摘要：目的建立斑马鱼基质金属蛋白酶-9(MMP9)基因敲除模型,为研究MMP9基因在阿尔茨海默病(AD)中的作用机制奠定基础。方法根据CRISPR/Cas9的靶点设计原则,利用生物信息学方法,选取MMP9基因敲除靶点,构建gRNA质粒,将gRNA和Cas9的mRNA混合后注入AB野生型和APPsw转基因斑马鱼(APPsw+/+)的受精卵单细胞中,48 h后通过PCR、酶切及基因测序等方法验证基因敲除情况;遗传学方法传代筛选,建立斑马鱼mmp9-/-、APPsw+/+-mmp9-/-基因敲除品系;对基因敲除品系的发育、突变遗传率、突变类型和行为学等进行研究。结果构建成功4条gRNA,m2是最佳敲除靶点,突变遗传率平均>50%;野生型和APPsw转基因斑马鱼模型分别获得2个突变类型,APPsw+/+-mmp9-/-模型分别在敲除部位缺失4个和8个碱基,mmp9-/-缺失5个碱基和敲入5个碱基并伴有1处点突变,建立了野生型和APPsw过表达型MMP9基因敲除斑马鱼品系;F2代纯合子孵化率、幼鱼期表型和行为学检测结果与正常斑马鱼无统计学差异(P>0.05),成鱼期开始出现学习记忆能力的变化。结论MMP9基因的敲除能够减缓痴呆的发生发展进程,该模型的建立为AD研究提供支持。

摘要：目的观察视屏终端工作者泪液中基质金属蛋白酶．9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）、组织金属蛋白酶抑制剂．1（tissue inhibitors of matrix metalloproteinase．1，TIMP-1）活性变化。设计横断面研究。研究对象视屏终端工作者45例（45眼）。方法按照视频终端工作日平均时间将受试者分为三组：分别为〈4小时者17例（17眼）、4-8小时者13例（13眼）、〉8小时者15例（15眼）。采用眼表疾病指数问卷（OSDI）对眼部症状问卷调查。泪膜破裂时间（BUT）、基础泪液分泌试验（SchirmerI）、角膜荧光素染色检查。使用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测受试者泪液细胞因子MMP．9、TIMP一1的浓度。主要指标干眼症状评分、BUT、SchirmerI、角膜染色、泪液中MMP．9、TIMP．1的浓度。结果45例视屏终端工作者中干眼患病率为1313％，日平均使用时间〈4小时组、4-8小时组、〉8小时组OSDI得分分别为（16．47士3．28）、（18．77士4．38）、（21．16士3．76）（F=6．11，P=0．005），〉8小时组OSDI得分较〈4小时组高（P=-0．003），而4-8小时组与〉8小时组和〈4小时组OSDI得分无显著差异（P=0．31l，0.319）；BUT、SchirmerI、角膜荧光染色得分三组均无显著性差异（P=-0．687、0．122、0．714）。泪液中MMP．9、TIMP-1浓度在〉8小时组中分别为（9．579士0．48）ng／ml和（3．174士0．29）ng／ml，明显较〈4小时组[分别为（2．1ll士O．17）ng／ml和（O．391士0．06）ng／m1]和4-8小时组高]分别为（7．403士0．06）ng／ml和（2．286士10．28）ng／m1]（P值均=0．000）。〈4小时组和4～8小时组泪液中MMP．9（P=-0．72、0．13）、TIMP-1（P=0．21、0．37）工作前后浓度无显著差异。〉8小时组中，工作后MMP-9、TIMP．1浓度均高于工作前水平（P=-0．04、0．01）。结论视屏终端工作者中干眼发生普遍。视屏终端工作日平均使用时间越长，泪液中MMP．9、TIMP．1浓度越高，提示泪液中MMP-9、TIMP-1浓度升高与干眼发病有关。

