摘要：目的 :研究siRNA(smallinterferenceRNA)对bcl- 2基因表达的抑制作用。方法 :依据Ambion公司在网上提供的设计软件 ,设计合成以bcl- 2基因为靶标的siRNA ,通过脂质体将合成的siRNA转入U2 5 1细胞株 ,以未转染细胞以及bcl- 2的反义药物G3139为对照 ,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制以及流式细胞仪检测细胞周期的改变 ,用RT -PCR和免疫组织化学法检测siRNA对bcl- 2表达的抑制作用。结果 :MTT显示各时点细胞生长以及存活率 ,在siRNA 2、3、5、6与siRNA 1、4组以及对照组和脂质体组间均有显著差异 (P 0 0 5 )。RT -PCR以及免疫组织化学法显示 ,siRNA 2、3、5、6组bcl- 2基因表达明显低于对照组、脂质体组、反义组以及siRNA 1、4组 (P <0 0 5 )。流式细胞仪检测细胞周期结果显示 ,siRNA 1- 6组以及反义组细胞阻滞于S期。结论 :体外转录合成的siRNA可抑制U2 5 1细胞bcl- 2基因的表达 ,效率可达 5 0 %以上。

摘要：背景:癫痫发作后大脑海马神经元有明显受损,而癫痫后神经细胞损害有坏死和凋亡两种形式,在癫痫神经损害中起着重要作用。腺苷作为内源性神经保护递质,可以抑制兴奋性氨基酸的释放、氧自由基的产生以及一氧化氮的作用,同时还有改善脑血流以及抗惊厥作用。但有关腺苷与癫痫后细胞凋亡之间的关系尚不完全清楚。目的:观察腺苷受体激动剂2-CAdo对癫痫大鼠海马神经细胞bcl-2,Bax基因表达的影响,进一步探讨腺苷抗惊厥及脑保护的作用机制。设计:以实验动物为研究对象,完全随机对照实验研究。单位:一所油田总医院的儿科和普外科,一所大学医院儿内科。材料:实验于2002-10/2003-03在哈尔滨医科大学实验动物学部及病理教研室完成。体质量200～250g健康成年Wistar大鼠104只,雌雄各半。动物随机分为正常组8只,致痫组32只,致痫+2-CAdo组32只,致痫+生理盐水组32只。干预:按1.5mg/kg腹腔注射马桑内酯(由哈尔滨医科大学药理学部提供)建立动物癫痫模型,全部大鼠于注射后5min出现抽搐,持续时间一两分钟。致痫+2-CAdo组于马桑内酯注射前1h及抽搐后1h经尾静脉注射2-CAdo(由ICN公司提供)剂量为0.6mg/kg,致痫+生理盐水组于马桑内酯注射前1h及抽搐后1h经尾静脉注射等量的生理盐水。主要观察指标:海马CA1区bcl-2。

