摘要：【目的】以猪链球菌2型NT15B菌株为研究对象,通过优化发酵培养基组分提高菌株活菌数,降低生产成本,为猪链球菌2型NT15B菌株的高密度培养及猪链球菌病疫苗的大规模生产和推广提供参考。【方法】试验以培养的猪链球菌2型NT15B菌株最高活菌数为筛选指标,通过单因素试验筛选菌株发酵培养基中碳源、氮源(有机氮源和无机氮源)、无机盐金属离子、磷酸缓冲液的最佳组分及浓度,并根据单因素筛选结果选择碳源浓度、有机氮源总浓度、有机氮源比例、磷酸盐缓冲液浓度4个因素各3个水平设计正交试验,并进一步进行多因素的筛选与验证。【结果】猪链球菌2型NT15B菌株发酵培养基最优条件为6.0 g/L蔗糖、1.0 g/L尿素、10 g/L酵母提取物YE7与20 g/L酵母蛋白胨Nucel 887混合氮源,1.0 g/L NaCl、9.58 g/L K_(2)HPO_(4)·3H_(2)O、1.09 g/L KH_(2)PO_(4)、1 mmol/L MgSO_(4)·7H_(2)O、0.3 g/L L-抗坏血酸。采用此最优组合,摇瓶培养猪链球菌2型NT15B活菌数最高达80.83×10^(8)CFU/mL,较优化前提高256.08%。【结论】优化后的培养基能有效提高猪链球菌2型NT15B菌株活菌数,降低了生产成本,为发酵罐水平的优化提供参考。

摘要：采用L9(315)正交设计,研究了B5培养基营养组分对沙打旺组培根增殖的影响;并采用玻璃皿滤纸培养法,对其培养滤液提取物进行生物测定以验证沙打旺组培根的化感活性。结果显示:培养基的所有营养组分中,Fe2+对沙打旺组培根增殖的影响最大,蔗糖、H2PO4+、Mg2+、Mn2+、Cu2+、Zn2+、BO33-、Co2+、I-、C8H12ClNO3+C12H18Cl2N4OS+C6H5O2N+C6H12O6的影响次之,氮、Ca2+、MoO42-和NAA的影响最小。根据不同养分条件下沙打旺组培根干重的极差分析,筛选出适宜沙打旺组培根快速增殖的优化培养基。培养滤液提取物的生物测定结果表明沙打旺组培根培养过程中可能产生化感物质;化感作用强度的差异预示营养胁迫可能影响其化感物质的产生。研究为沙打旺组培根再生与繁殖提供一定依据,并揭示养分条件可能是该植物表达化感作用的影响因素。

摘要：近年来,国家食品药品监督管理局基于药物安全性的考虑对于治疗性蛋白的质量提出了更高的要求,而蛋白多聚体能引起人体免疫反应,被认为是关键质量属性(critical quality attributes,CQA)。采用培养基组分添加试验和操作参数控制试验的方法,系统研究了培养基中氧化还原物质和培养过程参数(温度和p H值)对抗体多聚体形成的影响。结果表明,半胱氨酸的添加能显著抑制多聚体的形成,培养基中半胱氨酸添加浓度增至30 mmol/L,多聚体含量下降40%。而铜离子的添加浓度从500μmol/L降至0μmol/L,多聚体含量则降低了43%。培养温度从35℃降低至32℃,重链结合蛋白(Bi P)和蛋白二硫键异构酶(PDI)的表达水平均提高了89%,细胞翻译后修饰能力显著加强,分泌至上清液中的抗体多聚体含量相应下降了38%。研究结果明确了生产工艺和产品关键属性之间的关系,为后续设计优化以质量为先导的培养过程,生产质量可控、安全、有效抗体药物奠定了基础。

摘要：采用响应面法在摇瓶水平对重组巴斯德毕赤酵母合成内切几丁质酶的培养基组分进行优化,并探讨重组内切几丁质酶降解几丁质的最佳反应条件。首先对培养基中显著影响内切几丁质酶活力的关键组分通过Plackett-Burman试验设计进行筛选;然后通过Box-Behnken试验设计和响应面法确定关键组分的最佳浓度。结果筛选出3个具有显著效应的关键组分为酵母膏、油酸和吐温-80,最佳浓度分别为:2.45%、0.17%和0.62%。优化后的最佳培养基组成为:2.45%酵母膏、2.00%蛋白胨、0.50%酵母氮碱(YNB)、0.50%甲醇、0.17%油酸、0.62%吐温-80和0.40%PTM1。在该培养基中,重组巴斯德毕赤酵母在摇瓶水平(25m L/250m L)发酵生产内切几丁质酶的活力高达92.26U/m L。重组内切几丁质酶催化几丁质降解的最佳反应条件为:粉末几丁质浓度为4%,p H和温度分别为7.0和30℃,反应时间为10h。研究结果为后期在发酵罐中大规模生产内切几丁质酶和几丁寡糖提供了基础。

摘要：6-BA_(0.5-1.5)mg/L在蓝莓初代芽的诱导培养中效果与ZT1-2mg/L接近。TDZ0.02mg/L在继代增殖培养中效果与ZT1-2mg/L接近。6-BA_(1)+ZT_(1)+NAA_(0.2)mg/L可在初代及继代培养中应用,效果较好。6-BA价格低廉,TDZ使用浓度极低均可代替ZT应用于蓝莓组培。作者设计的B(WM)培养基效果优于WPM改良培养基。

