摘要：目的　构建反义骨桥蛋白 (OPN)基因重组质粒 ,以用于肝癌基因治疗的研究。方法　通过设计含有特定酶切位点的引物 ,以含有全长骨桥蛋白基因的质粒 (pBlueScript OPN)为模板 ,将PCR产物反向克隆至 pcDNA3 1(+)真核表达载体上 ,并经酶切鉴定及测序分析。 结果　重组质粒经酶切后出现 913bp长的片段 ,测序分析结果与文献报道结果完全一致。结论　反义骨桥蛋白基因表达质粒克隆成功 。

摘要：目的 探讨反义基因片段对胶质瘤细胞胰岛素样生长因子-I受体（IGF-IR）基因表达抑制作用的可行性。方法 应用RT-PCR技术和免疫细胞化学方法,并经图象分析以检测反义寡核苷酸作用后细胞IGF-IR基因的表达水平的变化。结果 反义寡核苷酸能有效地降低IGF-IR mRNA表达,并随着反义核苷酸浓度的增加,其mRNA水平逐渐减少。正义核酸组与空白对照组相比较,IGF-IR mRNA水平无显著性差异。免疫细胞化学方法和生物图象分析研究发现:反义核酸组细胞IGF-IR蛋白低表达或不表达,而空白对照组和正义核酸组细胞均呈高表达。结论 针对IGF-IR基因mRNA序列起始密码子及下游序列所设计的反义寡核苷酸能有效阻止mRNA的翻译功能,使其蛋白产物表达下调,达到封闭或减弱该基因表达的目的。

摘要：冠状动脉搭桥手术失败的主要原因是静脉移植物的再狭窄。其中心环节是血管平滑肌细胞(VSMC)增生。抑制VSMC的增生以预防静脉移植物的再狭窄是目前心血管研究的热点。本文就反义基因预防静脉移植物再狭窄的原理、优点、反义核酸的设计、反义治疗中必须考虑的问题进行阐述 。

摘要：根据编码白菜（Brassica rapa ***，syn *** ***）果胶甲酯酶的BcMF3基因cDNA序列内部第1343～1797个碱基之间序列设计引物，从白菜花蕾eDNA中PCR扩增出455bp的片段，把该片段作为反义基因连接至双元载体pBI121上，得到了植物表达栽体pBI-B3，并用“三亲杂交”法导入农杆菌LBA4404菌株中，PCR扩增和酶切结果表明所构建的植物表达载体pBFB3含有BcMF3反义基因片断，并已导入了根癌农杆菌（Agrobacterinrn tume fuciens）中；采用花序浸润法转化拟南芥（Arabidopsis thaliana）后，播种筛选浸润植株的种子获得了5株卡那霉素抗性植株，PCR扩增证明BcMF3反义片段成功整合到拟南芥基因组中；转基因拟南芥子代（T2）的抗性分离符合孟德尔分离比例，表明外源基因是单一位点插入。

摘要：[目的]克隆蝴蝶兰ACC合成酶cDNA片段,构建其反义表达载体。[方法]根据已报道的蝴蝶兰ACC合成酶的基因序列,设计并合成了1对引物,通过RT-PCR以蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC合成酶的cDNA片段,将其连接到MD19-T质粒载体上进行测序。用XbaⅠ和SacⅠ对重组质粒和pBI221酶切后连接,构建蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结果]获得了蝴蝶兰ACC合成酶的cD-NA片段,测序结果显示,该片段与参考的已报道序列具有98.92%和76.36%的同源性。通过引入XbaⅠ和SacⅠ酶切位点,进行载体构建,构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因表达载体。[结论]成功构建了蝴蝶兰ACC合成酶的反义基因植物表达载体,为进一步研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础。

摘要：目的用RNAstrueture软件设计和实验分析来筛选有效的反义核酸。方法选择Bel-2基因为靶基因,利用RNAstrueture软件,模拟Bcl-2mRNA的二级结构,根据自由能不稳定区域或者无折叠的区域,设计5条反义核酸序列,研究它们对白血病细胞的细胞生长作用,用免疫组织化学和流式细胞技术研究蛋白的表达,RT-PCR检测mRNA的含量,有细胞形态学方法、电泳和流式细胞技术检测细胞凋亡。结果5条中有两条反义核酸能显著抑制白血病细胞的生长,降低Bcl-2mRNA和蛋白水平,显著诱导细胞凋亡。结论计算机软件预测有效反义比其他方法快而有效,这种方法能有效加速研究和临床反义序列的设计。

摘要：目的构建正义和反义端粒酶 RNA 组分((human telomeraseRNA components,hTR)基因真核表达载体.方法用 Mlu Ⅰ和 Sal Ⅰ从 pGRN83质粒上切下约579 bp 的hTR cDNA 片段,分别定向连入 pcl-neo 的 Mlu Ⅰ/Sal Ⅰ和Mlu Ⅰ/Xho Ⅰ酶切位点上,即构建成了 hTR 的正反义表达载体,并经酶切鉴定和测序确认.结果经酶切鉴定和测序证明,所构建的正反义 hTR 真核表达载体与设计完全一致.结论成功构建了人端粒酶 RNA 的正反义真核表达载体,为进一步研究正反义 hTR 基因转染对胃癌细胞端粒酶及生物学行为的影响奠定了基础.

摘要：根据已报道的蝴蝶兰ACC氧化酶的基因序列,设计了一对引物,通过RT-PCR从蝴蝶兰总RNA中扩增出ACC氧化酶的cDNA片段,将其连接到pMD19-T载体上进行测序.结果显示,该片段与参考的已报道序列具有99.70%的同源性.测序后将该基因的cDNA序列反向插入pBI221的CaMV35S启动子和nos terminator之间,构建了蝴蝶兰ACC氧化酶的反义基因植物表达载体,为进一步转化蝴蝶兰研究其对蝴蝶兰花期和生长的影响打下了基础.