摘要：背景:家兔血清是基础研究中常用的实验样品,双向凝胶电泳是蛋白质组学中最经典的蛋白分离技术,因此建立稳定的家兔血清蛋白质组双向凝胶电泳技术体系非常重要。目的:建立家兔血清蛋白分离的双向凝胶电泳技术体系。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2008-06/07在武警医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室完成。材料:健康家兔6只,由唐山市职业技术学院动物中心提供。方法:去除高丰度蛋白前后的健康家兔血清样品,分别加入水化上样液使样品中的蛋白充分裂解,还原烷基化后上样,被动水化14h。等电聚焦电泳后进行SDS-PAGE电泳。凝胶银染后用PDQuest7.4软件进行分析。主要观察指标:①高丰度蛋白去除效率。②2-DE图谱。结果:双向电泳图谱清晰,分辨率高,重复性好。未去除高丰度蛋白的血清2-DE图效果优于去除高丰度蛋白后的血清2-DE图。结论:成功建立家兔血清蛋白质双向凝胶电泳技术,将为进一步开展疾病的血清蛋白质组学研究奠定基础。

摘要：目的:建立并优化白细胞介素1β致大鼠乙酸性胃溃疡复发模型大鼠蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术。方法:实验于2005-04/2006-02在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室、卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室完成。①选用成年SD大鼠60只,雌雄不拘。按随机数字表法分为2组:对照组、模型组,每组30只。采用乙酸复制胃溃疡动物模型及白细胞介素1β复制胃溃疡复发动物模型,正常对照组施予相同的饮食方案。②两组大鼠于复发模型建立成功后24h禁食,48h后处死,收集胃组织,在组织样品离体后立即以冰盐水冲洗以去除组织液和血细胞,并于30min内入液氮速冻,采用化学和高速机械法进行胃组织裂解。采用AmershamBiosciences公司专门针对蛋白质组学研究中的蛋白质抽提方法设计的2DQuantKit定量试剂盒,从而实现准确的蛋白质定量。为了尽量可能多分离蛋白质,选择pH值范围(pH3￣10)的固相线性24cm干胶条和125g/L的均匀SDS聚丙烯酰胺凝胶,采用初始电压为2.5W/胶电泳30min,然后以17W/胶恒功率电泳,直至溴酚蓝指示线到达凝胶底边处停止电泳。结果:以固相pH梯度-IPG胶条(pH3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了两组大鼠胃组织斑点分布均匀、数目较多的双向凝胶电泳图谱。结论:通过对蛋白质双向凝胶电泳的建立及技术的优化,获得了适合于研究胃溃疡复发蛋白质组差异表达。

摘要：背景:双向凝胶电泳是目前最好的蛋白质分离方法,然而胆汁样品中的盐、脂和蛋白酶对双向凝胶电泳干扰较大,影响电泳图谱的重复性。目的:通过对胆汁样品双向凝胶电泳的几个关键环节的分析,建立起一种适合于有效分离胆汁蛋白质的双向凝胶电泳分离方法。设计、时间及地点:胆汁双向凝胶电泳图谱对照实验,于2008-03/11在重庆市神经病学重点实验室完成。材料:胆汁标本取自于重庆医科大学附属第一医院肝胆外科,于肝移植过程中从供体中取得。方法:将标本分别按3种不同方法进行处理:①2D-Clean-up试剂盒处理胆汁标本:用裂解液,7mol/L尿素,2mol/L硫脲,质量浓度为0.4g/L的过硫酸铵,65mmol/L二硫苏糖醇,质量浓度为0.2g/L的载体两性电解质溶解沉淀过夜。②在胆汁标本中加入4倍体积的预冷丙酮,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。③在胆汁标本中加入4倍体积的预冷三氯乙酸/丙酮混合液,用预冷的丙酮洗涤沉淀,然后用真空冻干机抽干,用裂解液溶解沉淀过夜。经过一维等电聚焦和二维SDS-PAGE电泳分离人胆汁蛋白质组。将切取的蛋白质点进行脱色,酶解,萃取,冷冻抽干后,进行质谱鉴定。主要观察指标:胆汁双向电泳图谱上蛋白质点数目,位置及重复性的比较。结果:3种方法均能得到理想的一向电泳等电聚焦,与单纯的丙酮沉淀法相比较,但三氯乙酸/丙酮沉淀法损失了较多的中小分子量的蛋白质,因此不适合于胆汁标本的处理。与2D-Cleanup试剂盒处理法相比,丙酮沉淀法纯化胆汁内盐、脂较丰富,去除干扰成分,具有较好的效果,具有成本低廉、操作简便等优势。结论:通过优化胆汁蛋白质提取、上样量和双向电泳重复性检测等步骤,建立了人胆汁双向凝胶电泳的方法,丙酮沉淀与双向凝胶电泳技术的结合是获取人胆汁蛋白质组的一种有效方法。

