摘要：badh2是控制水稻香味的主效基因,其与等位非香基因Badh2功能差异主要在于第七外显子上的8 bp缺失及3个SNP,开发其易于分辨且稳定的功能标记将有助于香稻分子育种。本研究基于四引物扩增受阻突变体系pcr(Tetra Primer Amplification Refractory Mutation System pcr,Tetra-primer ARMS pcr)原理,在功能差异位点外侧两引物一致的情况下,分别设计与badh2和Badh2完全匹配的5'端添加错配碱基的靶引物。结果表明,经1%的琼脂糖凝胶电泳后,由完全匹配引物组成的pcr体系基本能分辨badh2/Badh2基因型,但目标条带较模糊;而引物中5'端引入错配碱基的pcr体系能产生更明晰、易于分辨的目标条带。本研究将有助于香稻分子育种及为其他类似分子标记的优化提供借鉴。

摘要：四引物ARMSpcr是检测SNP有效、快速、简便的方法。绵羊BMPRIB基因是控制Booroola绵羊多胎性状的主效基因,此研究目的在于建立一种对BMPRIB基因四引物ARMSpcr检测方法。根据四引物ARMSpcr技术原理,在绵羊BMPRIB基因突变位点(A746G)设计一对特异性引物,并在突变点两侧设计一对参照引物,用来扩增含有突变点的DNA片段,可在一步pcr反应中根据电泳图谱准确判断绵羊个体的BMPRIB基因型,对比pcrRFLP检测结果表明,所建立的方法简单,操作简便,大大提高了检测效率。

摘要：以苦瓜高抗、高感白粉病的父母本及其F2代为试材,根据双本测序比对获得的SNP突变位点来设计四引物ARMS pcr分子标记引物。采用正交设计L16(44)方法对模板DNA、dNTPs、Mg2+、Taq DNA聚合酶4个因素和内外引物的浓度比进行体系优化,并利用优化后的体系对引物进行筛选。研究了适用于苦瓜的四引物ARMS pcr分子标记开发及引物筛选体系,以期为苦瓜抗白粉病分子标记辅助选择提供参考依据。结果表明:对优化后的四引物ARMS pcr体系验证,能正确地在父母本及其F2代中分型,优化后的体系适用于苦瓜抗白粉病的四引物ARMS pcr分子标记的筛选。

摘要：为建立绵羊线粒体基因组SNP的四引物扩增受阻突变体系(tetra-primer amplification refractory mutation system,Tetra-primer ARMS)pcr检测方法,选择小尾寒羊线粒体T1112C和C11606T2个SNP,在等位基因特异pcr基础上,根据错配原理设计4条引物,优化pcr反应体系,采用琼脂糖凝胶电泳检测pcr产物。结果表明:T1112C位点检测中,所有个体均能扩增出569 bp最长片段的外引物产物(阳性对照),扩增出349 bp片段的个体为野生型,扩增出263 bp片段的个体为突变型。C11606T位点检测中,所有个体均能扩增出572 bp最长片段的外引物产物(阳性对照),扩增出408 bp片段的个体为野生型,扩增出213 bp片段的个体为突变型。在每个线粒体多态位点均检测到野生型和突变型2种基因型,没有发现异质性。应用Tetra-primer ARMS pcr方法,经一次pcr即可判定线粒体SNP位点的基因型,该方法快速、简便,可应用于绵羊线粒体SNP分型。

摘要：根据Wx-mq基因存在的单核苷酸变异,利用四引物扩增受阻突变体系pcr(Tetra-primer ARMS-pcr)的方法设计特异引物,对12个水稻品种(或品系)以及武育粳3号(不含Wx-mq基因)/关东194(含Wx-mq基因)的F2分离群体进行扩增,依据其pcr产物的带型,可以准确区分出Wx-mq基因纯合、非Wx-mq基因纯合以及杂合基因型三种类型,其电泳结果与成熟后对胚乳外观特性鉴定完全一致。因此,作为一种简单、低成本的实用技术,四引物ARMS-pcr可以广泛用于Wxmq基因水稻的资源鉴定和分子标记辅助育种。

摘要：根据p/tms12-1基因存在的单核苷酸变异,利用四引物扩增受阻突变体系pcr(Tetra-primer ARMS-pcr)的方法设计特异引物,对11个两系不育系水稻品种(或品系)以及2个常规稻品系进行扩增。根据其pcr产物带型,可以准确鉴定光温敏核不育基因p/tms12-1的基因型,其检测结果与通过CAPS标记检测的结果完全一致。该方法成本低、简单、可靠,可用于p/tms12-1基因的鉴定和分子标记辅助育种。

摘要：四引物扩增受阻突变体系pcr是一种快速简便检测SNP的方法。基于该技术原理,结合籼型S5^i与粳型S5^j基因存在的单核苷酸差异设计特异性引物,并用8个籼稻1、8个粳稻及4个籼粳杂交后代F_1,进行pcr扩增检测验证。依据产物的电泳谱带类型能准确区分出S5^i纯合基因型、S5^j纯合基因型及杂合基因型3种类型,其扩增带型与基因型完全吻合。这表明所设计引物能很好地对S5基因的籼粳属性进行区分,可广泛应用于水稻种质资源相应目的基因的鉴定,为籼粳杂种优势利用的亲本有效选择和籼粳分化研究提供重要参考。

摘要：为提高单核苷酸多态性检测的通量,引入多重嵌合引物pcr和毛细管电泳对四引物扩增受阻突变体系pcr进行改进.针对乳腺癌位点rs4784227(C>T),rs1219648(G>A)和rs3803662(T>C)设计特异性嵌合引物,经一次pcr扩增后,通过毛细管电泳分析产物长度,同时确定3个位点的基因型.70份全血和口腔拭子样本,电泳结果均与测序一致,实现成功分型.本方法仅需一次pcr和一次毛细管电泳即可获得3个位点的分型结果,操作简单、快速准确.

摘要：为探讨两对交叉引物pcr(pcr-CTPP)技术的原理并提高SNP分型的准确性,以人类MTHFR基因1298位点突变为例,通过设计合理的引物、优化引物终浓度及复性温度等重建pcr-CTPP检测系统,对比常规pcr-CTPP和改良的pcr-CTPP检测系统的可靠性。结果表明,改良的pcr-CTPP检测系统更加准确,支持了常规方法存在理论缺陷的观点;批量鉴定结果进一步验证了改良方法的可靠性。该技术有望在医学和分子生物学等领域广泛应用。