摘要：根据已发表的犬瘟热病毒 OP株核酸序列设计 2对引物 ,以犬瘟热病毒 OP株感染 Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板 ,应用 RT- PCR扩增出 F基因的 76 9、832 bp片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进 p GEX- 6 p-1载体中谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)基因的下游 ,再将重组质粒转化入宿主菌 BL2 1 中 ,在 37℃ 1 .0 mmol/ L IPTG诱导下 ,F基因 2个片段获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,确定所表达的融合多肽大小分别为5 4 0 0 0、5 6 0 0 0。将表达产物回收后混合免疫小鼠 ,IFA显示 ,免疫小鼠血清能与病毒感染细胞呈现特异反应 ,并表现出 1∶ 1 6的中和抗体活性 ,表明体外表达的

摘要：根据马立克氏病病毒 ( MDV)强毒株 GA的基因序列 ,设计并合成了 1对引物 ,以强毒株 G2基因组DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白 g I基因阅读框 ( ORF)中 ,除去其 N-端编码疏水区 1 6 5个碱基对 ( bps)以外的部分 ;将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体 p GEX-6 P-1中谷胱甘肽转移酶( GST)基因的下游 ;将重组质粒转化入大肠杆菌 BL2 1 株 ,在 1 .0 mmol/L IPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,g I-GST基因融合蛋白获了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝胶电泳和 Western-blotting试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 30 0 0。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与 MDV感染的鸡胚成纤维细胞 ( CEF)在免疫荧光试验 ( FA)中 ,呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 G2株 MDV g

摘要：根据马立克氏病病毒 (MDV)强毒株GA的基因序列 ,设计和合成一对引物 ,以特超强毒 6 48株基因组DNA为模板 ,通过PCR技术 ,扩增其囊膜糖蛋白gI基因阅读框 (ORF)中 ,除去其N_端编码疏水区的 16 5个碱基对 (bp)以外的其余部分 ;将PCR产物按正确的阅读框架定向克隆到表性载体pGEX_6P_1中谷胱甘肽转移酶 (GST)基因的下游 ;将重组质粒转化进大肠杆菌BL2 1株 ,在 1.0mMIPTG浓度和 30℃的条件下诱导 ,gI_GST基因融合蛋白获得了理想的表达 ;经聚丙烯酰胺凝脉电泳 ,West ern_blot试验 ,验证其表达的融合蛋白产物大小为预期的 6 3kD。将表达产物回收后免疫小鼠 ,所得抗血清可与MDV感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF)在免疫荧光试验 (FA)中呈细胞膜阳性染色。试验结果表明 ,在大肠杆菌中表达的 6

摘要：根据网状内皮组织增生症病毒 ( REV) SNV株 env基因的序列 ,设计并合成了 2对引物 ,利用该引物 ,以中国地方分离株 SD990 1、HA990 1前病毒基因组 c DNA为模板 ,通过 PCR技术 ,成功地从国内分离的 2株 REV毒株中扩增出env基因 ,并将其克隆到 p UCm-T载体中测序。将所得序列与 SNV株进行比较 ,分析其同源性。结果表明 :在核苷酸水平上 ,参考株 SNV株的 env基因与 2株中国分离株的同源性分别为 97.7%和 95 .0 % ;在氨基酸水平上 ,其同源性分别为 96.9%和 92 .7%。分析进化关系 ,HA990

摘要：根据马立克氏病病毒 ( MDV)国际标准株 GA株的基因序列设计合成了可扩增 g I基因 ( 1 0 60 bp)的引物 .用 PCR技术 ,以 CVI988基因组为模板 ,扩增得到了预期大小的 PCR产物 .将此 PCR产物和p U C1 8经同样的限制性内切酶 Kpn 和 Bam H 处理后 ,连接、转化、鉴定 ,得到了含有 g I基因的质粒 .将此质粒进行序列分析 ,比较了它与其他强毒和超强毒株的同源性 .用 DNAstar软件对其编码的氨基酸的疏水性和抗原性进行了预测 .