摘要：应用反向点杂交法（ＲＤＢ）的原理，针对ＨＰＶ６Ｂ，１１，１６，１８，３１，３３和３５设计了７条序列作为未标记的特异性寡核苷酸（ＳＳＯ）探针，分别固定在尼龙膜条上，形成７个点，再与经ＰＣＲ扩增的样品ＤＮＡ序列杂交，即可在一个膜条上分辨出这７型ＨＰＶ中的任一型．此法快速简便，特异性高，不存在假阳性；且因ＰＣＲ灵敏度高，亦不易出现假阴性．用ＰＣＲＲＤＢ法检测保存的宫颈癌组织石蜡包埋标本３２例，结果：ＨＰＶ１６阳性２２例（６８８％），ＨＰＶ１８阳性５例（１５６％），ＨＰＶ１６／１８双重感染２例（６３％），阴性仅３例（９３％）．

摘要：目的建立并应用HCV基因分型技术PCR-反向点杂交法(PCR-RDH),调查广东地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型和亚型的分布情况。方法应用生物信息学软件针对HCV5'端非编码区(5'UTR)和核心蛋白区(C区)设计特异性捕获探针及生物素标记引物,建立HCV基因分型的PCR-反向点杂交技术。应用本技术对115例慢性丙型肝炎患者血清标本进行HCV基因型和亚型检测,同时对其中38份标本中的HCV进行RT-PCR扩增、测序、系统进化树分析确定HCV基因型和亚型,以评价反向点杂交法的准确性及临床应用价值。结果 115份血清标本中,反向点杂交法HCV基因型及亚型检出率为96.5%(111/115),15份阴性对照全部为阴性。111例检出基因型的标本中1b型63例(56.8%)、2a型9例(8.1%)、3a型4例(3.6%)、3b型6例(5.4%)、6a型28例(25.2%)、1b/2a混合型1例(0.9%)。经测序分型确定此法检测准确度为100%,特异度为100%。结论 HCV基因型反向点杂交法检测准确可靠、简便经济、高效,适用于临床检测。广东地区的HCV基因型分布以1b型为主,呈现出1b型比例下降,3a、6a型比例升高的趋势。

摘要：目的建立基于PCR-RDB技术的可同时检测中国人群G6PD最常见的4种基因突变类型的基因分型方法并对其作出评价。方法分别针对中国人群G6PD最常见的4种基因突变类型95(A→G)、1376(G→T)、1388(G→A)、1024(C→T)设计PCR扩增引物和基因分型探针,将探针固定到尼龙膜上制做成杂交膜条,建立PCR扩增体系和杂交体系。利用13例已知基因型的样本建立针对这4种基因突变类型的PCR-RDB检测方法。盲法对109例上述4种G6PD样本和正常样本进行PCR-RDB检测以及基因序列测定,并对两种方法所得结果进行对比。结果 PCR-RDB法准确地检测出了检测范围内所有的突变类型和正常样本,检测结果与测序结果完全一致。结论 PCR-RDB是一种经济、简便、高效、准确的G6PD基因分型方法 ,可用于G6PD的分型诊断和分型研究,并可做为一种常规方法推广到临床进行基因分型检测。

摘要：目的利用反向点杂交技术建立HCV基因分型新方法。方法在HCV5'端非编码区(5'NCR)设计引物和分型探针(1.2.3.6型),采用反向点杂交分型技术对53例HCV RNA阳性(浓度均在102～107IU/mL之间)血清进行分型,并以基因序列分析作为金标准,对新方法的敏感性、特异性和重复性进行评价。结果反向点杂交基因分型新方法检出的基因型有52例:1b型32例占60.38%,2a型4例占7.55%,6a型8例占15.09%,3b型8例占15.09%;未检出的基因型有1例,用基因序列分析也未能确定型別(失败的原因应是该HCV RNA扩增产物浓度偏低2.24×102IU/mL)。本研究的方法敏感性为98.1%,特异性为100%,随机抽取20份标本再次检测的结果与前次检测的结果完全一致,重复性好。结论相对现有的型特异性PCR分型、基因芯片、核酸序列分析等各种方法,反向点杂交技术用于HCV基因分型是一种准确有效和简便经济的方法。

