摘要：基因启动子甲基化对转录因子结合的抑制作用是一种有效的基因转录调控机制.尽管基因启动子甲基化水平已经可以通过实验测量,但仍未有有效的方法利用这些数据定量分析甲基化对转录因子结合的影响.设计一个通用模型来描述基因启动子甲基化对转录因子结合的抑制作用.在特定细胞环境下,通过基因表达与转录因子在基因启动子上结合值之间的相关性分析,实现模型参数求取,并基于该模型进行甲基化对转录因子结合的抑制作用分析.神经细胞生物实验数据测试证明了该方法的有效性.

摘要：目的 介绍一种高灵敏度的DNA甲基化分析方法,即巢式甲基化特异性PCR法(nested-MSP,nMSP),探讨该方法最佳应用条件,并用该法分析新鲜癌组织、石蜡包埋组织及肿瘤患者血清中p16基因启动子的甲基化状态。方法 将基因组DNA变性成为单链,用亚硫酸氢盐修饰单链DNA,所有未甲基化的胞嘧啶被转变为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶则不变。设计针对甲基化和非甲基化等位基因的特异引物,进行巢式PCR扩增,最后经凝胶电泳检测目的片段。结果 在3种类型的标本中都检测出了p16基因启动子的甲基化,比普通的甲基化特异性PCR法具有更高的灵敏度。结论 巢式甲基化特异性PCR是一种灵敏度高、特异性强的甲基化检测方法,可广泛应用于不同类型标本基因启动子甲基化分析。

摘要：目的探讨白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因启动子部分(-440～-1)碱基序列的差异以及ERG11基因启动子突变与白念珠菌对氟康唑敏感性的关系。方法分别提取从同一亲本来源、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因启动子序列及其编码序列设计一对引物,对ERG11基因上游启动子部分碱基序列(-503～53)进行PCR扩增,经PCR产物直接测序比较白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因启动子序列(-440～-1)的差异以及对氟康唑敏感性不同的白念珠菌ERG11基因启动子序列的差异。结果白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11启动子序列未发现差异。氟康唑敏感株白念珠菌ERG11基因启动子的-365,-353,-328,-310,-308,-299,-295,-293,-292,290,-289位点为杂合状态,且在-284位点有一等位基因发生单碱基缺失(-284delT);而在白念珠菌氟康唑剂量依赖性敏感和耐药株上述杂合现象消失。结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因启动子-440～-1区碱基序列无差异;ERG11基因启动子突变可能与白念珠菌对氟康唑耐药有关。

摘要：目的克隆小鼠牙本质涎磷蛋白(dentinsialophosphoprotein ,DSPP)基因启动子片段。方法培养MDPC - 2 3细胞,从培养的细胞中提取基因组DNA ,利用设计的上下游引物,进行PCR反应。将扩增得到的DSPP基因启动子片段克隆到pMD18-T载体,酶切鉴定后,进一步进行DNA序列测定。结果酶切结果表明成功构建重组质粒,序列分析结果与国外报道一致。结论成功克隆获得小鼠DSPP基因的启动子片段。

摘要：磷脂酰胆碱甘油二酯胆碱磷酸转移酶(phosphatidylcholine diglyceride choline phosphotransferase,PDCT)是种子中甘油三酯(triglyceride,TAG)积累过程中不饱和脂肪酸合成所必须的酶,因此在油脂合成和积累中起着重要的作用。本研究以‘通蓖5号’蓖麻品种幼嫩叶片为实验材料,根据美国国立生物技术信息中心(National Center for Biotechnology Information,NCBI)上已知蓖麻PDCT基因(LOC8282344)及其基因组(NW-002994322)序列设计引物,通过聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增得到PDCT基因启动子片段。生物信息学分析PDCT蛋白的理化性质以及PDCT基因启动子序列。结果表明克隆到PDCT基因启动子序列3 741 bp,分析预测有多个转录起始位点及大量的顺式作用元件;PDCT基因共编码285个氨基酸,存在跨膜结构,为非分泌蛋白;对蛋白质编码的氨基酸进行同源性比对,并用MEGA 7.0构建了进化树,发现蓖麻和麻疯树,巴西橡胶树,木薯聚类到一起,这一分类与生物学分类一致,均为大戟科植物。对蓖麻PDCT基因及其启动子和蓖麻油脂合成代谢途径的进一步研究提供参考。

摘要：利用PCR-SSCP技术对4个家兔群体IL-10基因启动子序列进行遗传多样性研究,并探讨其与部分血清免疫指标的相关性。根据克隆的IL-10基因启动子序列设计2对特异性引物,采用PCR-SSCP技术对新西兰白兔(NZW)、福建黄兔(F-Y)、新西兰白兔(♂)×福建黄兔(♀)(简称新黄兔,N-F)、福建黄兔(♂)×新西兰白兔(♀)(简称黄新兔,F-N)这4个家兔群体IL-10基因的启动子序列进行多态性检测。结果表明:在IL-10基因启动子序列上检测到3对等位基因,5种基因型,存在3个SNP位点;4个家兔群体在IL-10基因启动子序列内存在遗传多样性,不同家兔群体在遗传基础上存在一定差异。4个家兔群体除了福建黄兔外,其他均处于哈代温伯平衡。经研究发现,福建黄兔作为父本的杂交后代更能够遗传优势性状。

