摘要：目的探讨多聚酶链反应(PCR)检测免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在眼附属器淋巴增生性病变良恶性鉴别中的应用价值。设计实验性研究。研究对象32例眼附属器淋巴增生性病变存档蜡块标本。方法应用PCR检测眼附属器淋巴增生性病变的IgH基因重排,结合常规HE染色和免疫组织化学染色结果进行分析。主要指标组织病理形态,免疫表型特征及基因重排形式。结果17例淋巴瘤中12例IgH基因呈单克隆性重排,阳性率为70.6%;10例反应性淋巴细胞增生中1例呈单克隆性重排,阳性率为10%。两者差异有统计学意义(P=0.004)。5例不典型淋巴细胞增生中,3例基因呈单克隆性重排,支持恶性淋巴瘤的诊断;2例呈多克隆性重排,支持良性反应性增生的诊断。结论依靠常规HE染色和免疫组织化学染色有时难以明确眼附属器淋巴增生性病变的良恶性,此时应用PCR检测病变的IgH基因重排,有助于鉴别其良恶性。(眼科,2008,17:33-36)

摘要：淋巴造血系统肿瘤诊断一直是困扰临床的一大难题,依靠聚合酶链反应(PCR)技术检测免疫球蛋白和T细胞受体基因重排具有快速、灵敏度高等优点,成为辅助诊断的重要手段.本文从免疫球蛋白和T细胞受体基因重排的原理、检测方法、引物设计、结果等方面阐述了这种方法在淋巴造血系统肿瘤诊断和预后中的应用.

摘要：目的 :构建荧光定量PCR检测TCRVγI Jγ基因标准品重组质粒和标准曲线 ,为建立实时荧光定量PCR准确检测淋巴系肿瘤微小残留病奠定基础。方法 :对TCRVγI Jγ基因进行序列分析 ,利用引物设计软件设计出一对引物和一条荧光探针。提取急性淋巴细胞白血病患者的DNA ,经PCR扩增 ,产物纯化后与pMD 18 TVector连接 ,转化到大肠杆菌DH5α ,筛选得到标准品的质粒。结果 :重组质粒进行荧光定量PCR扩增出现强烈的荧光值增长 ,表明TCRVγI Jγ基因已成功克隆。以 10 0 ～ 10 -5不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增 ,Ct值分别为 2 1 0 8、2 4 3 4、2 7 5 3、3 0 5 8和 3 3 2 5。统计学分析显示Ct值与标准品浓度的对数存在良好线性关系 ,回归系数为 0 998。结论 :所构建的TCRVγI Jγ基因荧光定量PCR检测标准品特异性和线性关系好 ,准确可靠 。

摘要：目的探讨BIOMED-2标准化的IG/TCR基因重排克隆性分析系统在疑难淋巴组织增生性病变中的应用。方法对67例难以从形态上区分良、恶性的淋巴组织增生性病变,采用BIOMED-2系统引物,提取标本中的DNA,进行抗原受体分子PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳,进行IG/TCR基因重排的克隆性分析。结果67例淋巴组织增生性病变中,33例进行了IG和TCR克隆性分析,19例进行了IG和15例进行了TCR克隆性分析。共有25例检测到克隆性重排,从而确诊为淋巴瘤,其中IG克隆性重排有15例为B细胞性淋巴瘤;TCR克隆性重排有8例为T细胞性淋巴瘤;同时存在IG和TCR克隆性重排2例,为复合性T细胞和B细胞性淋巴瘤;其余42例呈多克隆性,为淋巴组织反应性增生。结论BIOMED-2系统是一种全面优化设计的IG/TCR基因重排克隆性分析系统,是疑难淋巴组织增生性病变中鉴别淋巴瘤与反应性增生的客观性手段。

摘要：目的:探讨胸腔原发性渗出性淋巴瘤临床病理特点及病理鉴别诊断、免疫组化表型、基因重排,旨在加深临床和病理对此疾病的认识。方法:报道1例原发性渗出性淋巴瘤,对其进行临床病理学分析及文献复习。结果:1例原发性渗出性淋巴瘤患者临床表现为反复发作的胸水以及右侧胸膜结节样增厚。胸水细胞学和胸膜穿刺组织学特征均显示肿瘤细胞从大免疫母细胞或浆母细胞到明显间变的细胞形态变化。免疫组化:CD45、CD38、CD138、EMA、WT-1、Vimentin均为阳性;CR、TTF-1、CD3、CD20、EBV均为阴性。基因重排结果显示:IGH、IGK、IGL在BIOMED-2 PCR受体基因重排引物设计系统中相应位置发生克隆性重排。结论:原发性渗出性淋巴瘤是一种罕见的非霍奇金淋巴瘤类型,它不同寻常的生长方式为临床和病理诊断带来了困难。该肿瘤需与弥漫性大B细胞淋巴瘤(免疫母细胞变异型)和间变性大细胞淋巴瘤等鉴别。即使联合化疗其预后仍然十分差,选择合理和特异的治疗靶向药物是治疗成功的基础。

