量。结果表明:添加1%～3%的苜蓿皂苷对瘤胃原虫培养液的pH值、NH3-N浓度均无显著影响(P>0.05),但降低了乙酸、丙酸、丁酸和TVFA浓度,且乙酸/丙酸有升高趋势(P>0.05);此外,2%和3%的苜蓿皂苷极显著降低了培养液中MCP浓度,较对照组分别降低24.5%和17.1%。提示苜蓿皂苷对瘤胃原虫有一定的抑制作用,且对原虫发酵产生丙酸的抑制效应大于乙酸。

摘要：本试验采用自行研制的仿生型人工模拟瘤胃连续发酵装置,研究体外连续培养条件下不同稀释率对细菌蛋白、原虫蛋白以及pH、氨氮浓度的影响。试验以5只瘤胃瘘管徐淮白山羊提供瘤胃液,按单因子三水平试验设计,在4:6精粗比条件下,稀释率分别为0.04/h、0.06/h、0.08/h进行体外连续培养。结果表明:随着稀释率的提高,原虫、细菌蛋白含量都有所下降,0.04/h与0.08/h组间差异极显著(P<0.01)、0.06/h与0.08/h组间差异显著(P<0.05)。3种稀释率条件下所记录的培养液pH值(6.22～6.94、6.48～6.94、6.55～6.94)和培养液氨氮浓度(5.11～8.83、4.28～8.50、2.80～7.67 mg/dL)都在微生物生长所能耐受的范围内。培养液pH随稀释率的升高而升高、而氨氮浓度则随稀释率的升高而下降,且组间皆有显著差异(P<0.05)。综上,稀释率影响培养液原虫和细菌蛋白的含量,原虫蛋白、细菌蛋白以及氨氮浓度随稀释率的提高而降低。

摘要：本文以4只瘤胃瘘管山羊为试验动物,研究碳水化合物结构对山羊瘤胃发酵、原虫种群结构及吞噬速率的影响。设置精粗比为10∶90、30∶70、50∶50、70∶30的4种日粮(A、B、C、D组),其干物质中中性洗涤纤维(NDF)分别为54.87%、44.23%、33.72%、23.23%。采用4×4拉丁方设计,使用荧光标记细菌技术测定原虫吞噬细菌的速率。结果表明:日粮结构影响瘤胃发酵,以B组微生物活力较强、NDF降解率较高、pH也相对稳定;原虫吞噬速率与日粮NDF含量间呈三次方曲线关系(Y=-0.183065X2-0.003092X3+467.117113,R2=0.86795)。吞噬速率与细菌(原虫)密度呈负(正)相关关系,方程为Y=445.514-3.078X1+1.864X(2R2=0.839、Y为吞噬速率;X1和X2为细菌和原虫密度)。日粮结构显著影响原虫种群结构,内毛虫和等毛虫随NDF含量降低而增高,而双毛虫和头毛虫则相反。内毛虫与双毛虫和头毛虫的吞噬速率分别为361.9、606.3个/h和607.5个/h,种属间差异显著,但不同种属吞噬速率随日粮结构变化的趋势基本一致。综上所述,日粮结构可以引起瘤胃发酵状态的改变,从而影响原虫种群结构和吞噬速率。

摘要：试验选取4头安装有永久性瘤胃、十二指肠和回肠瘘管的荷斯坦泌乳奶牛,采用4×4拉丁方试验设计,研究日粮中添加亚油酸(LA)和二十二碳六烯酸(DHA)对瘤胃原虫中奇数碳链脂肪酸和支链脂肪酸的影响.试验结果表明:奇数碳链脂肪酸和支链脂肪酸(OBCFA)是原虫脂肪酸的重要组成部分,与对照组相比,日粮中单独添加LA或DHA对瘤胃原虫中主要OBCFA的含量无显著影响,而当LA和DHA协同添加时C15∶0和C17∶0的含量显著降低(P<0.05),但对异构酸和反异构酸的含量无显著影响.

摘要：选用12只雄性成年东北细毛羊,按随机区组试验设计,分别饲喂4个水平(分别为0, 100, 200, 300mg/kg)丝兰皂甙,研究了不同水平丝兰皂甙对绵羊瘤胃内纤维素酶、总脱氢酶活性及原虫数的影响。分别于试验当天及第7, 14,21, 28d采食后2h取瘤胃液,测定各种酶活及原虫数目,试验结果表明,随着丝兰皂甙添加水平的升高,脱氢酶活性有上升的趋势,但各组差异不显著(P&gt; 0. 05);纤维素酶活性随着丝兰皂甙添加水平的升高,表现出上升的趋势,其中300mg/kg组同对照组、100mg/kg组相比达显著水平(P&lt; 0. 05);各处理组内部原虫数随天数的增加变化无明显规律,但各处理组间有随着丝兰皂甙添加水平的升高,平均原虫数表现出下降的趋势, 300mg/kg组显著低于对照组和100mg/kg组(P&lt; 0. 05),而同200mg/kg组差异不显著(P&gt; 0. 05)。

摘要：近年鉴定到Metacaspase、组织蛋白酶B、组织蛋白酶D、核酸酶(Endo G、Tatd、Fen-1)等分子参与了原虫的凋亡,但不清楚这些分子在凋亡信号途径中的位置及相互关系。实验结果显示,Metacaspase可能具有调节原虫凋亡与细胞周期等功能,但是Metacaspase与Caspase的活化方式及作用底物不同,提示原虫存在与多细胞动物不同的凋亡途径;在疟原虫及利什曼原虫中发现其线粒体及溶酶体参与了其凋亡,提示原虫可能具有类似哺乳动物的溶酶体-线粒体凋亡途径;在利什曼原虫和锥虫中发现存在通过核酸酶而不依赖Caspase的凋亡途径。阐明原虫的凋亡机制有助于通过设计新药物诱导原虫凋亡来达到治疗疾病的目的。