摘要：为了研究副溶血性弧菌噬菌体vB_VpP_1裂解酶重组表达后对副溶血性弧菌的体外裂解作用,本实验根据全基因组测序及功能分析结果初步判断噬菌体vB_VpP_1的gp32基因片段为裂解酶基因,使用Expasy等工具分析了gp32的氨基酸序列组成和结构等;使用Primer 5.0软件设计引物后克隆至pET-28a(+)载体进行原核表达;纯化后的裂解酶作用于宿主菌及乙二胺四乙酸(ethylene diamine tetraacetic acid,EDTA)处理后的宿主菌,测定裂解酶的活性。结果表明,vB_VpP_1裂解酶的三级结构为球形亲水蛋白,预测含有2个催化结构域,符合革兰氏阴性菌噬菌体裂解酶的基本特征,不存在跨膜区域及信号肽。纯化后的噬菌体vB_VpP_1裂解酶活力约为(1 487±182)U/mg,对已被EDTA破坏细胞壁外膜的副溶血性弧菌表现出较强的裂解能力,但不能有效裂解细胞壁完好的副溶血性弧菌。本研究成功构建噬菌体vB_VpP_1裂解酶原核表达载体,表达、纯化后的裂解酶能够裂解细胞壁被破坏的副溶血性弧菌。

摘要：根据苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,B.t)溶原性噬菌体G IL01(GenBank Accession Number:AJ536703)的同源序列设计一对引物,用35株B.t标准菌株和生产菌株MZ1(血清型H3 a3b)的过夜培养物作模板,结果有16株菌株包括MZ1能扩增出大小约为750 bp的预期产物,推测这16株菌为溶原菌。MZ1菌株的过夜培养液与指示菌ZK1(血清型H25)混匀并在双层琼脂上培养12 h后出现了滴度为2×107pfu的噬菌斑,从而证明生产菌株MZ1确为溶原菌;又以G IL01同源性较高的其它四个基因设计引物,分别以MZ1的培养物及其溶原性噬菌体基因组为模板进行PCR扩增,结果两者得到几乎一致的带型,进一步证明了生产菌株MZ1为溶原菌,说明利用PCR法检测鉴定苏云金杆菌的溶原性是可行的。比较指示菌方法、直接电镜法和DNA鉴定法,PCR法快速简便,对B.t生产上快速检测其溶原性噬菌体有实用意义。

摘要：本研究旨在探讨噬菌体对断奶仔猪生长性能、肠道内容物pH、挥发性脂肪酸含量和二糖酶活性的影响。试验采用单因素试验设计,选用120头遗传背景相似、健康状况良好、胎次接近、初始体重为(7.35±0.03)kg的25日龄断奶仔猪,随机分为4个组,每组5个重复,每个重复6头仔猪。4组仔猪分别饲喂对照饲粮[添加50 mg/kg奎烯酮(有效含量25 mg/kg)和75 mg/kg金霉素(有效含量11.25 mg/kg)]及添加200、400和600 mg/kg噬菌体的饲粮。试验21 d后,屠宰取样,测定肠道内容物pH、挥发性脂肪酸含量及二糖酶活性。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加400、600 mg/kg噬菌体可显著提高仔猪全期增重(P<0.05),随着饲粮中噬菌体添加量的提高,仔猪全期增重呈显著线性和二次曲线变化(P=0.001和P=0.003)。而且400、600 mg/kg噬菌体组仔猪腹泻指数也显著低于对照组与200 mg/kg噬菌体组(P<0.05),随着饲粮中噬菌体添加量的提高,仔猪腹泻指数呈显著线性和二次曲线变化(P=0.024和P=0.015)。2)与对照组相比,饲粮中添加400 mg/kg噬菌体能够显著降低仔猪回肠pH(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加400和600 mg/kg噬菌体显著提高了盲肠中乙酸、丁酸和总酸的含量(P<0.05),且随着饲粮中噬菌体添加量的提高,盲肠乙酸、丁酸和总酸含量呈显著线性和二次曲线变化(P<0.01和P<0.01,P=0.017和P=0.014,P<0.01和P<0.01);600 mg/kg噬菌体组盲肠中戊酸含量显著高于对照组和200、400 mg/kg噬菌体组(P<0.05),且丙酸含量显著高于200 mg/kg噬菌体组(P<0.05)。相比较于对照组,饲粮中添加400和600 mg/kg噬菌体显著提高了仔猪结肠中乙酸和总酸含量(P<0.05),随着饲粮中噬菌体添加量的提高,结肠乙酸含量呈显著先升高后降低的二次曲线变化(P=0.008)。而400 mg/kg噬菌体组仔猪结肠丁酸含量显著高于200和600 mg/kg噬菌体组(P<0.05)。4)与对照组相比,400 mg/kg噬菌体组仔猪十二指肠黏膜蔗糖酶和乳糖酶活性显著增加(P<0.05),十二指肠黏膜乳糖酶活性呈显著先升高后降低的二次曲线变化(P=0.029),空肠黏膜麦芽糖酶活性显著升高(P<0.05)。由此可见,饲粮中添加噬菌体可提高仔猪的生长性能,降低腹泻指数,同时降低仔猪肠道内容物pH,提高肠道挥发性脂肪酸含量和二糖酶活性,改善仔猪肠道的消化吸收功能。

