摘要：目的 对2个携带单一杂合致病突变的苯丙酮尿症(PKU)家系进行全外显子组测序,探讨PAH基因突变情况,并进行产前诊断。方法 2023年3月郑州大学第一附属医院行基因检测与产前诊断的2个PKU家系。家系1先证者,男,7岁,出生后发育迟缓,新生儿期严重黄疸,脑部CT检查示脑白质脱髓鞘,血清苯丙氨酸水平增高,外院基因检测发现PAH基因c.1068C>A(p.Y356X)单杂合突变。家系2先证者,女,8岁,出生后新生儿筛查为PKU,外院基因检测发现PAH基因c.611A>G(p.Y204C)单杂合突变。采集2个家系先证者及其父母外周静脉血,母亲再次妊娠后于18周行羊膜腔穿刺术抽取羊水,提取DNA行全外显子组测序。在PubMed数据库检索相关文献,将新发现的致病突变位点区域纳入目标区域,采用叠瓦式多层探针设计方案进行探针设计和捕获测序。选择人类基因组参考序列GRCh37,对全外显子组测序结果注释分析,筛选得到候选致病突变位点。利用dbSNP数据库检索候选位点突变的数据库收录和致病性,通过基因组整合数据库gnomAD查询该突变的人群频率。依据美国医学遗传学与基因组学学会遗传突变分类标准与指南,对突变进行致病性分级和判定。采用PCR扩增和Sanger测序方法验证先证者父母候选突变位点携带情况,并对胎儿进行产前诊断。结果 (1)家系1先证者为PAH基因c.1068C>A(p.Y356X)和c.1065+241C>A复合杂合突变,家系2先证者为PAH基因c.611A>G(p.Y204C)和c.1065+241C>A复合杂合突变。(2)PAH基因c.611A>G(p.Y204C)和c.1068C>A(p.Y356X)均是PKU的致病热点突变。PAH基因c.1065+241C>A位点在dbSNP数据库中无记录,不属于多态性位点,人群发生频率极低,gnomAD数据库未查询到该突变在人群中的发生频率。根据美国医学遗传学与基因组学学会遗传突变分类标准与指南,PAH基因c.1065+241C>A判定为致病性突变(Pathogenic, PM3_Very Strong, PP4_Moderate, PM2_Supporting)。(3)2个家系先证者Sanger验证结果与全外显子组测序结果一致,其父母均为相关致病突变基因的携带者;家系1胎儿为PAH基因c.1065+241C>A杂合突变携带者,家系2胎儿为PAH基因c.611A>G(p.Y204C)杂合突变携带者。结论 针对目标区域进行多层探针设计,根据文献及时更新全外显子组测序的目的区域,有助于全外显子组测序检出PAH基因深度内含子区致病突变。

摘要：目的建立一种可用于检测西尼罗病毒特异性基因片段的逆转录-酶促重组等温扩增(RT-ERA)方法。方法以西尼罗病毒NS5基因的高度保守序列作为靶序列,根据ERA反应原理设计、合成引物及荧光探针,建立荧光RT-ERA反应体系。分别以不同拷贝数(10^(4)、10^(3)、10^(2)、10、1拷贝/μl)的含120 bp靶基因片段的重组质粒及不同浓度(10、1、10^(-1)、10^(-2)、10^(-3)ng/μl)西尼罗病毒RNA为模板进行荧光RT-ERA法扩增,评价该方法的敏感度;分别以森林脑炎病毒、基孔肯雅病毒、Ⅰ型登革病毒、西尼罗病毒、乙型脑炎病毒、黄热病毒和甲型流感病毒H2N1的RNA为模板进行荧光RT-ERA法检测,评价该方法的特异性。结果建立的荧光RT-ERA法可在39℃、20 min内特异性扩增西尼罗病毒RNA。敏感度检测结果显示,以重组质粒为模板,荧光RT-ERA法最低可检出的质粒拷贝数为1拷贝/μl;以RNA为模板,荧光RT-ERA法最低可检测浓度为10^(-3)ng/μl。特异性检测结果显示,以森林脑炎病毒、基孔肯雅病毒、登革病毒I型、乙型脑炎病毒、黄热病毒和甲型流感病毒H2N1的RNA为模板,荧光RT-ERA法检测结果均为阴性,仅西尼罗病毒RNA扩增阳性。结论成功建立了一种可用于检测西尼罗病毒RNA的荧光RT-ERA法,该方法操作简便,敏感度和特异性均较好。

