摘要：目的：研究富血小板双向电泳分离在髋关节运动损伤中的治疗分析,提高诊疗效果。方法：考察患者的富血小板的颗粒的粒径（130 nm和290 nm）,分析富血小板的HA分子量（1.1×104 g/mol和3.0×105 g/mol）以及PNIPAm聚合量对患者的髋关节Haversian腺增生和滑膜炎及腱端炎的治疗效果。对富血小板的PNIPAm分子内及分子间疏水相互作用加强,形成疏水层,合成有机-无机杂化颗粒,设计合成结构可控、性能可调的微凝胶。结果：其中31例骨骼肌升高（110~1131μmol/L）;10例骨骼支撑力升高。对患者进行心肌酶谱测试：其中5例CK（92~125 umol/L）、CK-MB（61~312 umol/L）,骨骼淀粉酶：2例升高（125~3165 umol/L）,骨骼反应时间：1例PT〉15 s。壳聚糖微球粒径分别为：2.1、7.2、12.5μm,这些因素都促进了骨骼的生长和修复,这些因素对释放（1-β-4）D-葡糖醛酸和（1-β-3）-N-乙酰基-D-氨基葡糖双糖单元有利。该治疗方案治疗效果较好,患者得到康复。结论：采用双向电泳分析,生成患者的富血小板血浆制备其他亲水性微球,提高患者体内的富血小板再生能力,对治疗患者的髋关节运动损伤效果显著。

摘要：利用双向电泳技术对结核分枝杆菌(MTB)异烟肼(INH)耐药株和敏感株感染人源巨噬细胞(U937)后的全细胞蛋白表达图谱进行差异比较和分析,发现其中产生差异的有86个蛋白质斑点.利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱技术对其中8个差异表达蛋白质斑点进行分析鉴定,获得8个明确的肽质量指纹图谱.通过在蛋白质数据库中进行检索分析,确定这8个蛋白质中的2个为在INH耐药株感染的U937中差异表达的干细胞生长因子和主要组织相容性复合物Ⅰ类抗原,6个为在敏感株感染的U937中差异表达的微管蛋白4β、信号转导和转录激活子3、延长因子-2激酶、环指蛋白29、锌指蛋白193和SNARE Vti1a-β蛋白.实验结果显示,INH耐药株和敏感株感染后的U937表达蛋白有差异,这有助于分析解释临床中观察到的受INH耐药株感染的病例出现毒力下降、致病性下降、传染性降低以及潜伏期延长的现象.结果为针对INH耐药株进行的新疫苗的设计提供了探索方向.

摘要：本文探讨了电泳系统上槽泄露引起双向电泳凝胶蛋白点纵向拖尾问题.上槽泄露导致上槽SDS损耗,电流增大以及局部温度升高从而导致双向电泳凝胶高分子量区域蛋白点纵向拖尾.上槽泄露与上槽设计存在不足,使用者不适当操作以及上槽维护不良有关.对Ettan DALT six电泳系统而言,一旦出现上槽泄漏问题,建议更换改良后的新版上槽.电泳过程中应避免上槽泄露,SDS的不足或损耗,电流过大和电泳液温度过高.

摘要：蛋白质双向电泳是蛋白质组学研究方法之一,但蛋白质双向电泳技术体系却因物种不同而有所差异,因而蛋白质双向电泳体系的建立是进行蛋白质分离、鉴定的首要步骤。本文对福建柏叶片蛋白质提取方法、IPG胶条、等电聚焦参数设定、丙烯酰胺分离胶浓度等因子进行单因素分析,对福建柏双向电泳技术进行优化。结果表明,采用三氯乙酸-丙酮提取福建柏叶片的蛋白点多且图像清晰,p H4~7的IPG胶条最适合福建柏叶片蛋白的分离,等电聚焦参数设定为20 000 Vh,浓度为10%的分离胶进行福建柏双向电泳最好。本研究初步建立了福建柏叶片蛋白质双向电泳体系,为深入研究福建柏蛋白质组学提供依据。