摘要：目的 :构建噬菌体表面表达随机 8肽文库 ;方法 :采用人工合成随机寡核苷酸、基因重组技术 ,噬菌体表面表达技术等 ,构建该文库 ;采用多聚酶链式反应技术、核酸杂交技术和测序分析评价鉴定。多聚酶链式反应所采用的上游引物包括载体克隆位点处部分碱基和部分外源基因的碱基 ;在核酸杂交中设计了噬菌体载体克隆位点互补探针 ,以更加准确地排除无外源基因插入的克隆 ;在测序鉴定中 ,选择了 2个混合探针杂交阳性的克隆。结果 :以上证实获得独特克隆为 2 1× 10 8;亲和富集实验证实所建噬菌体文库可以稳定扩展。结论 :我们成功地构建了噬菌体随机 8肽文库 ,其库容量为 2 1× 10 8。

摘要：目的　研究同时携带两种CTXΦ基因组的O139群霍乱弧菌中CTXΦ基因组的多样性。方法　Southernblot检测分离自福建的部分O139霍乱弧菌菌株中ctxAB和zot基因的多态性 ,然后选取ctxAB和zot基因拷贝数差异较大的 3株菌 ,扩增其调控抑制基因rstR基因片段 ,克隆并进行序列测定、分析。结果　此 3株菌染色体zot杂交条带多于ctxAB 2～ 5条 ,提示 1个菌株染色体上有编码ctxAB的CTXΦ以及不编码ctxAB的CTXΦ两种基因组。以保守区设计的引物扩增此 3株菌的rstR区 ,均得到 2条大小不同的条带 ,分别克隆后进行测序 ,经GenBank同源性检索 ,发现在此 3个菌株染色体中分别有来自ElTor型的CTXETΦ与不编码ctxAB的nct CTXO13 9Φ、来自加尔各答型的CTXcalcΦ与nct CTXO13 9Φ、以及CTXETΦ与新报道的一种具有独特rstR序列的CTXΦ类基因组两两共存于 1个菌株染色体上。这 3个菌株还具有不同的 16S核糖体基因杂交图谱。结论　不同rstR序列的CTXΦ基因组可以共存于 1个菌株染色体中 ,提示CTXΦ家族进化过程中的复杂分化 ,CTXΦ家族在不同霍乱菌株间的出现及传递。

摘要：噬菌体疗法是治疗多重耐药菌感染的重要手段之一。这类噬菌体通常从医院污水中分离得到,然而迄今为止对医院污水中噬菌体的分布情况尚无系统研究。本研究旨在以临床分离的常见病原菌为宿主,分离其对应的噬菌体,以此评估医院污水中噬菌体的生态分布情况,并为临床耐药菌噬菌体的分离和应用提供参考。本研究采用横断面研究设计,选择2023年5—6月山东大学齐鲁医院临床微生物实验室分离得到的125株病原菌(分属于16个不同的菌种)作为目标菌株,利用双层平板夹心法从医院污水中分离纯化这些菌株对应的噬菌体。同时,借助宏基因组二代测序技术(mNGS)分析同批次污水中病原菌的分布情况,初步探究污水中病原菌与噬菌体之间的丰度对应关系。结果显示,以125株临床病原菌为宿主,共分离获得56株噬菌体,分别对应鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌等6种病原菌。这6种病原菌均包含了不同耐药程度的菌株,其中鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌和铜绿假单胞菌中多重耐药菌株占比较高。这6种病原菌的噬菌体获得率由高到低依次为:大肠埃希菌(80%)、嗜麦芽窄食单胞菌(75%)、铜绿假单胞菌(70%)、肺炎克雷伯菌(66.67%)、鲍曼不动杆菌(36.36%)和金黄色葡萄球菌(12.5%)。初步的mNGS测序结果显示,在该批次污水中,丰度较高的病原菌分别为屎肠球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、鲍曼不动杆菌、产气克雷伯菌、密歇根克雷伯菌和铜绿假单胞菌。综上,医院污水中可分离到大多数临床常见革兰阴性病原菌的噬菌体,且分离率较高;然而革兰阳性病原菌的噬菌体分离率较低,在本研究中仅分离到与金黄色葡萄球菌对应的噬菌体。对应的mNGS测序结果表明革兰阴性病原菌在污水中的分布与噬菌体的生态分布可能具有一定的正相关关系。