摘要：背景:衰老的细胞死亡的实质就是细胞凋亡,凋亡从某种程度上可理解为一系列基因活动的结果。因此抑制癌基因的表达即可延长细胞的寿命,延缓脑组织衰老。目的:观察老年小鼠脑神经细胞凋亡和相关基因表达的变化及黄芪的干预效应。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:佳木斯大学基础医学院生物化学教研室。材料:实验于2003-12/2004-05佳木斯大学实验动物中心及生物化学实验室完成。选用健康昆明种小鼠24只。其中2月龄小鼠8只(青年组),12月龄小鼠16只。将16只12月龄小鼠随机分为2组:黄芪治疗组和老年对照组,各8只。方法:①黄芪治疗组:灌胃10.8g/(kg·d)黄芪水煎剂(黄芪购于佳木斯大学第一附属医院中药局,由佳木斯市药品检验所鉴定,制成含生药浓度为2kg/L的水煎剂);老年对照组和青年组:灌服与黄芪水煎剂体积相等的温开水。均连续干预30d。②各组小鼠连续干预30d后断头处死,立即取出脑组织,取大脑中部中性甲醛固定。余脑组织制成制成线粒体悬液,采用黄嘌呤氧化酶法及TBA化学比色法测定脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量。用原位末端标记法观察老年小鼠神经细胞凋亡率(凋亡的细胞核呈黄色,为阳性细胞),并用免疫组织化学法检测相关基因bcl-2的表达。细胞液染成棕色者为基因表达阳性细胞,400倍显微镜下计数400个细胞,-:阳性细胞所占百分比51%。③等级和计量资料差异比较要用秩和检验和t检验。主要观察指标:黄芪对老龄小鼠脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、脑细胞凋亡率、脑组织bcl-2基因表达强度的影响。结果:小鼠24只均进入结果分析。①脑线粒体锰超氧化物歧化酶含量:青年组和黄芪治疗组明显高于老年对照组(P<0.05)。②脑线粒体丙二醛含量和脑细胞凋亡率:青年组和黄芪治疗组明显低于老年对照组(P<0.01)。③脑组织bcl-2基因表达:青年组和黄芪治疗组与老年对照组比较,差异明显(P<0.01)。结论:黄芪通过影响锰超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量及bcl-2基因表达对老年小鼠脑神经细胞凋亡有明显的抑制作用。

摘要：背景:研究证实,参附注射液对各种休克、心力衰竭、心肌缺血以及室上性/室性心律失常均有改善治疗作用,对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有良好的保护作用。目的:观察参附注射液对急性缺血再灌注损伤大鼠心肌凋亡相关基因bcl-2,Bax和c-Fos蛋白表达的影响。设计:完全随机分组设计,对照实验。单位:重庆医科大学附属第二医院麻醉科。材料:实验于2004-04/12在重庆医科大学附属第二医院麻醉教研室完成。选用健康成年Wistar大鼠35只,由解放军第三军医大学大坪医院实验动物中心提供。参附注射液是中医“回阳救逆”参附汤的中药配方,其主要成分是人参皂甙及乌头类生物碱(雅安三九药业有限公司出品,规格10mL/支,批号:030110)。方法:采用在体心脏缺血再灌注模型,35只大鼠按随机数字表法分为5组,每组7只。①假手术组:只穿线不结扎,静脉注射生理盐水8mL/kg,观察120min。②参附注射液30min组:结扎前15min静脉注射参附注射液8mL/kg,结扎左冠状动脉前降支40min,再灌注30min。③参附注射液120min组:再灌注120min,余同参附注射液30min组。④生理盐水30min对照组:结扎左冠状动脉前降支前15min静脉注射生理盐水8mL/kg,结扎左冠状动脉前降支40min,再灌注30min。⑤生理盐水120min对照组:再灌注120min,余同生理盐水30min组。应用免疫组化法检测各组大鼠心肌凋亡相关基因bcl-2,Bax和c-Fos蛋白的表达量。主要观察指标:各组大鼠心肌凋亡相关基因bcl-2,Bax和c-Fos蛋白的表达量。结果:35只大鼠全部进入结果分析,无脱失。①与假手术组比较,生理盐水30min组和120min组大鼠心肌bcl-2,Bax和c-Fos蛋白表达水平显著升高(P<0.01),bcl-2/Bax比率显著降低(P<0.01)。②与相应生理盐水组比较,参附注射液30min组和120minbcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.01),Bax和c-Fos蛋白表达水平显著降低(P<0.01),bcl-2/Bax比率显著升高(P<0.01)。结论:参附注射液对缺血再灌注心肌保护效应可能与其促进bcl-2蛋白高表达、抑制Bax与c-Fos蛋白表达、增加bcl-2/Bax比率,从而抑制心肌细胞凋亡有关。

