摘要：目的研究表明APC、Survivin 2种基因表达异常在结肠癌的发生发展中具有重要意义。构建Survivin shRNA、APC功能片段双基因共表达慢病毒载体并观察其能否于HT-29结肠癌细胞中成功表达,同时观察其是否能够对结肠癌细胞凋亡产生影响。方法构建3对互补Survivin shRNA片段,从其中筛选出一条最佳干扰shRNA片段,与APC功能片段(aa1020-1698)相连接构建双基因共表达质粒载体。将HT-29细胞分为实验组、空载组、空白组3组,慢病毒对HT-29进行侵染,观察是否有绿色荧光表达及对转染细胞进行realtime PCR、Western blot检测Survivin、APC基因表达水平。通过检测Caspase-3活性来检测细胞凋亡情况。结果 1Real time PCR检测后显示对Survivin基因起到最佳干扰效果的片段为shRNA3序列。2构建出的shRNA载体经过送序验证比对后,3对shRNA序列与最初设计的序列完全相同。在HT-29细胞中可见绿色荧光,实验组Survivin相对含量(31.71±1.49)较空载组(100±0)、空白组(95.12±2.15)明显减少(P<0.05),APC mRNA表达水平较空载组(0±0)、空白组(0.51±0.15)明显增加(P<0.05)。实验组Survivin蛋白相对含量(0.18±0.01)较空白组(0.24±0.04)、空载组(0.22±0.03)明显减少,APC蛋白表达水平(0.147±0.016)较空白组(0.095±0.012)、空载组(0.108±0.015)明显升高(P<0.05)。3实验组凋亡相对比值(0.573±0.050)较空白组(0.390±0.040)、空载组(0.407±0.030)明显增加(P<0.05)。结论成功构建Survivin-shRNA-APC双基因共表达慢病毒载体,并能够在HT-29结肠癌细胞中成功表达,该双基因共表达载体可为后续利用该载体进行基因治疗的基础实验提供材料。

摘要：为了构建能同时独立表达双基因的重组伪狂犬病毒通用转移载体,试验采用前期构建的p UC19-g E/HEK为骨架,将设计合成的独立表达双基因的表达盒(p CMV+MCS1+p CMV+MCS2+BGH p A)克隆至其XbaⅠ位点,获得通用转移载体pg E-CMV2,以多克隆位点限制性内切酶单酶切,并将EGFP基因克隆至MCS1的SpeⅠ/PstⅠ位点、DsRed基因克隆至MCS2的KpnⅠ/XhoⅠ位点,转化BHK-21细胞同时观察荧光。结果表明:多克隆位点限制性内切酶单酶切pg E-CMV2呈现单一条带,EGFP和DsRed均呈现目标荧光,且将两种荧光蛋白分别克隆至同一分子的MCS1与MCS2,两种荧光蛋白均能有效表达。说明pg E-CMV2构建正确,且能独立有效表达双基因,可用于实现将两个或多个外源基因一次重组入PRV基因组中,实现"一针多防"。

摘要：目的构建含幽门螺杆菌尿素酶保守基因序列ureI和ureB的双基因(简称IB)多表位原核表达质粒以及原核表达工程菌,并研究其微生物学特性。方法通过生物信息学方法从ureI和ureB基因中筛选T细胞和B细胞优势表位基因序列,人工合成所选择的表位基因序列并构建原核重组表达质粒pET28a(+)/IB。经限制性内切酶(EcoR I,Xho I)鉴定及DNA测序鉴定后,将重组质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)。该工程菌经IPTG诱导后,用SDS-PAGE检测重组蛋白(rIB)的表达情况,用Western blot检测rIB的免疫反应性。结果构建的双基因多表位基因序列与所设计的一致;工程菌经IPTG诱导后做SDS-PAGE电泳显示,在28kD左右有一条明显蛋白条带,Western blot结果显示在28kD左右出现特异反应条带。结论成功构建含ureI和ureB双基因序列的原核表达质粒pET28a(+)/IB及工程菌,该工程菌表达的重组蛋白rIB能被抗幽门螺杆菌悉尼株(*** SS1)的特异抗体所识别,表明该新重组蛋白与幽门螺杆菌有高度相关性。

摘要：近日,晋江首款3D打印女鞋发布,该款鞋是一款＂无跟鞋＂,主打解决女性长期穿高跟鞋疲乏的痛点,是目前国内为数不多采用3D打印技术打造的女鞋产品。据悉,该款鞋从设计、研发、试制到最终成型仅仅用时10多天,包括数坊科技在内的晋江区域多家上下游企业参与其中。与传统高跟鞋不同,产品采用＂无跟＂设计的同时,在结构上进行了修正,脚底承托前后采用黄金高度差,并且悬浮设计,