摘要：目的建立一种临床上切实可行的非缺失型α-地中海贫血基因检测方法。方法中国人常见的非缺失α-地中海贫血为αCSα、αQSα、αWSα3种类型,针对此3个位点设计特异性带有生物素标记的引物进行PCR扩增,扩增产物与固定在膜条上的寡核苷酸探针进行杂交,并通过一系列显色反应分析结果。结果分别分析3种突变类型的正常及突变位点信号,明确检测样品在3个位点是否发生了突变,及是否为突变纯合子或杂合子,验证了该方法可诊断非缺失型!-地中海贫血点突变。结论该检测方法结果可靠,且简便易行,对实验室仪器设备要求不高,适合于在临床推广。

摘要：RDB是将我们设计的HPV6B、11、16、18、31、33、35的7个序列特异性寡核苷酸（SSO）探针分别依次固定在尼龙膜上，再与经PCR扩增的DNA靶序列杂交，即可在同一张膜上分辨7型HPVDNA的任一型。我们检测尖锐湿疣患者62例，对其中20例进行组织活检，阳性检出率为950（19／20）。阳性检出中，HPV6B型8例（40．0％）、HPV11型9例（45．0％）、HPV6B／11型（混合型）2例（10．0％）；对其中42例进行宫颈抹片检测，阳性检出率为92．9％（39／42）。阳性检出中，HPV6B型15例（35．7％）、HPV11型19例（45．2％）、HPV6B／11型3例（7.1％）、HPV16型2例（4．8％）。结果表明尖锐湿疣患者检出HPV总阳性率为94％，感染HPV型主要为HPV6B及11型。

摘要：目的建立一种基于PCR和RDB技术的临床实用、价格低廉、能对目前已知的绝大多数高危型及常见的低危型人乳头状瘤病毒(HPV)进行基因分型的检测方法(PCR/RDB法),并对该方法用于HPV分型检测做出方法学评价。方法根据HPV基因序列设计可扩增包含目前常见的HPV型别的通用引物,并根据14种HPV高危亚型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68)和7种低危亚型(6、11、42、43、44、53、CP8304)的序列特点设计针对这21种HPV型别的型特异性探针。21种HPV亚型标准毒株PCR产物与HPV型特异性探针进行杂交,建立一次性对21种HPV亚型进行分型的PCR/RDB检测方法。将PCR/RDB法用于213例经杂交捕获法(hybird capture,HCⅡ)检测为高危型HPV阳性样本的HPV型别诊断。结果建立的PCR/RDB法均能鉴定出21种HPV亚型,无假阳性和假阴性结果,未出现交叉反应;含有相当于10个以上HPV分子的质粒标准品均能成功获得PCR产物检测的阳性结果;盲法分析结果显示,195例经HCⅡ法检测为高危型HPV阳性的样品被PCR/RDB检测出具体的HPV型别,共检测出13种高危型HPV亚型,检出率分别是32.31%(16型)、23.08%(52型)、17.95%(58型)、11.79%(31型)、10.26%(68型)、9.74%(33型)、8.21%(18型)、6.15%(66型)、3.08%(59型)、2.05%(45型)、2.05%(39型)、1.54%(56型)、1.03%(51型)。单一HPV亚型感染及2种、3种和4种HPV亚型混合感染构成比分别为59.46%、30.81%、8.65%和1.08%。18例未能检测出HPV的具体型别,PCR/RDB法与HCⅡ法的高危型HPV检测结果的符合率为91.5%(195/213)。结论PCR/RDB法与HCⅡ法高危型HPV检测阳性符合率高,并可一次性分析出21种HPV型别,是一种准确、高效、经济的HPV型别检测方法,可用于HPV的常规基因型分型诊断及人群筛查。

摘要：目的快速准确检测广东地区广泛分布的主要HCV基因型,为HCV的临床诊断和治疗提供依据。方法收集53例HCV-RNA阳性血清标本,选取丙型肝炎病毒(HCV)基因组保守序列为扩增靶序列,设计通用引物和特异型别探针(1,2,3,6型),通过逆转录将RNA逆转录为cDNA后,利用通用引物对cDNA进行PCR扩增,将扩增产物利用反向点杂交(RDB)技术进行基因分型。结果HCV-RNA阳性血清53例,共检出标本52例,4种基因型所占的比例为1b型32例占60.38%,2a型4例占7.55%,3b型8例占15.09%,6a型8例占15.09%。结论所测患者的HCV基因型分布以1b为主,6a和3b次之,2a相对较低;反向点杂交技术能对其进行快速分型,符合率高达98.11%。