摘要：背景:脑缺血时,抑制神经细胞凋亡的bcl-2基因和诱导细胞凋亡的Bax均参与了其发病过程。扇贝多肽的体外抗氧化和抗凋亡作用,是否可产生对抗脑缺血后中枢神经细胞凋亡的保护作用?目的:观察扇贝多肽对大鼠脑缺血半影区内bcl-2和Bax蛋白参与的细胞凋亡的抑制及其脑保护作用。设计:随机对照实验。单位:青岛大学医学院的人体解剖学教研室。材料:实验于2000-03/04在青岛大学医学院神经解剖实验室完成。选择成年Wistar大鼠32只,随机分为扇贝多肽组、蒸馏水组、模型对照组、假手术组,8只/组。扇贝多肽由中国水产科学院黄海水产研究所提供。干预:扇贝多肽组、蒸馏水组和模型对照组采用颈外动脉线栓法建立缺血再灌注模型,假手术组不予造模。扇贝多肽组术前2d腹腔注射体积分数0.1的扇贝多肽0.1mL/kg,1次/d,再灌注前15min加注1次;蒸馏水组术前2d腹腔注射双蒸水0.1mL/kg,1次/d,再灌注前15min加注1次;模型对照组和假手术组术前不给药。然后扇贝多肽组、蒸馏水组和模型对照组开始造模,从颈外动脉插入4-0尼龙线,经颈总动脉分叉处、颈内动脉颅外段进入颈内动脉颅内段到达大脑中动脉分支处阻塞大脑中动脉的起始部,引起大脑中动脉供血区的急性脑缺血。动物苏醒后出现左霍纳综合征,提尾时右前肢内收屈曲,爬行时向右划圈为造模成功。假手术组手术过程不闭塞大脑中动脉,其余步骤同以上3组。将各组大鼠断头取脑,进行免疫组化bcl-2和Bax蛋白的测定,结果用免疫反应产物吸光度(A)值来表示bcl-2和Bax蛋白在脑组织缺血半影区的表达水平。主要观察指标:各组大鼠脑组织缺血半影区bcl-2和Bax蛋白表达的差异。结果:经补充后32只大鼠进入结果分析。①缺血半影区bcl-2蛋白的表达:模型对照组及蒸馏水组吸光度值明显高于假手术组[0.453±0.048,0.510±0.061,0.211±0.023(F=683.78,q=21.13～24.74,P<0.01)];扇贝多肽组(0.954±0.059)与模型对照组及蒸馏水组相比呈显著过表达(q=38.08～41.69,P<0.01)。②缺血半影区Bax蛋白的表达:模型对照组及蒸馏水组吸光度值明显高于假手术组[0.834±0.082,0.790±0.102,0.125±0.017(F=590.44,q=49.57～51.98,P<0.01)];扇贝多肽组(0.471±0.045)与模型对照组及蒸馏水组相比表达受到显著抑制(q=23.80～26.23,P<0.01)。结论:扇贝多肽能够上调脑缺血半影区内抑制神经细胞凋亡的bcl-2蛋白水平,同时降低半影区内诱导神经细胞凋亡的Bax蛋白的表达,从而在阻止脑缺血再灌注后细胞凋亡启动中起制动作用,保护脑缺血后半影区内神经元的功能。

摘要：目的:探讨乙酰肝素酶(HPA)反义寡脱氧核苷酸(AS-ODN)对人胃癌细胞株SGC-7901细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:设计合成HPAAS-ODN,用脂质体介导法转染SGC-7901细胞,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染前后细胞HPA-mRNA及p53、bcl-2基因的表达;用倒置相差显微镜及扫描电镜观察转染前后细胞的形态学变化;用DNA末端原位标记染色法(TUNEL)检测转染前后细胞的凋亡指数;用流式细胞仪检测转染前后细胞凋亡率的变化。结果:HPAAS-ODN转染后,SGC-7901细胞内HPA-mRNA表达下降,p53的表达量升高,bcl-2的表达量降低;细胞凋亡指数和凋亡率升高;出现了典型的凋亡细胞的形态学变化。结论:HPAAS-ODN可有效地抑制胃癌细胞HPAmRNA的表达;并通过下调bcl-2,上调p53的表达,诱导胃癌细胞凋亡。