摘要：目的　应用表达谱基因芯片技术 ,研究乙型肝炎病毒 (HBV)表面抗原基因启动子DNA结合蛋白 1(SBP1)反式调节基因 ,阐明SBP1蛋白可能的分子生物学功能。方法　设计并合成SBP1基因序列特异性的引物 ,应用聚合酶链反应 (PCR)技术扩增SBP1基因片段 ,以常规的分子生物学技术将获得的SBP1编码基因片段克隆到TA载体中进行核苷酸序列测定 ,构建真核表达载体pcDNA3 .1(-) SBP1。以脂质体转染肝母细胞瘤细胞系HepG2 ,提取mRNA ,逆转录为cDNA ,与转染空表达载体pcDNA3 .1(-)的HepG2细胞进行cDNA芯片分析。结果　构建的表达载体经过限制性内切酶分析和DNA序列测定 ,证实准确无误。提取高质量的mRNA ,逆转录为cDNA ,进行cDNA芯片分析。在 115 2个基因容量的表达谱芯片的筛选中 ,发现有 12个基因表达水平显著上调 ,6个基因表达水平显著下调。结论　应用基因表达谱芯片成功筛选了SBP1转染细胞后差异表达基因 ,为进一步阐明SBP1蛋白可能的生物学功能提供依据。

摘要：目的　建立MMP 3基因启动子 5A/6A多态性的快速基因型分析方法 ,并且探讨此多态性对湖北武汉地区汉族人群急性冠脉综合征危险性的可能影响。方法　通过设计错配引物以及多聚酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)分析方法 ,同时结合单链构象长度多态性 (SSCP)分析 ,检测了湖北地区10 3例汉族急性冠脉综合征患者及 10 0例健康成人的MMP 3基因 16 12 (5A/6A)的基因型。结果　急性冠脉综合征组与健康对照组MMP 3基因的 5A/6A +5A/5A基因型频率分别为 4 1 7%、 2 4 % ,5A等位基因频率分别为 2 1 8%、 13% ,两两比较均有显著性差异 (P <0 0 5 )。 5A/6A +5A/5A基因型的OR值为 2 2 6 9(95 %CI :1 2 4 1～ 4 14 9,P =0 0 0 7)。结论　MMP 3基因 5A/6A多态性与急性冠脉综合征危险性有关 。

摘要：根据已知的甘薯块根贮藏蛋白基因序列, 设计和合成了两对PCR引物。用PCR方法,从南薯88基因组中分别扩增出两种DNA片段: 一种含有贮藏蛋白基因启动子和核糖体结合序列(SP2);第二种不仅含有第一种DNA片段的全部序列,而且还有贮藏蛋白的信号肽编码序列(SP1)。核苷酸序列分析表明,这两种DNA片段的启动子和核糖体结合区虽然具有很高的同源性(82% ), 但它们并不相同。在SP1和SP2 的基因启动子区都存在几种典型的保守序列, 如受糖诱导调控的蔗糖盒(Suc-box),CAAT盒和TATA盒。用这两种DNA片段分别构建了可调控的甘薯高效表达载体。

摘要：目的研究原发性高血压患者血管紧张素原(AGT)基因A-6G(c.-44G>A,rs5051)及醛固酮合成酶(CYP11B2)基因T-344C(g.4660T>C,rs1799998)多态性对钙离子拮抗剂(CCB)非洛地平降压疗效的影响。方法采用前瞻性的设计,选择清洗期结束后血压符合要求的高血压患者接受5 mg/天非洛地平治疗。患者在治疗2、4、8周后进行随访。采用PCR结合直接测序或限制性内切酶(RFLP)的方法检测AGT基因启动子区A-6G多态性和CYP11B2基因T-344C多态性。结果治疗前,不同AGTA-6G基因型之间或者不同CYP11B2 T-344C基因型之间收缩压(SBP)和舒张压(DBP)的差异无统计学意义(P>0.05),治疗后各组患者的血压下降明显(所有P0.05)。AGTA-6G基因型对剂量方案调整没有明显的影响,分别有31.8%、35.7%和33.3%携带AA、AG和GG基因型的患者在第4周末需增加剂量(P=0.9329)。不同CYP11B2 T-344C基因型之间第8周的SBP和DBP以及8周后SBP和DBP降幅的差异无统计学意义(P>0.05)。GYP11B2基因型对剂量方案调整没有明显的影响,分别有26.6%、31.2%和35.62%携带CC、TC和TT基因型的患者在第4周末需增加剂量(P=0.6891)。结论不同AGT A-6G和CYP11B2 T-344C基因型对非洛地平的降压疗效没有明显影响。