摘要：筛查乳腺癌易感基因2(BRCA2)基因突变对于乳腺癌患病风险评估、发病检测、早期诊断及基因治疗均具有重要临床意义。现有乳腺癌基因传感检测方法大多需要复杂的处理过程,成本较高且对单碱基突变识别能力较弱。为简化基因传感器制备过程,提高其应用可能性,文章通过DNA分子发夹结构设计,一步实现了BRCA2的检测。其中分子发夹茎部含BRCA2互补序列,茎与环连接处标记四甲基罗丹明荧光基团(TAMRA),环部5个G碱基通过光诱导电子转移猝灭部分荧光信号,降低背景荧光信号;待测BRCA2序列与发夹茎部序列竞争结合,发夹结构被打开,荧光信号上升,测量上升的荧光信号强度即可实现一步法定量检测靶基因。优化实验结果表明,分子发夹浓度不同时,传感器检测范围不同。当分子发夹浓度为150 nmol·L^(-1)时,对BRCA2的线性检测区间为1~50 nmol·L^(-1);浓度为300和600 nmol·L^(-1)时,线性检测区间分别为1~100和1~200 nmol·L^(-1)。三种浓度传感器检出限分别为0.54、0.72和1.81 nmol·L^(-1)。此外,传感器对BRCA2的特异性检测较为突出,尤其对单碱基突变的识别能力较强。该方法制备与检测过程简单且特异性突出,不仅可用于乳腺癌高危人群的早期筛查,还可拓展应用于其他种类的基因检测,为基因传感器的推广应用提供一种制备简单、操作便捷的新方法。

摘要：基于荧光偏振理论,设计了一套HBV多聚酶基因检测光学系统。该光学系统包括荧光激发系统和荧光检测系统。使用荧光激发系统对激发样品产生荧光,由荧光检测系统对荧光进行水平和垂直两个方向的荧光强度检测,从而获得荧光的偏振度。通过更换该套系统中的滤光片可实现对400～550nm范围内的样品荧光偏振度的检测。运用该光学系统进行了临床实验,结果表明,系统测试方法具有简单易行、灵敏度高、精确可靠、抗干扰能力强的特点。

摘要：分析卵巢癌患者对遗传咨询和基因检测的了解和接受意愿。方法 采用便利抽样法,抽取上海市某三甲医院妇科卵巢癌患者共251例,使用自行设计的科普信息册,患者阅读完以后填写问卷表,运用SPSS28.0版本对数据进行统计分析。结果 患者对遗传咨询和基因检测缺乏了解,但是在了解了相关知识后愿意接受和推荐家人参与其中。本研究结果71.7%的患者在得知基因检测对自己治疗有利的情况下愿意进行基因检测。由于部分患者认为检测无法改变自己已发病的事实,检测结果只会给自己和子女带来困扰,害怕面对检测结果,也不了解BRCA1/2基因突变也是增加其他肿瘤(乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、皮肤癌以及前列腺癌)的风险因素等原因,而拒绝进行检测。其次,在经济方面,61%的患者愿意接受价格比较便宜的基因检测初筛,仅仅23.9%患者对基因检测的价格高低不在意,这与收入、肿瘤史或家族史相关,差异有统计学意义。虽然知道基因检测结果是绝对保密,但还有36.6%患者担心受歧视,其中有家族史、年龄低于35岁、同时有其他肿瘤史的患者担心更甚,差异有统计学意义。结论 绝大多数患者对基因检测和遗传咨询不了解或部分了解,但在学习了相关知识后愿意接受和推荐家人参与到其中。对于BRAC1/2基因检测及遗传性卵巢癌相关知识的缺乏、BRAC1/2基因突变能引起其他遗传性疾病的不了解、检测费用过高以及担心受歧视是患者拒绝接受遗传咨询和基因检测的主要原因。建议医护人员加强相关知识科普力度,健全隐私保护相关法律和规范,为患者制定个性化检测方案,以进一步改善患者的健康水平。

