摘要：背景:血管内皮生长因子受体对许多实体瘤的血管生成和预后起着重要作用,但血管内皮生长因子受体与肺癌预后的关系研究报道较少.目的:探讨肺癌中血管内皮生长因子受体Flt1和KDR的表达及其与转移及预后的关系.设计:以病理标本为研究对象单一样本研究.单位:一所大学的病理学教研室.材料:随机选取青岛大学医学院附属医院胸外科1985-01/1990-12经手术切除的75个肺癌标本.2002-09/11月间在青岛大学医学院病理学教研室进行实验.方法:应用免疫组织化学Power Vision TM-9000(PV-9 000)法,测定75个肺癌标本中Flt1和KDR的表达.主要观察指标:肺癌中血管内皮生长因子受体Flt1和KDR的表达及其与年龄、性别、病理类型、组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移和预后的关系.肿瘤细胞、纤维母细胞中Flt1和KDR表达的关系.结果:肺癌组织中Flt1和KDR的表达较为广泛,主要位于肿瘤细胞胞浆及胞膜上,纤维母细胞和血管内皮细胞胞浆中亦有表达.Flt1和KDR在肿瘤细胞中的阳性率均显著高于在间质纤维母细胞中的表达(x2=6.07,5 88,P＜0.05).肿瘤细胞及纤维母细胞中该两种受体的阳性率在不同年龄、不同性别及不同病理类型、不同病理分级之间差异均无显著性意义(P＞0 05).肿瘤细胞中Flt1和KDR的阳性表达率在3组不同大小的肿瘤间差异均有显著性意义(x2=10 35,7.29,P＜0.05),而纤维母细胞中差异均无显著性意义(x2=2 86,2.56,P＞0 05);肿瘤细胞及纤维母细胞中Flt1和KDR的阳性率在淋巴结有、无转移2组间的差异均有显著性意义(x2=4.72～9.32,P＜0.05),在3组不同术后生存时间患者间差异亦均有显著性意义(x2=8 81～19.19,P＜0.05);肿瘤细胞中Flt1和KDR的表达呈极显著性正相关(r=0.44,P＜0.01).结论:Flt1和KDR在肿瘤细胞中的表达均显著高于间质纤维母细胞,提示肺癌的生长主要依赖自分泌机制;肿瘤细胞中该两种受体的表达与淋巴结转移、术后生存时间有关,并具有协同效应,提示联合检测Flt1和KDR的表达,可能对肺癌转移及预后的评估更有参考价值.

摘要：背景:研究表明骨折后72h～3周骨折断端血管内皮生长因子呈持续高表达,推测其对骨折愈合有促进作用,通过血管内皮生长因子基因转染的方式诱导治疗性血管生成的研究正受到人们关注。目的:通过局部注射阳离子脂质体转染剂和质粒混合物寻找外源性血管内皮生长因子体内转染的有效途径,以及其基因表达对于骨折愈合的促进作用。设计:随机分组、空白对照实验。单位:四川大学华西医学中心动物实验室。对象:成年雄性SD大鼠40只,体质量230～250g。随机分为实验组和对照组,每组20只。方法:实验于2003-04/12在四川大学华西医学中心动物实验室完成。40只大鼠建立右侧股骨干骨折模型。于股骨中段切断,断端间相距1mm,于髁间倒置入直径1mm的克氏针,固定骨折断端。实验组将脂质体转染剂100μL和pBLAST49-mVEGF100μg质粒混合物两侧骨膜下多点注射,对照组注射等量生理盐水。于术后3,7,14,28,42,56,70d分别处死各组大鼠2只取右侧股骨标本。主要观察指标:两组大鼠各时间点右侧股骨断端标本观察:①大体观察。②X射线摄片结果。③组织学结果。④血管内皮生长因子免疫组织化学染色结果,以胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性。结果:两组大鼠7个时间点各选2只,共28只进入结果分析,剩余12只剔除。①不同时间点大鼠骨折端大体标本和X射线片结果观察:实验组骨折端28d软骨骨痂出现并逐渐替代纤维骨痂,骨折线消失,术后56d骨折完全愈合;对照组28d可以看见纤维骨痂,骨折线仍然很清楚,56d才有较多骨痂出现,骨折线开始变模糊。②大鼠骨折端组织学结果观察:骨折端切片后组织细胞经苏木精-伊红染色,实验组术后56d,骨折完全愈合,重新塑形,髓腔再通;对照组术后56d,骨折未完全愈合,髓腔未再通。③不同时间点大鼠骨折端血管内皮生长因子免疫组织化学染色结果:两组表达均于14d达到高峰,28d开始下降。实验组血管内皮生长因子表达明显高于对照组。结论:大鼠骨膜下局部注射阳离子脂质体转染剂和质粒混合物是一种有效的体内转染途径;pBLAST49-mVEGF基因转染能有效促进大鼠骨折的愈合。

