摘要：目的探讨肺癌中RET基因重排肿瘤的荧光原位杂交(FISH)信号特征。方法收集北京协和医院2019年12月至2022年4月存档的甲醛固定石蜡包埋的表皮生长因子受体(EGFR)野生型和间变性淋巴瘤激酶(ALK)免疫组织化学阴性的肺腺癌标本616例,经基于不平衡设计的逆转录数字PCR方法筛选出RET阳性的标本33例,以分离探针进行RET FISH检测,并通过二代测序验证FISH结果和确定RET基因重排类型。结果在33例逆转录数字PCR检出的RET阳性样本中,经二代测序检测均含有RET基因重排。其中包括27例KIF5B::RET、3例CCDC6::RET、2例ERC1::RET和1例CCDC186::RET重排。RET FISH检测结果为32例阳性、1例阴性。在FISH阳性标本中,25例(78.1%,25/32)样本为红绿信号分离,阳性细胞数为52%~100%;7例(21.9%,7/32)样本以孤立的3′信号为特征,阳性细胞数介于38%~88%之间。未见以单个5′信号聚集为特征的FISH阳性类型。最常见的伙伴基因是KIF5B(81.8%,27/33),且RET基因重排者女性居多(72.7%,24/33)。结论对于RET基因重排的肺癌来说,大多数样本的FISH类型表现为分离信号,而且具有重排信号的瘤细胞常是高占比的。

摘要：目的寻找一种敏感、特异的方法检测弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)bcl-2/IgH基因重排,并通过测定产物的序列,以了解所建方法的可靠性。方法运用专业引物设计软件设计bcl-2/IgH基因重排半巢式PCR引物,对52例经临床病理确诊的DLBCL石蜡包埋组织及10例慢性扁桃体炎患者的新鲜扁桃体组织通过半巢式递降温度梯度PCR(touch down PCR)扩增,检测bcl-2/IgH基因重排,并对其产物进行克隆和序列分析。结果通过一步法检测到bcl-2/IgH基因重排8例,其中DLBCL6例,新鲜扁桃体组织2例;进行第2次半巢式PCR时仅在DLBCL中发现5例阳性,新鲜扁桃体组织均阴性。将阳性产物在网上序列分析显示:一步法检测到的8例中有3例为假阳性,而半巢式PCR扩增出的5例均为bcl-2/IgH基因重排片段。3例假阳性的片段分别与人类第19号染色体BAC331191,LLNLR-245D11基因片段及1号染色体RP11-498P10基因片段同源。结论常用的检测bcl-2/IgH基因重排引物扩增结果存在一定假阳性,其机制可能是因为人类基因组中存在与常用引物同源性较高的序列。为研究设计的引物与传统的引物结合,进行半巢式PCR可以排除这种假阳性扩增,提高诊断的准确性。

摘要：目的应用多重PCR方法检测初诊成人急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的克隆性免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排，为实时定量RT—PCR（RQ—PCR）法监测ALL患者体内的微量残留病（MRD）奠定基础。方法参照BIOMED－2协作组制定的Ig和（或）TCR检测方法，设计96条不同的PCR引物，分成14个混合管，通过多重PCR，分别检测患者骨髓单个核细胞的IgH、IgK、TCRB、TCRG、TCRD克隆性基因重排。结果在22例成人B系ALL患者中，Ig克隆性重排检出率为96％，其中IgH为86％，IgK为14％。在18例成人T系ALL患者中，TCR克隆性重排检出率为100％，其中TCRB为83％，TCRG为78％，TCRD为39％。两个及两个以上克隆性标志物的检出率在B和T系ALL中分别为91％（22例中20例）和89％（18例中16例）。结论BIOMED－2协作组设计的14管多重PCR引物和方法，几乎可检测到淋巴细胞白血病患者体内所有占优势的克隆性T、B细胞增殖群体，方法简便、可靠、覆盖面广，适用于成人ALL患者基凶重排检测和MRD监测。

摘要：目的 应用实时定量PCR（RQ-PCR）方法 检测患者的免疫球蛋白重链（IgH）基因重排,探讨其在成人B系急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的微量残留病（MRD）动态监测中的意义.方法 15例B系ALL患者的初诊DNA标本经PCR扩增莺排的IgH基因,克隆产物经基因测序、序列比对后,根据每例患者的克隆特异性序列信息,利用软件设计15条等位基因特异性寡核苷酸（ASO）引物,作为RQ-PCR检测的上游引物,合成通用的JH下游引物和TaqMan探针,监测患者随访标本MRD靶分子.7例Ph＋患者同时用RQ-PCR检测bcr-abl融合基因转录本.结果 使用ASO引物RQ-PCR法扩增15例患者IgH重排靶基因的敏感性为10-3～10-5,荧光背景信号未显示或较低.动态监测表明：高危组患者诱导完全缓解（CR）后体内MRD水平明显高于标危组患者,诱导CR后MRD〉10-3的患者复发率（71.4%）高于MRD≤10-3的患者（12.5%）,MRD〉10-3的患者生存时间短.另外,Ph＋患者bcr-abl融合基因转录本的对数级变化趋势与IgH重排靶基因水平的动态变化一致.结论 使用ASO引物RQ-PCR方法 检测IgH基因重排,具有敏感性高、特异性强、结果 可靠等优点,可对肿瘤克隆进行准确定量.B系ALL患者体内IgH基因重排水平与临床治疗反应和疾病预后密切相关,可用于患者病情的随访监测.

