摘要：目的筛选出高效抑制兔外周血单核巨噬细胞中CD147表达的短链RNA(shRNA)慢病毒载体,观察CD147基因沉默后对基质金属蛋白酶(MMP)的影响。方法兔源CD147 mRNA序列,设计并构建shRNA慢病毒载体,实验分为空白组,阴性组,加CD147 shRNA慢病毒干扰依次为A组、B组、C组、D组,将其分别转染兔外周血单核巨噬细胞,72 h后观察转染效果,用RT-PCR测CD147 mRNA表达,ELISA法测CD147 MMP-2及MMP-9蛋白表达。结果 A、B、C、D组CD147 mRNA及CD147、MMP-2和MMP-9蛋白较空白组显著减少(P<0.01),A组CD147 mRNA和蛋白降低最显著,较空白组分别减少57.7%和50.9%(P<0.01),MMP-2、MMP-9蛋白表达分别减少95.9%和45.4%。结论成功构建并筛选出能高效、且特异阻断CD147基因表达的shRNA慢病毒载体。CD147基因沉默后,MMP-2和MMP-9表达明显减少,可能成为防治动脉粥样硬化新的治疗靶点。

摘要：背景:基质金属蛋白酶是一类可促进肿瘤生长和转移的蛋白分解酶家族,其活性可被组织金属蛋白酶抑制因子所抑制。其中组织金属蛋白酶抑制因子3的抑制作用更为重要。目的:旨在从人胎盘中完全分离纯化天然组织金属蛋白酶抑制因子3,并建立组织金属蛋白酶抑制因子3酶联免疫测定方法。设计:单一样本观察。单位:沈阳医学院中心实验室。材料:人胎盘来自沈阳医学院附属奉天医院妇产科(家属知情同意);基质金属蛋白酶1来自富士药品研究所。方法:实验于2001-03/2002-05在沈阳医学院中心实验室完成。①利用4mol/L尿素Tris缓冲液(pH8.0),制备胎盘匀浆液。②匀浆液经CM52阳离子交换树脂层析和SephacrylS-200凝胶过滤二步柱层析。③SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测相对分子量及纯度。④Westernblotting鉴定纯化蛋白的性质。⑤免疫荧光法测定组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制率。主要观察指标:①聚丙烯酰胺电泳法所示蛋白带相对分子质量。②Westernblot的显色结果。③组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制率。④纯化后组织金属蛋白酶抑制因子3的回收率。结果:①人胎盘分离纯化的组织金属蛋白酶抑制因子3分为非糖化和糖化两种,相对分子质量分别为24000和27000两种。②非糖化和糖化的组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制活性分别为1.1×1010mol/L和1.2×1010mol/L。胎盘来源的组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1的抑制活性明显高于重组的组织金属蛋白酶抑制因子3。③二步层析后组织金属蛋白酶抑制因子3的回收率为23.4%。结论:人胎盘胞外基质来源的组织金属蛋白酶抑制因子3是由非糖基化蛋白和糖基化蛋白组成;两种纯化的组织金属蛋白酶抑制因子3对基质金属蛋白酶1具有明显的抑制活性,且显著高于重组金属蛋白酶抑制因子3。

摘要：背景:全世界有数以百万计的人饮用砷污染的地下水,而目前尚未有缓解慢性砷中毒症状的有效制剂。文献报道白砷剂LM0/3作为一种顺势疗法强化制剂,对于砷中毒症状有一定的治疗作用。目的:本研究旨在验证白砷剂LM0/3对由于生活环境所致而长期饮用砷污染水的人群的慢性砷中毒症状的缓解作用。设计、场所、对象和干预措施:本研究为双盲安慰剂对照研究,参加本研究的28名志愿者来自印度西孟加拉邦纳迪亚区一村落,该村无不含砷的饮用水可用,水井中的含砷量为55～95μg/mL。受试者分别服用药物或安慰剂,在参加试验前及2个月后试验结束时提供血、尿样本。另有18名来自无砷污染饮用水村的志愿者提供血、尿样本作为阴性对照。主要结局指标:测量受试者血、尿样本中的砷含量,各类中毒生物标记物及病理生理指标。结果:28名受试者中,14名愿意提供血、尿样本,其余14名退出试验。受试者的血、尿样本检测出砷的浓度升高,碱性磷酸酶及酸性磷酸酶水平升高,脂质过氧化反应及谷胱甘肽活性升高,血糖、三酰甘油、总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平升高,天门冬氨酸氨基转移酶及丙氨酸氨基转移酶水平、γ谷氨酰转移酶及葡萄糖6磷酸脱氢酶含量降低,高密度脂蛋白胆固醇水平及红细胞压积降低。2个月后,用药组的上述指标均有所改善,基质金属蛋白酶活性较安慰剂组有所降低。结论:在尚未有更好的医疗条件和治疗手段的情况下,使用白砷剂LM0/3在饮用水受砷污染地区作为暂时的治疗手段以缓解生活在这些地区的人们的慢性砷中毒症状有一定的可行性。