摘要：蛋白质组是指特定细胞、组织或生物体在特定时间所表达的全部蛋白, 对其进行分析的学科被称为蛋白质组学[1].在蛋白质组学的诸多研究方法中, 出现最早且目前仍能提供蛋白质组分析所要求的高分辨率的唯一技术, 是双向电泳(2-D PAGE), 由于其可提高分辨率、重复性和简易性良好, 已成为蛋白质组研究的核心技术[2].2-D PAGE用于蛋白质组蛋白表达的全面分析时, 能够分离特定细胞和组织中成百上千的蛋白形式(包括翻译后的变异体).本研究中, 我们以白血病细胞系(Mo-7e细胞)为例, 采用2-D PAGE技术分离凋亡相关蛋白, 用两种常用的质谱方法MALDI-TOF/MS和ESI/MS/MS, 对其中的T点进行了鉴定.以设计的引物, 采用RT-PCR从基因组中钓取了该基因(eIF-5A), 并在***中获得表达.纯化的重组蛋白免疫家兔获得了抗eIF-5A的多抗, 为后续的eIF-5A功能研究提供了检测工具.在应用宽pH范围胶条(pH 3～10)分离白血病细胞凋亡相关蛋白的基础上, 进一步采用窄pH范围胶条(pH 4～7)分离凋亡相关蛋白, 使分离和识别差异蛋白的效果明显得到改善, 且能够识别相同区域中更多的差异蛋白.

摘要：背景:近年来对于退变腰椎间盘组织蛋白质成分改变的研究取得了很大进展,但是对于正常和退变腰椎间盘整体蛋白质成分改变的分离和差异鉴定却鲜见报道。目的:建立正常和退变腰椎间盘蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨腰椎间盘退变的生物学机制。设计、时间及地点:对比观察,于2007-06/2008-12在南方医科大学病理生理实验室完成。材料:由自愿者提供的正常和退变腰椎间盘组织各6例,年龄21～45岁,其中男9例,女3例;取材范围L3～L5。方法:氯化铯梯度离心去除正常和退变腰椎间盘组织蛋白多糖,通过固相pH梯度(IPG)等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分离蛋白质,分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行分析鉴定。主要观察指标:正常腰椎间盘及退变腰椎间盘组织IPG等电聚焦双向凝胶电泳结果。结果:双向电泳显示正常和退变腰椎间盘蛋白质图谱差异显著,从中选取16个差异明显的位点进行质谱仪分析,确定了6种具有显著性意义的差异蛋白质。结论:双向电泳可有效地分离正常和退变腰椎间盘组织蛋白质,通过质谱仪鉴定可以确定其之间差异蛋白质的性质。

摘要：为给野生大豆蛋白质组学分析提供技术支撑,以耐盐碱野生大豆叶片为材料,对Tris-饱和酚法、Tris-HCl法和TCA-丙酮法3种蛋白质提取方法进行了比较,并对蛋白上样量、等电聚焦参数及凝胶浓度进行了优化。结果表明:使用Tris-饱和酚法提取蛋白质,上样量为2 000μg,等电聚焦90 000 V·h,凝胶浓度为10%时,可获得背景清晰、蛋白点数较多、重复性较好的蛋白双向电泳图谱。

摘要：双向电泳技术是当前蛋白质组学研究中的重要技术。设计"双向电泳检测热休克处理对细菌蛋白表达谱的影响"的实验,以PGEX-4T-2大肠杆菌中可溶性总蛋白为研究对象,采用双向电泳技术筛选热休克处理后有差异表达的蛋白。实验获得了稳定性较高、分辨率和重复性较好的电泳图谱,建立了一种适于本科实验教学的双向电泳技术体系。通过该实验,学生可以掌握双向电泳技术的基本原理、实验方法以及蛋白提取的一般思路与方法。

摘要：用正交设计法研究了上样量、一向聚焦时间、聚丙烯酰胺凝胶浓度对向日葵种子差异蛋白的影响。结果表明：上样量和聚丙烯酰胺凝胶浓度是影响向日葵种子差异蛋白的主要因素;上样量为3.5mg,凝胶浓度为12.5%,一向等电聚焦时间为5h,使用pH值为3~10的18cm IPG胶条,用考马斯亮蓝法染色是向日葵种子差异蛋白进行双向电泳的较适宜体系,可分离到116个差异蛋白点。

摘要：目的:采用合适的裂解液和沉淀方法提取乳腺癌组织蛋白质,获得高分辨率、重复性好的蛋白质双向电泳图谱。方法:通过不同全细胞蛋白质裂解液和不同沉淀方法提取组织全蛋白的效果比较,设计了不同的蛋白质样品制备的方法,并对2-DE的条件进行优化。结果:确定了适合乳腺癌实体瘤组织的裂解液配方(LS IV),PEG沉淀的蛋白分布较完整,沉淀效率相对较高。结论:本方法可以应用到乳腺癌组织的蛋白提取,也可对其它组织蛋白质样品的制备和双向电泳提供借鉴。