摘要：目的:筛选并鉴定与人CD59分子特异结合的短肽,为设计具有拮抗CD59肿瘤逃逸活性的短肽封条奠定基础。方法:以高表达人CD59的中国仓鼠卵巢细胞(CHO)为靶细胞,采用竞争结合试验,对噬菌体随机12肽库进行5轮亲和筛选。用ELISA筛选噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果:随机挑选的16个克隆中,有8个与人CD59的结合力高。测序后,得到3个高度同源的氨基酸序列。DNAstar分析显示,3个序列均与已公布的(PubMed)人CD2的氨基酸序列有一定的同源性。结论:获得的序列H×A××××××P××为设计肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽封条提供了技术基础。

摘要：目的寻找HeLa细胞表面与人CD59特异性结合的短肽序列。方法分别用非转基因HeLa细胞和转染CD59基因的HeLa细胞的裂解蛋白进行5轮亲和筛选,并通过竞争结合实验,然后用ELISA方法筛选噬菌体阳性克隆。提取单克隆DNA测序,并对其进行DNA序列分析推导出短肽序列。结果随机挑选的16个单克隆中有10个克隆对HeLa细胞有特异性结合力,经测序得到一条高度同源的多肽序列。结论通过噬菌体随机肽库对肿瘤细胞进行全细胞蛋白筛选,得到了噬菌体多肽能高特异性与肿瘤细胞结合的短肽序列,为下一步设计肿瘤逃逸相关的CD59活性位点的短肽药物提供了参考依据。

摘要：目的利用噬菌体展示肽库技术筛选与人乳腺癌细胞表面HER2特异性结合的活性短肽。方法以过表达HER2的人乳腺癌细胞SK-BR-3为靶细胞,Herceptin作为竞争性洗脱剂,采用竞争结合实验,经四轮亲和筛选,获得阳性噬菌体富集;通过ELISA评价与SK-BR-3细胞高特异性结合的阳性噬菌体克隆;分析DNA测序结果并推导短肽序列;采用MTT法比较筛选短肽与Herceptin对SK-BR-3细胞生长的抑制率。结果随机挑选的16个克隆对SK-BR-3细胞具有特异性结合力,其中S-1阳性克隆与靶细胞特异结合活性最强,且其短肽序列对SK-BR-3细胞生长具有一定的抑制作用。结论通过噬菌体展示肽库对过表达HER2乳腺癌细胞进行筛选,获得与SK-BR-3细胞高特异性结合的活性短肽序列,为设计乳腺癌靶向药物与导向治疗提供参考数据。

摘要：正由于Smith 率先在1985年将外源基因插入丝状噬菌体f1的外壳蛋白基因Ⅲ区,才使目的基因编码的多肽呈现在噬菌体表面,从而建立了噬菌体表面呈现状技术[1].

摘要：用标准的 Fmoc保护氨基酸 Nα 氨基的固相法合成了 6肽 Ac-XCSSXX-NH2 (— CSS—为保守序列 ,该设计合成的 6肽是从若干单克隆中挑选出与 IL-2结合力最高的 ) ,经 HPLC纯化 ,并通过 MS检测 .分别以Con A诱导的淋巴细胞转化实验和 IL-2诱导的淋巴母细胞转化实验为体外模型 ,以大鼠肝脏移植为体内模型 ,观察小肽对移植排斥的影响 .在 Con A诱导的淋转实验中 ,加入小肽 ( 2 5 0～ 31 .2 5 μg/m L)对淋转反应有明显的抑制作用 ( P 0 .0 1 ) ,在终浓度为 31 .2 5μg/m L时 ,抑制率达到最高 .IL-2诱导的淋转实验得到与上述相符的结果 ,从而进一步表明 :小肽是通过抑制 IL-2和 IL-2 R的结合从而实现其免疫抑制作用的 .在大鼠肝脏移植模型中 :给术后大鼠注射小肽共 5 d( 1 0 mg/kg)