摘要：对４８例急性白血病患者白血病细胞进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹分析，发现９例患者有ＨＲＸ基因重排。用自行设计的引物对９例阳性患者进行逆转录－多聚酶链反应检测，发现６例患者有融合基因的表达：３例ＨＲＸ／ＡＦ－４；２例ＨＲＸ／ＡＦ－９；１例ＨＲＸ／ＥＮＬ。敏感度达１／１０３～１／１０５。

摘要：目的建立较简便、敏感的Ｂ细胞恶性肿瘤微小残留病（ＭＲＤ）检测方法。方法根据免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因的保守序列设计引物，应用半巢式聚合酶链反应（ＰＣＲ）基因扩增技术检测克隆性ＩｇＨ基因重排。结果该方法敏感性达１０－３。６２例Ｂ细胞恶性肿瘤患者，５１例检测到克隆性ＩｇＨ基因重排，阳性率为８２％，假阴性率为１８％（１１／６２）。同时检测３５例非Ｂ细胞恶性肿瘤患者和２０例正常人均阴性，无假阳性。检测１４例Ｂ细胞非何杰金淋巴瘤患者形态学检查正常的骨髓标本，ＭＲＤ检出率为７１％（１０／１４）。随访５例处于完全缓解期的Ｂ细胞型急性淋巴细胞白血病患者，６个月内ＭＲＤ均阳性，１２个月后３例转阴性，２例持续阳性，１８个月后持续阳性的２例患者均复发，而转阴性的３例仍处于完全缓解状态。结论半巢式ＰＣＲ检测克隆性ＩｇＨ基因重排，方法简便，敏感性和特异性高。

摘要：目的:鉴定T细胞-急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)异常基因重排。方法:利用基于T细胞受体(TCR)基因位点的精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(FT-aCGH)技术分析1例T-ALL样本与对照组基因组DNA的差异,了解7号和14号染色体TCRβ、TCRγ和TCRαδ位点上可能的断裂点位置,根据所提供的初步结果,根据断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法分析与之发生重排的基因序列。结果:FT-aCGH结果显示所检测T-ALL样本中,各TCR基因位点都存在断裂点,经过LM-PCR和序列分析,以及利用PCR和特异引物检测基因组DNA结果确定了T-ALL克隆为Vα8-Jα22基因重排,并发现了7号染色体在TCRβ基因位点,Vβ20-1基因片段与14号染色体位于免疫球蛋白重链区基因位点的IgHVII-26-2基因片段发生异常重排,形成t(7;14)(q34;q32)染色体易位。结论:利用FT-aCGH和LM-PCR技术在1例T-ALL中发现了一种新的Vβ20-1-IgHVII-26-2异常重排,这种异常重排有可能可以作为该肿瘤克隆的生物标记物。

摘要：应用ABC免疫组化及半巢式PCR分别对大肠癌bc1-2基因表达及重排进行了检测。结果表明 ,bc1-2基因异常表达与重排在大肠癌早期即已出现明显的异常改变。随着病程演变 ,这种异常现象表现增多趋势即愈晚期重排发生率显著增加。而bc1-2基因的蛋白在有淋巴结转移组亦明显多于无淋巴结转移组 ,说明bc1-2基因参与大肠癌发生发展过程的调节 ,并在大肠癌细胞的增殖、进展及转移中起重要作用。研究大肠癌bc1-2基因情况可用来预测治疗效果和预后 ,亦可为大肠癌治疗设计新的抗癌药物提供了理论依据。两法联合应用相比较 。

摘要：基因工程抗体是继多克隆抗体、单克隆抗体之后出现的第三代抗体。随着20世纪80年代初分子生物学和分子免疫学的飞速发展，人们可以运用基因工程的各种手段在基因水平上按照事先的设计改造抗体基因结构，并使其在原核、真核的各种不同表达系统中表达，得到人们所需要的各种类型抗体，包括各种类型的小分子抗体，以人源化为目的进行改造的人-鼠嵌合抗体，重组全分子抗体等。人们还可以对这些抗体进行进一步加工使其符合人们的要求。小分子抗体因其分子量小，穿透性强，抗原性低，可在原核系统表达及易于基因工程操作等优点而受到人们的重视，成为基因工程抗体家族的主要成员和研究热点。小分子抗体的设计制备具备经历了化学偶联法、杂交瘤法及基因工程手段制造抗体主要是小分子抗体的另一革命性进展，对特异性抗体片段的筛选、扩增及抗体人源化方面较其它方法具有更大优势。本文主要就小分子抗体在肿瘤诊治方面的应用做一概述。