摘要：【研究目的】血浆蛋白组成复杂、信息含量丰富。血浆蛋白质结构和数量的改变,对疾病诊断和治疗具有重要的意义;【方法】双向电泳技术是蛋白质组研究中比较常用的一种蛋白质分离技术。根据血浆蛋白动态范围大,高丰度蛋白对分析存在干扰的特点,设计了两种实验方案,并比较了这两种方案的优缺点,为血浆作为奶牛疾病诊断标记的应用提供参考;【结果】使用热SDS法处理样品可分离出230个可以重复的蛋白点。Aurum Affi-Gel Blue Mini columns除白蛋白柱处理样品分离了156个可重复的蛋白点;【结论】热SDS法处理血浆样品联合pH4～7的IPG胶条的方案,步骤简单,分离效果好。

摘要：目的探索肝纤维化形成过程中肝组织蛋白质组的变化，部分解析肝纤维化发生、发展的病理生理机制。方法采用四氯化碳（CCl4）诱导大鼠肝纤维化模型，应用双向凝胶电泳技术分离大鼠肝组织总蛋白质，经考马斯亮蓝染色、图像分析、识别差异表达的蛋白质点，应用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱及数据库查询鉴定差异蛋白质点。采用Westemblot、免疫组织化学方法对细胞角蛋白（CK）8、CK18进行蛋白质表达水平的验证。计量资料采用单因素方差分析中的LSD法或非参数检验中的H检验进行统计学分析。结果大鼠造模后，随时间的推移，肝纤维化评分逐渐增加（3周组〈6周组〈9周组），建立了正常大鼠和大鼠CCl4肝纤维化形成过程3、6、9周肝组织双向凝胶电泳图谱，质谱鉴定了44种差异蛋白质；采用Westemblot、免疫组织化学方法对CK8、CK18的验证结果与双向凝胶电泳结果基本一致。正常组及3、6、9周模型组CK8／CKl8蛋白相对表达量分别为：0．113士0．005／0．170±0．030、0．473±0．046／0．530±0．070、0．682±0．087／0．780±0．080、0．837±0．096／1．390±0．130，各组间差异均有统计学意义旷值分别为196．085／74．088、13．870／16．115、75．800／75．900，（P值均〈0．01）。结论CCl4大鼠肝纤维化形成与发展过程中差异表达蛋白质的功能主要涉及细胞生长、发育与分化，细胞增殖与凋亡，血管新生或重构，氧化应激，物质代谢及转运，信号转导等。

摘要：蛋白质组学是建立在高通量筛选技术的基础上发展的方法学,用于研究细胞功能网络模块中蛋白相互作用及在疾病或病变中蛋白和蛋白相互作用所发生的系统动态的差异变化;其研究技术奠基于双向凝胶电泳。及至世纪之交,随着质谱及蛋白质芯片的引进,蛋白质组学已广泛应用在生命科学上。其在医学上的应用,主要旨在发现疾病的特异性蛋白质分子或其蛋白质纹印,以揭示疾病的发生机制,也作为早期诊断、分子分型、疗效及预后判断的依据,并找出可能成为新药物设计的分子靶点,为疾病提供新的治疗方案。随着人类基因序列的完成,蛋白质组学热浪掀起了后基因组年代的序幕,人类将更深入地了解疾病和生命的本源。现就蛋白质组学10年来的发展历程、研究技术、在人类疾病中的应用及未来展望等作出精简的评述。

摘要：目的应用比较蛋白质组学技术,分析鉴定葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜差异蛋白质,筛选出葡萄膜黑色素瘤相关蛋白。设计实验性研究。研究对象手术中切除的人葡萄膜黑色素瘤标本4例以及正常人捐献眼葡萄膜标本4例。方法研磨组织提取蛋白质后,应用双向凝胶电泳进行总蛋白分离,考马斯亮兰染色,Image Master 5.0软件分析蛋白胶图。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定部分差异蛋白质点,通过MASCOT软件在NCBI数据库中检索蛋白质信息。主要指标差异蛋白质。结果建立了葡萄膜黑色素瘤和正常人葡萄膜组织的双向凝胶电泳图谱,鉴定了葡萄膜黑色素瘤与正常人葡萄膜之间差异表达的蛋白质30种,其中24种蛋白只在葡萄膜黑色素瘤中出现。葡萄膜黑色素瘤中表达上调的蛋白5种,表达下调的蛋白1种。这些差异蛋白可能执行新陈代谢酶、信号转导调节、细胞骨架、免疫调节等生物学功能。结论通过比较蛋白质组学初步筛选出与葡萄膜黑色素瘤发生演进相关的蛋白质。需要进一步验证蛋白的定位及功能。