摘要：外套细胞淋巴瘤（Mantle cen lynlphonla，MCL）的诊断目前主要依靠其形态特征，但易与其他淋巴瘤相混淆。因此，寻找一种敏感而特异的分子标志将有助于对该病的明确诊断。染色体t（11；14）主要见于MCL，其分子对应物是bcl- 1基因重排，尽管bcl-1的断裂点分散于11ql3区内，但其中一半以的断裂点集中在一个Ikh大小、被称为主要易位簇（majortranslocation Cluster，MrC）的区域内~[1]。在发生在相对更小的区域内，正是断裂点相对集中的特点，使得咒R技术适用于这种易位的检测。我们研究的目的在于设计一种特异和敏感的半巢式PCR方法来检测MCL中的bcl一l基因重排，并检查该方法在检测石蜡标本时与新组织结果的一致性。

摘要：目的:建立检测人T细胞TCRBD基因(Diversity Gene)经历重排的连接介导PCR方法(Ligation Mediate dPCR,LMPCR),为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法:在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列(RSS)前,BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物;设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头(BWLinker),提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病(TALL)外周血单个核细胞(PBMC)样本总DNA,和BWlinker连接,进行巢式PCR,PCR产物琼脂糖电泳分析,阳性产物做胶回收,并克隆测序鉴定。结果:在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端,在2例TALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端,2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端,阳性的LMPCR产物通过测序鉴定,和基因组中序列完全相符合。结论:1例胸腺组织和2例TALL的PBMC中检测到RSS断裂末端,提示TCRBD基因正经历重排,测序结果表明建立的监测TCR重排的LMPCR方法可靠,可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。

摘要：对４８例急性白血病患者白血病细胞进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，发现９例患者有ＨＲＸ基因重排。用自行设计的引物对９例阳性患者进行逆转录－多聚酶链反应检测，发现６例患者有融合基因的表达：３例ＨＲＸ／ＡＦ－４；２例ＨＲＸ／ＡＦ－９；１例ＨＲＸ／ＥＮＬ。敏感度达１／１０３～１／１０５。

摘要：目的:探讨弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)bcl-2/IgH基因重排与分子亚型生发中心样(GCB)的相关性.方法:采用自行设计的半巢式PCR对60例DLBCL的bcl-2/IgH基因重排进行了检测,并对阳性产物进行克隆、测序.同时采用免疫组化SP法在组织微阵列上同步观测CD20,CD10,Bcl-6,黑色素瘤相关抗原(突变体)1(MUM1)的表达,进行GCB和非生发中心样(non-GCB)分子分类.结果:经常规法扩增bcl-2/IgH,有6/60例DLBCLbcl-2/IgH阳性;在6例阳性样本中,采用本组设计的半巢式PCR扩增,经克隆及测序证实5例bcl-2/IgH基因重排阳性,1例为人类第19号染色体BAC331191基因的片段.60例DLBCLCD20表达全部阳性;CD10,Bcl-6,MUM1的阳性表达率分别为43.3%,46.7%,61.7%;GCB32(53.3%)例,non-GCB28(46.7%)例.bcl-2/IgH基因重排阳性的病例均属GCB分子亚型,且与CD10表达有显著性相关(P=0.012),而与Bcl-6及MUM1表达无相关性.结论:使用本组设计的半巢式PCR可提高bcl-2/IgH基因重排检测的准确性.bcl-2/IgH基因重排的检测可协助确定部分GCB分子亚型的DLBCL.

摘要：目的 研究毛囊黏蛋白沉积症与蕈样肉芽肿的关系。方法 从8例特发性毛囊黏蛋白沉积症、3例毛囊黏蛋白沉积症合并蕈样肉芽肿和1例蕈样肉芽肿患者获得病变组织，将其埋于石蜡中。设计T淋巴细胞受体（TCR）可变区引物Vγ1-8／A，Vγ10，Vγ11及β，利用PCR方法分析了12例患者组织中T淋巴细胞受体基因重排的情况。结果 8例特发性毛囊黏蛋白沉积症中1例，3例毛囊黏蛋白沉积症合并蕈样肉芽肿和1例蕈样肉芽肿患者皮损TCR Vγ1-8／A呈单克隆性。结论 对于年龄较大、病程较长的毛囊黏蛋白沉积症患者，应行TCRγ基因重排检查，以排除淋巴瘤。

摘要：目的建立免疫球蛋白重链(IgH)的实时定量(RQ)-PCR 检测体系,以用于儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)微小残留病(MRD)检测。方法采用定性 PCR 筛选109例儿童 B 细胞 ALL(B-ALL)IgH 基因单克隆重排,根据连接区序列设计等位基因特异性引物,应用 RQ-PCR 技术,采用胚系 Taqman 探针与引物,在41例患儿中建立 RQ-PCR 定量检测方法,并分析其敏感度、特异性等。结果109例儿童 B-ALL 初诊标本中 IgH 单克隆重排有48例,经测序分析发现,V、D、J 片段频率最高的分别为 V3家族、D3家族和 J4家族。RQ-PCR 方法扩增48例 IgH 单克隆重排的初诊 DNA,其中41例可重复敏感度和最大敏感度均≤10^(-4),非特异性扩增的循环阈值(Ct 值)均>40,与特异性扩增 Ct值的差距均>3。标准曲线斜率均值为-3.31±0.19,截距均值为37.66±1.23,相关系数均为0.97以上。结论以 IgH 基因重排为靶分子,采用 RQ-PCR 方法和胚系探针策略检测儿童 B-ALL,敏感性≤10^(-4),并具有较高的特异性,适于 MRD 的定量研究。