摘要：为了提高解淀粉芽孢杆菌LDJ11的γ-聚谷氨酸产量,在前期单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman试验设计方案,从初始发酵培养基组分中挑选出影响γ-聚谷氨酸产量最显著的3个因素,进而采用最陡爬坡试验方法逼近γ-聚谷氨酸最高产量区域,并设计三因素三水平的Box-Behnken试验,以获得解淀粉芽孢杆菌LDJ11的最优培养基组分.结果表明:产γ-聚谷氨酸解淀粉芽孢杆菌LDJ11的最优培养基组分为:谷氨酸钠84.53 g/L,柠檬酸钠12 g/L,甘油30 g/L,(NH_4)_2SO_4 21.67 g/L,CaCl_20.07 g/L,MnSO_4·H_2O 0.1 g/L,MgSO_4·7H_2O 0.5 g/L,K_2HPO_4·3H_2O 0.5 g/L,FeCl_3·6H_2O 0.06 g/L.在此配方下,解淀粉芽孢杆菌LDJ11的实际γ-聚谷氨酸平均产量可达37.048 g/L,是优化前产量(26.730 g/L)的1.39倍,并与理论预测最大值36.450 g/L非常接近.

摘要：为筛选出适宜于矾根花粉萌发的离体培养基和培养条件,本研究以矾根‘红妆魅影’为实验材料,采用单因素实验分别对培养基的pH值、培养温度及培养时间进行优化,然后用正交设计试验进一步优化矾根花粉萌发的离体培养基配方。研究结果表明当培养基pH 5.5、培养温度为25℃、培养时间达100 min时,萌发效率最高;对矾根‘红妆魅影’花粉萌发的影响程度依次为蔗糖>PEG4000>硼酸>氯化钙;最优处理组合为A3B1C3D5(11),即在10%蔗糖+0 mg/L氯化钙+100 mg/L硼酸+20%PEG4000的处理组合下,矾根‘红妆魅影’的花粉平均萌发率最高达73.2%。本研究优化所得的培养基组分及培养条件可为矾根属植物有关花粉活力相关研究奠定基础。

摘要：利用原生质体常压室温等离子体(ARTP)诱变方法选育西索米星高产菌株,经诱变筛选获得一株高产菌株I4-10,其西索米星的生物效价达到1389 U/mL,较原始菌株提高了35.4%。通过对高产菌株I4-10进行碳源、氮源优化,确定可溶性淀粉和牛肉粉是突变菌株I4-10的最适碳源和氮源。进一步采用响应面实验设计方法优化发酵培养基,结果表明黄豆饼粉和DL-蛋氨酸的添加量为显著影响因素,经优化其最适添加质量浓度分别为32.78 g/L和1.75 g/L。在此最适工艺下,西索米星的生物效价提高至1849 U/mL,较原始菌株提高了80%。最后对原始菌及高产突变株中西索米星代谢途径及菌株生长相关的关键酶进行转录水平比较分析,初步解析了突变菌株I4-10高产西索米星的机制。

摘要：为筛选大丽花花粉活力有效的测定方法,了解大丽花不同品种的花粉活力,以大丽花栽培品种为试验材料,采用4种方法检测大丽花花粉活力,在此基础上,采用单因素试验和正交设计试验分别对大丽花花粉的离体萌发培养条件及培养基组分进行优化,得到最优方案后进一步检测、比较不同品种之间的花粉活力。研究结果显示,TTC染色法不能使花粉着色,I_(2)-KI和孢粉染色法不能有效区分有活力和无活力花粉,离体萌发法效果良好,可准确直观地反映大丽花花粉活力状况,是测定大丽花花粉活力的有效方法。当培养条件为pH 6.0、温度25℃、培养时间2.5 h时,花粉萌发率最高。培养基组分对大丽花花粉萌发的影响程度依次为PEG>蔗糖>硼酸,实际最佳处理组合为A_(3)B_(4)C_(2),即PEG400025 g/L、蔗糖60 g/L、硼酸50 mg/L的处理组合下,大丽花花粉萌发率最高达62.1%。采用上述获得的最优方案检测22个大丽花品种的花粉活力,花粉萌发率为11.75%~78.72%,不同品种的花粉萌发率差异大,其中,‘兰花公主’的花粉萌发率最低,‘波彻儿’最高。大丽花品种的花粉活力多样性丰富,所测定的22个大丽花品种有14个品种正常可育,杂交时可用作父本;8个品种为半不育或低不育,杂交时更适合作母本。

摘要：为了开发用于污水治理的高絮凝活性菌株,拟对高岭土有44.8%絮凝率的芽孢杆菌2645进行16S rDNA鉴定,并利用单因素试验和正交试验对其培养基组分进行优化。经过16S rDNA鉴定表明,芽孢杆菌2645与Bacillus wiedmannii strain FSL W8-0169同源性最高,培养基优化单因素试验结果显示,培养基最佳碳源为玉米粉,最佳氮源为脱脂大豆粉和酵母粉,最佳无机盐为KCl;将脱脂大豆粉、酵母粉、KCl和玉米粉4因素按L_(16)(4^(5))设计正交试验,结果表明,最佳配比为脱脂大豆粉12 g/L、酵母粉5 g/L、KCl 6 g/L、玉米粉8 g/L。培养基组分优化后,芽孢杆菌2645絮凝率可以达95.3%,提高了1.13倍。