摘要：该文以特殊设计的DNA序列为捕获探针,以G-四链体-血红素复合物作为信号分子,利用链式反应实现目标DNA的灵敏检测。在目标DNA存在时,捕获探针与目标DNA相互识别,同时目标DNA能与辅助探针发生连续的链式反应,从而在电极表面引入大量G-四链体结构。血红素存在下,G-四链体可与血红素结合形成具有很强电化学信号的G-四链体-血红素复合物。用差分脉冲伏安法(DPV)扫描得到的电化学信号与体系中的目标DNA浓度存在对应关系,从而实现对目标DNA的检测。在各组分浓度最适的情况下,电流响应值与目标DNA浓度在0.01~10 pmol/L内具有良好的线性关系,检出限可达8 fmol/L。该传感器灵敏度高、特异性好,具有良好的应用前景。

摘要：目的 研制一项检测严重急性呼吸综合征的即时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,用于患者全血的检查。方法 内引物和短柄圆环探针(分子信标,molecular beacon)的设计,针对基因库SARS相关冠状病毒的高度保守区(RNA聚合酶基因区),在15 301和15 480之间(G130027616)。结果 即时RT-PCR荧光测量结果能显示SARS相关冠状病毒特有序列的扩增程度。常规PCR的145bp产物经测序证实与探针杂交的靶序列一致。结论 这一方法的建立对SARS临床诊断和病原研究提供一种快捷和准确的手段。

摘要：目的建立一种可用于曼氏血吸虫特异性基因片段检测的重组酶介导的核酸等温扩增方法(Recombinase-aided amplification,RAA)。方法以曼氏血吸虫121 bp高重复基因片段作为靶序列,根据RAA反应原理设计、合成引物及荧光探针,建立并优化荧光RAA法反应体系。分别以不同拷贝数的含121 bp基因片段的重组质粒及不同浓度曼氏血吸虫基因组DNA为模板进行荧光RAA法扩增,评价该方法的敏感性;分别以日本和埃及血吸虫虫卵、十二指肠钩虫虫卵、华支睾吸虫囊蚴基因组DNA为模板进行荧光RAA法检测,评价其特异性。结果建立的荧光RAA法可在39℃、20 min内特异性扩增曼氏血吸虫基因组DNA。以重组质粒为模板,荧光RAA法最低可检出的质粒拷贝数为10拷贝/μL;以基因组DNA为模板,荧光RAA法最低可检测浓度为0.1 fg/μL。以日本血吸虫虫卵、埃及血吸虫虫卵、十二指肠钩虫虫卵、华支睾吸虫囊蚴基因组DNA为模板进行荧光RAA法检测,结果均为阴性。结论成功建立了一种可用于曼氏血吸虫DN A检测的荧光RAA法,该方法反应快捷、操作简便,敏感性和特异性均较好。

摘要：最近,有婚配公司在婚恋交友网站上打出了＂基因决定我爱你!＂这样的广告语,并声称提供基因检测服务。基因检测,真能让你找到意中人吗？

摘要：目的　建立检测相关细胞因子的方法。方法　设计 6对用于IFN -γ ,IL - 2 ,IL - 1 0 ,IL - 1 3和 β-actin基因扩增的引物 ,建立可用于相关细胞因子检测的技术。结果　用RT -PCR检测 30例脑囊虫病人外周血单个核细胞发现 2 7例有细胞因子表达 ,3例未检到细胞因子 ,在 2 7例有细胞因子表达的患者中IFN -γ ,IL - 2 ,IL - 1 0IL - 1 3的表达分别为 7例、6例、1 6例、1 7例和 1 4例 ,2 7例均IL - 1 0和 (或 )IL - 1 3表达 ,Th2型细胞因子表达水平明显升高。结论　RT