摘要：目的:建立稳定表达可诱导型polo样激酶1(polo-like kinase 1,PLK1)小发夹RNA(small hairpin RNA,shrna)的乳腺癌MDA-MB-231细胞系并研究PLK1敲低对MDA-MB-231细胞增殖、细胞周期的影响并探讨其可能的机制。方法:根据si RNA的原理设计2对靶向PLK1的shrna序列,构建慢病毒表达质粒(PLK1 shrna重组质粒);先用p LV-t TR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;在此基础上再用PLK1 shrna重组质粒制备慢病毒并感染上述MDA-MB-231细胞;对上述2次慢病毒感染的MDA-MB-231细胞用强力霉素(doxycycline,DOX)处理96 h后,用q RT-PCR及Western blot检测PLK1m RNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖;用流式细胞术及碘化吡啶(PI)染色检测细胞周期。结果:成功构建靶向PLK1的shrna慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染MDA-MB-231细胞;成功建立稳定表达可诱导型PLK1 shrna的MDA-MB-231细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中PLK1在m RNA及蛋白水平的表达(P<0.01);PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖(P<0.05);流式细胞术检测发现PLK1敲低可阻滞MDA-MB-231细胞于G2/M期(P<0.05)。结论:DOX诱导的PLK1敲低可明显抑制MDA-MB-231细胞增殖并阻滞细胞于G2/M期;经PLK1介导的肿瘤生物学行为变化,其机制可能涉及ERK1/2/Fra1/ZEB1信号通路。

摘要：目的建立稳定表达可诱导型CKS2 shrna的卵巢癌OVCAR3细胞系并研究CKS2敲除对卵巢癌OVCAR3细胞增殖的影响。方法根据siRNA的原理设计2对靶向CKS2的shrna序列,构建慢病毒表达质粒(p LVTHM/CKS2 shrna重组质粒);先用p LV-t TR/KRAB-Red空载体制备慢病毒并感染OVCAR3细胞;在此基础上再用p LVTHM/CKS2 shrna重组质粒制备慢病毒并感染上述OVCAR3细胞;对上述两次慢病毒感染的OVCAR3细胞,用强力霉素(DOX)处理72 h后,用real time PCR及Western blot检测CKS2 mRNA及蛋白的表达;用MTT法检测细胞增殖。结果构建靶向CKS2的shrna慢病毒表达质粒,包装出慢病毒并感染OVCAR3细胞;建立稳定表达可诱导型CKS2 shrna的OVCAR3细胞系,通过DOX诱导,可明显抑制该细胞系中CKS2在mRNA及蛋白水平的表达(P<0.05,P<0.01);CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞的增殖。结论建立稳定表达可诱导型CKS2 shrna的OVCAR3细胞系,DOX诱导的CKS2敲除可明显抑制OVCAR3细胞增殖。