摘要：文章旨在研究日粮添加不同水平噬菌体对肉鸡生长性能、血液特征和粪便微生物脱落的影响。在32 d试验中,选择初始体重为(45±2.03)g的1日龄肉鸡672只,按照完全随机试验设计,将肉鸡分为4组,每组6个重复,每个重复28只。对照组饲喂基础日粮,抗生素组在基础日粮中添加50 mg/kg杆菌肽锌,处理1和2组分别在基础日粮中添加0.25和0.5 g/kg噬菌体。结果:在整个试验过程中,日粮处理对日增重和采食量均无显著影响(P>0.05),与对照组相比,0.5 g/kg噬菌体组1~14 d肉鸡的料重比显著降低7.07%(P0.05)。与对照组相比,抗生素组和0.5 g/kg噬菌体组对肝脏相对重量无显著影响(P>0.05),但0.25 g/kg噬菌体组肉鸡肝脏相对重量显著提高11.00%(P0.05),但0.5 g/kg噬菌体组粪便乳酸杆菌含量较对照组和抗生素组分别显著提高5.33%、5.66%(P<0.05)。对照组粪便中大肠杆菌和沙门氏菌含量最高,粪便大肠杆菌数量分别较其他组显著提高6.80%、5.80%和7.48%(P<0.05),粪便沙门氏菌数量分别较其他组显著提高26.56%、16.13%和22.73%(P<0.05)。结论:本试验结果显示,日粮中添加0.5 g/kg噬菌体可提高肉鸡生长早期的饲料效率和肝脏相对重量,但对胸肌颜色无显著影响,具有抑制肉鸡病原体脱落的作用。

摘要：胞内病原菌是一类可以侵入并在哺乳动物细胞内生存的病原菌,它们可以调节宿主细胞内环境以便自身繁衍扩散。由于细胞膜等结构的保护,胞内病原菌在细胞内不容易被药物接触到,且容易积累耐药性,使得胞内病原菌的治疗成为一个悬而未决的难题,亟需新的治疗方法。噬菌体疗法是利用噬菌体裂解细菌治疗病原菌感染的手段。由于其不会对动物细胞产生危害,已经被广泛用于治疗病原细菌的胞外感染,同时为胞内病原菌的治疗提供了行之有效的新思路。本文介绍了细胞内病原体侵入和定居在真核细胞中的策略,以及它们对抗生素的抗性机制。噬菌体疗法具有独特的杀菌机制及突出的优势,因此噬菌体疗法在处理细胞内病原体特别是耐药病原体方面有巨大潜力。但噬菌体疗法在治疗细胞内病原体方面的应用仍面临许多挑战,如噬菌体不能轻易穿过真核细胞膜与细胞内病原体接触。最后,讨论了噬菌体疗法在治疗细胞内耐药病原体方面可能的发展方向。未来需解决噬菌体入胞难题,通过细胞穿透肽修饰或纳米材料修饰,使噬菌体能够有效地进入真核细胞。在此基础上,可以对噬菌体本身进行改造,获得杀菌效果更强的重组噬菌体,并进一步挖掘包括温和噬菌体在内的噬菌体资源。

摘要：前期分离得到1株具有较强裂解能力的金黄色葡萄球菌噬菌体vB_SauM_JS25。测序后发现,噬菌体vB_SauM_JS25的裂解酶基因LysJS25与裂解酶LysK同源性最高,且可以广谱裂解金黄色葡萄球菌。为提高LysJS25细胞穿透效果,设计了穿透肽嵌合裂解酶LysJS25-R9,经原核表达和纯化,体外评价了LysJS25-R9裂解活性、细胞穿透活性及细胞内杀菌活性。结果表明:LysJS25-R9对葡萄球菌表现出较好的裂解能力,杀菌效率较原裂解酶提高2.1倍。激光共聚焦及细胞内杀菌活性实验证实LysJS25-R9进入MAC-T细胞内杀菌。该研究为穿透肽嵌合裂解酶的设计提供了一个良好的例证,同时有助于裂解酶细胞穿透性改造的设计。

摘要：噬菌体,以杀菌特性而闻名的天然病毒,是地球上多样性和丰度最高的生物体。在过去100多年中,噬菌体的研究极大地推动了遗传学、分子生物学和合成生物学的发展。随着耐药超级细菌的流行,噬菌体疗法引人入胜的科学历史也被广为传颂。然而,相对于自然环境中丰富的噬菌体数量(总数为10^(31),比所有其他生物的总和还要多),目前只有少数噬菌体成功应用于对抗耐药性细菌感染及其他工程领域。当前,急需践行合成生物学从“造物致知”到“造物致用”理念,采用高通量测序和基因组精准编辑等先进生物技术来创建具有独特属性的增强变体,提高噬菌体治疗的疗效和可编程性。本文综述了近年来噬菌体基因工程改造方法的技术进展以及合成生物学助力噬菌体应用技术发展的研究动态,如按照实际需求改造噬菌体宿主范围、借助宏基因组挖掘自然界中噬菌体的广泛资源、结合多组学技术揭示噬菌体与宿主互作的分子机制、调控肠道噬菌体组维持肠道稳态以促进人体健康及利用大数据和新型人工智能指导噬菌体理性设计。总之,合成生物学正在跨时代驱动传统实验研究范式转变,结合“设计—构建—测试—学习(DBTL)循环”理性设计目标噬菌体,无论是自上而下的体系优化,还是自下而上的生命体重构,工程噬菌体的合成生物学“智造”都大有可为。