摘要：抗生素滥用导致的抗性基因(ARGs)泛滥问题引起人们的日益关注。目前关于抗性基因的研究主要集中在环境监测方面,但是关于抗生素对ARGs传播的影响研究还相对缺乏。质粒是ARGs传播的重要载体,因此以基于RP4质粒的大肠杆菌(***)接合转移体系为研究对象,探讨了盐酸四环素、甲氧苄啶、磺胺氯哒嗪、磺胺异唑在单一暴露条件下对RP4质粒接合转移的影响。根据单一暴露的结果设计混合抗生素的浓度比,探究抗生素联合暴露实验对质粒接合转移的影响。结果表明:在单一暴露条件下,只有盐酸四环素对含有四环素抗性的RP4质粒的接合转移频率有低促高抑的hormesis效应;在联合暴露条件下,对RP4质粒接合转移无促进作用的抗生素会抑制四环素的hormesis效应,这一定程度上降低了抗生素的环境风险。并且用受体理论解释了抗生素对质粒接合转移的hormesis效应产生机制,为目前尚无定论的hormesis受体理论机制提供了证据支持。

摘要：为实现对于基因转移过程的实时和原位观测,设计了1种实验方法。利用接种有供体菌和受体菌的微流控芯片作为实验载体,并通过引入基因改造的供体菌,实现实时原位观察基因水平转移的过程,并可对转移频率和转移结果加以分析。通过对基因转移图像处理进行计算,得到微流控芯片通道内的基因转移率为(9.87±1.56)%,流式细胞分析结果表明转移接合子的细胞数量占芯片上混合菌的细胞数比例为0.21%(子占芯片上)。

摘要：为建立用于基因水平转移研究,尤其是DNA经加工和消化后稳定性研究的针对转基因水稻潮霉素标记基因hpt(hygromycinphos photransferase)的定性和实时定量PCR体系,设计针对hpt的上游通用引物多个片段定性PCR扩增体系,以植物叶绿体基因rbcl为内对照,PCR扩增产物经测序验证。将定性PCR中最小片段(236bp)连接到质粒载体pUC18pMDT载体上,提取质粒经验证后做外标。应用TaqMan—MGB荧光探针和引物,建立定量的外标校正曲线法,并评价方法的精密度。建立的定性PCR体系能稳定扩增出236bp～910bp不同大小的5个hpt片段,并经测序验证。实时定量PCR的线性范围为105～10拷贝(R2=0.998),最低能检出10拷贝,重复性好。本研究已成功建立了用于转基因水稻标记基因hpt基因水平转移研究的定性和定量PCR系统。

摘要：菌株Arthrobacter sp. AG1能以4000mg/L的阿特拉津(AT)为唯一碳源、氮源和能源生长。通过设计特异引物从AG1中扩增出阿特拉津氯水解酶基因trzN的全序列,该基因与已报道的trzN基因序列相似性为99%。AG1菌株中含有两个大于100kb的质粒,Southern杂交结果显示trzN和atzB基因均位于其中较大的一个质粒pAG1上。将AG1菌株在LB液体培养基中转接三代后,发现34%的细菌细胞丢失了降解活性,但却未发现丢失质粒,PCR扩增结果表明突变子丢失了trzN基因,但atzB和atzC基因未丢失,说明降解活性的缺失是trzN基因片段从质粒上丢失的结果,表明trzN基因在环境中存在水平转移现象,暗示菌株AG1中的阿特拉津降解基因是基因的水平转移重组的结果。

摘要：细菌通过各种可移动遗传元件(质粒、转座子、整合子、噬菌体、插入序列共同区等),以基因水平转移的方式从其它细菌获得外源性耐药基因,整合在自身基因组上而产生获得性耐药。本文主要阐述各种可移动遗传元件介导获得性耐药的机制,理解可移动遗传元件在耐药性发展和传播上的作用,是设计和执行干预方法来减少细菌感染威胁的前提条件。本文还介绍了一种新发现的可移动遗传元件:基因转移因子,它与细菌耐药基因水平转移的关系值得研究。

摘要：为评价转基因林木环境释放可能引起的生态风险，以及转基因林木在生产应用中的可行性和可靠性，以实验室种植的转Bt-蜘蛛神经毒肽重组基因的小黑杨为材料，对转基因与非转基因植株根际（通常为几毫米至几厘米）土壤细菌、放线菌、真菌数量和基因水平转移情况进行检测，结果表明：转基因小黑杨种植一段时间后其根系附近的微生物数量略高于非转基因小黑杨。利用卡那霉素选择培养基分离根系周围细菌菌落发现转基因植株周围的土样细菌中，KanR抗性细菌菌落数占总细菌菌落的比例在11．58％～13．00％之间，而非转基因植株根际周围和空白土壤细菌菌落数则在5．73％～6．40％之间，表明转基因小黑杨根系对土壤细菌的抗生素抗性产生一定的影响。利用转基因植株的目的基因和抗性基因设计引物，以土壤中细菌基因组DNA为模板进行PCR扩增，转基因植株种植7个月后，根际土壤细菌菌落中含有抗性基因的菌落数量明显增加。虽然在种植1个月的转基因植株根际土壤土样细菌中未检出目的基因，但在种植7个月后的土样中检验到了很少的目的基因阳性细菌，阳性细菌菌落比例为2％～5％，检测结果表明可能有极少数Bt-蜘蛛神经毒肽重组基因发生了水平转移。