摘要：目的应用噬菌体随机肽库展示技术筛选能与整合素αvβ3分子具特异性结合功能的小肽分子,并对其功能进行初步鉴定。方法根据整合素αvβ3分子细胞外配体结合区域的晶体结构及蛋白质序列设计①～⑤号5条短肽,并作为筛选配基,分别经过3轮"吸附-洗脱-扩增"后,ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序和分析,粘附试验进一步分析化学合成多肽的功能。结果经3轮亲和筛选后,噬菌体克隆得到有效富集,以⑤号肽为代表,ELISA鉴定显示7个阳性克隆能与⑤号合成短肽有较强结合活性。进行DNA测序,多重序列分析获得2个多肽基序:****HRH,HWR****。粘附试验表明化学合成多肽FITC-HLPWHRH,FITC-HWRLHPH与表达整合素αvβ3的细胞株具有一定的亲和性,且结合能被αvβ3分子配体纤维连接蛋白所抑制。结论通过噬菌体随机展示肽库技术在体外对合成的短肽进行筛选,可以获得与整合素αvβ3分子具特异性结合能力的小肽分子。

摘要：目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果 :3轮筛选后随机挑取 2 6个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 16个克隆可与N36结合 ,将其中 10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列 ,每一克隆至少含有 2个疏水氨基酸 ,其中 9个克隆均有WW ,7个克隆有WWH保守序列。挑选阳性噬菌体克隆No 8进一步鉴定 ,游离N36肽阻断No 8克隆与固相化N36结合 ,C34肽竞争抑制N36肽与No 8克隆结合 (IC50 为 12 5 μg ml)。 结论 :表达WW保守序列的肽模拟HIV 1gp4 1C螺旋与N螺旋结合 ,该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持。

摘要：[目的]通过噬菌体的肽库筛选并合成具有抑制ICL活性的多肽。[方法]以ICL为基础,利用Discovery Studio 2.1中ligentfit模块,将筛选出多肽与优化后ICL进行分子对接。合成并进行生物活性检测。[结果]通过噬菌体肽库筛选得到6条的七肽成功和ICL对接。合成后的6条七肽质谱检测结果均正确。对6条七肽进行体外生物活性检测,对ICL酶的活性均明显具有抑制的作用。其中3条七肽抑制率超过了70%。[结论]利用虚拟筛选优化了ICL抑制剂的筛选过程,筛选并合成ICL抑制剂,抑制率为75%、64%、66%、77%、78%、67%,为抗结核多肽药物研发提供基础。

摘要：目的:应用新的噬菌体删减筛选技术筛选能与整合素αvβ_3具特异性结合功能的小肽分子,并简单分析其生物学功能。方法:以高表达整合素αvβ_3分子的M2黑色素瘤细胞株为靶细胞,以低/不表达整合素αvβ_3分子的C23黑色素瘤细胞株为吸附细胞,对噬菌体随机七肽库进行消减筛选,ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序和分析。结果:经过4轮亲和筛选,3轮删减筛选,经固定ELISA鉴定,随机选取50个克隆得到2个能特异性与M2细胞结合而不与C23细胞结合的阳性克隆,进行DNA测序后,其多肽序列如下:HTPPYIL;MNFNAML。结论:通过噬菌体噬菌体删减筛选技术获得与整合素alpha v beta 3具特异性结合能力的小肽分子,为基于整合素alpha v beta 3的肿瘤血管生成的早期诊断及治疗的多肽药物前体设计提供实验依据。

摘要：目的获得与人前列腺癌细胞系PC3M细胞特异结合的短肽,作为人前列腺癌靶向治疗的先导化合物。方法以PC3M细胞为靶细胞,正常人前列腺细胞为吸附细胞对噬菌体7肽库进行差减筛选,用细胞ELISA、免疫荧光细胞化学染色鉴定阳性噬菌体克隆并测序。结果经三轮筛选,从随机挑选的10个噬菌体克隆中得到8个能特异性与PC3M细胞结合,而不与正常人前列腺细胞结合的阳性克隆。其氨基酸序列有一定同源性。结论得到多个序列不同的特异性结合PC3M细胞的噬菌体克隆。本实验获得的短肽具有一定的肿瘤亲合力和特异性,为针对不同位点的靶向药物设计提供了实验依据。