摘要：背景:外源性的血管内皮生长因子能使体外培养的成骨细胞碱性磷酸酶活性及环磷酸腺苷浓度提高4倍,但外源性血管内皮生长因子基因转染对成骨细胞成骨活性影响如何?目的:了解外源性血管内皮生长因子基因转染及表达对成骨细胞成骨活性的影响。设计:随机对照实验。单位:四川大学华西医院移植免疫实验室。对象:新生两三天雄性SD大鼠颅骨成骨细胞。方法:实验于2003-04/12在四川大学华西医院移植免疫实验室完成。分离培养大鼠颅骨成骨细胞用碱性磷酸酶染色鉴定。①用阳离子脂质体转染将pBLAST49-mVEGF基因导入体外培养的成骨细胞为基因转染组。②未转染组加入杀稻瘟菌素为对照。③将转染成功和未转染的成骨细胞进行同步传代培养共5代,对每代细胞进行血管内皮生长因子和Ⅰ型胶原免疫组织化学染色检查和骨钙素的测定。主要观察指标:①观察外源性血管内皮生长因子在成骨细胞内的表达。②对成骨细胞合成分泌骨钙素及Ⅰ型胶原的影响。结果:pBLAST49-mVEGF基因转染组第1～5代细胞合成分泌骨钙素浓度和I型胶原的表达均明显高于对照组,二者间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论:pBLAST49-mVEGF质粒转染成功后,成骨细胞合成Ⅰ型胶原明显增强。与对照组相比,通过Mias图像分析,与未转染的对照组比较差异具有显著性,表明pBLAST49-mVEGF质粒转染能明显增加成骨细胞生成骨钙素以及合成Ⅰ型胶原的能力。

摘要：背景:骨髓间质干细胞和血管内皮细胞生长因子移植具有促进血管再生、改善心功能的作用,但是二者联合应用是否优于单独应用尚不清楚。目的:观察同种异体骨髓间质干细胞移植联合血管内皮生长因子基因转染对大鼠急性心肌梗死血管再生和心功能的影响。设计:大鼠骨髓间质干细胞培养采用单一样本观察;细胞移植和基因转染采用随机对照动物实验。单位:华中科技大学协和医院心内科,同济医学院心血管病研究所。材料:健康雄性Wistar大鼠94只。表达载体PAdTrack/VEGF165。方法:实验于2004-06/2005-06在同济医学院心血管病研究所实验室完成。①体外分离、纯化、培养大鼠骨髓间质干细胞,以5-溴-2’-脱氧尿苷标记细胞。②制备、抽提、纯化、鉴定质粒PAdTrack/VEGF165。③结扎冠状动脉建立急性心肌梗死模型2周后,随机将其分为4组,每组均为12只,干细胞+质粒组、干细胞组、质粒组、对照组,分别进行心肌内大鼠骨髓间质干细胞移植和/或VEGF165转染、DMEM注射。④4周后行免疫组织化学和超声心动图检查。主要观察指标:①各组大鼠梗死及缺血区免疫组织化学和苏木精-伊红染色检查。②血管计数。③超声心动图检查。结果:48只大鼠进入结果分析。①干细胞+质粒组和干细胞组梗死及缺血心肌处可见大量5-溴-2’-脱氧尿苷标记的移植细胞,其中缺血心肌处部分移植细胞分化为血管内皮细胞并形成新生毛细血管。②Ⅷ因子染色阳性的新生血管密度分布为干细胞+质粒组>质粒组>干细胞组>对照组(P均干细胞组>质粒组>对照组(P均<0.01)。结论:同种异体骨髓间质干细胞移植联合血管内皮生长因子基因转染能进一步增强大鼠梗死缺血区血管再生、改善室壁厚度和心功能。