摘要：目的:应用分子克隆技术,针对人bcl-2目的基因设计3个siRNA靶点和一个阴性对照序列,构建4对shRNA重组慢病毒表达载体,并进行测序验证鉴定。方法:以设计的有效靶序列进行引物合成,将单链引物退火成双链oligo序列,连接入经Age I和EcoR I双酶切线性化的慢病毒RNA干扰载体中,经转化DH5α感受态细胞并筛选出阳性转化子,采用PCR扩增和DNA测序分别鉴定阳性克隆。结果:PCR扩增产物经凝胶电泳后阳性克隆得到335bp条带,阴性克隆得到298 bp条带,DNA测序结果证实其含有设计合成序列。结论:成功构建4对bcl-2shRNA重组慢病毒表达载体,为研究靶向bcl-2 siRNA对肿瘤细胞增殖抑制与诱导凋亡作用及基因治疗研究奠定了实验基础。

摘要：在大多数类型淋巴瘤中,凋亡指数显著减少、增生指数显著增高、细胞凋亡减少是淋巴瘤发生发展的主要原因。细胞凋亡受凋亡相关基因的调控。bcl-2是一种原癌基因,它具有抑制细胞淍亡的作用。91%的滤泡性淋巴瘤(Fls)中可发现染色体t(14;18)(q32;q21)-IgH/bcl-2。bcl-2可作为诊断Fls和染色体表型为t(14;18)的淋巴瘤的重要依据。细胞凋亡受阻还是导致肿瘤细胞对细胞毒药物耐药的原因之一。bcl-2基因编码的p26-bcl-2过度表达引起肿瘤细胞抵抗凋亡,从而导致肿瘤细胞对化疗耐药。bcl-6是生发中心结构来源的淋巴瘤尤其是弥漫大B细胞淋巴瘤(defuselargeBcelllymphoma,DLbcl)的特异性标志,它的功能是阻止细胞分化和淍亡,促进细胞的发育增殖,根据bcl-6在FLs中特异性表达,有助于鉴别FLs与其他淋巴细胞异常增生性疾病。bcl-2和bcl-6与淋巴瘤的预后是否相关,目前仍存在有争议。bcl-6和bcl-2有密切关系,bcl-2引起肿瘤对治疗耐药,可能是多基因作用的复杂过程,bcl-2和bcl-6基因成为淋巴瘤治疗的新靶点。已有研究设计针对bcl-2的拮抗剂及针对bcl-6的抑制性复合物特异肽段(BPI),通过调控bcl-2和bcl-6的表达以达到治疗淋巴瘤的目的。

摘要：目的:比较转染Survivin、bcl -2反义寡核苷酸(ASODN)对胆囊癌细胞系 GBC SD的凋亡促进作用。方法:设计并合成特异性靶向 Survivin及 bcl- 2 的 ASODN。胆囊癌细胞分为 5 组:空白对照组、Survivin ASODN转染组、bcl- 2 ASODN转染组、Survivin SODN转染组和bcl -2 SODN转染组,转染24h后,采用逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测Survivin基因、bcl- 2基因表达的变化,流式细胞仪技术检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测 ASODN对细胞的生长抑制率。结果:转染 Survivin及bcl 2 ASODN后,胆囊癌细胞内Survivin基因表达下调 47.8%,bcl- 2 基因表达下调 52.4%;细胞凋亡率分别为(11.4±3. 9)%、(7. 3±3. 2)%,与对照组差异有统计学意义(P< 0. 01)。而转染 SurvivinASODN组及bc1 2ASODN组相比差异也有显著性(P<0.05)。两转染组相对于空白对照组的生长抑制率分别为54.3%、41.6%。结论:Survivin和bcl 2反义寡核苷酸均可有效的抑制Survivin及bc1- 2基因的表达,从而诱导胆囊癌细胞的凋亡,两者相比,Survivin反义寡核苷酸可更为有效地诱导胆囊癌细胞的凋亡。