摘要：目的:构建针对人基质金属蛋白酶-9(MMP-9)小干扰RNA(siRNA)表达载体,并观察其对川崎病(KD)血清诱导的血管内皮细胞MMP-9高表达的干扰效果。方法:依据siRNA设计原则设计两对MMP-9基因的特异性干扰序列,体外分别合成两端含BamH Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的编码短发夹RNA序列的DNA单链,退火后与pSilencer3.1-HI neo线性质粒连接,转化DH5α感受态菌株,筛选阳性克隆,提取质粒进行双酶切及琼脂糖电泳鉴定。阳性重组质粒测序。将构建的两个MMP-9 siRNA质粒以KD血清作为诱导因子,用脂质法转染内皮细胞ECV-304,应用RT-PCR法测定各实验组血管内皮细胞MMP-9mRNA表达、Western blot检测各组MMP-9蛋白表达情况,对所构建的MMP-9 siRNA质粒进行效应检测。结果:DNA测序证实合成的并被克隆入pSilencer3.1-HI neo表达质粒siRNA插入序列与设计完全符合。KD血清组MMP-9蛋白及mRNA表达水平均较正常血清组明显升高(P<0.05);而所构建的两个MMP-9 siRNA及人血丙种球蛋白均能显著抑制KD血清的上述诱导作用(P<0.05)。结论:成功构建的两个MMP-9 siRNA比人血丙种球蛋白更能高效、特异地抑制MMP-9的表达,为进一步研究MMP-9基因对KD冠状动脉病变的影响及其临床应用奠定了基础。

摘要：目的:研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在人正常角膜及真菌性角膜溃疡中的基因表达,探讨MMP-9在真菌性角膜溃疡形成中的作用。方法:搜集24份真菌性角膜溃疡标本(溃疡组)及12份人正常角膜组织标本(对照组),其中12份真菌性角膜溃疡组织和6份正常的角膜组织分别抽提组织总的RNA,以Primer5.0软件设计MMP-9的特异引物,并对标本RNA进行RT-PCR扩增,以MMP-9目的电泳条带与β-actin内参照条带灰度值比值代表相对表达量。分12份角膜溃疡组织和6份正常的角膜组织进行免疫组化检测MMP-9表达,通过免疫组化染色的灰度值进行统计学分析。结果:MMP-9在真菌性角膜溃疡中的表达明显高于正常角膜,且主要位于角膜上皮层、基底膜以及基质层。结论:真菌性角膜溃疡组织中MMP-9的基因表达明显上调。MMP-9在真菌性角膜溃疡的发生、发展及角膜穿孔中起着重要作用。加强MMP-9在真菌性角膜溃疡中的作用机制的研究,有望对真菌性角膜溃疡的治疗提供新的途径。

摘要：目的 探讨血清抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、25-羟维生素D[25-(OH)D]、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9水平对类风湿性关节炎(RA)患者骨侵蚀的预测价值。方法 选择2019年1月至2022年1月通许第一医院收治的83例RA患者为研究对象。所有患者入组后给予非甾体抗炎药双氯芬酸钠缓释胶囊(每粒25 mg),口服,每日3次,每次1粒,连续用药4周。于治疗前,设计基线资料调查表,记录患者的性别、年龄、病程、疾病类型、晨僵时间、受累关节数目等一般资料。所有患者完成4周药物治疗后接受X线检查评估骨侵蚀情况,根据X线检查结果将患者分为骨侵蚀组(n=44)和非骨侵蚀组(n=39)。治疗前采用酶联免疫吸附法检测患者血清中MMP-2、MMP-9、抗CCP抗体、25-(OH)D水平,采用流式细胞术检测患者外周血中辅助性T细胞17(Th17)水平。采用logistic回归分析RA患者治疗后骨侵蚀发生的危险因素;绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析血清MMP-2、MMP-9、抗CCP抗体、25-(OH)D水平对RA患者治疗后骨侵蚀发生的预测价值。结果 骨侵蚀组患者的血清MMP-2、MMP-9、抗CCP抗体水平显著高于非骨侵蚀组,25-(OH)D水平显著低于非骨侵蚀组(P0.05)。Logistic回归分析结果显示,血清MMP-2、MMP-9、抗CCP抗体过表达和25-(OH)D低表达是RA患者治疗后发生骨侵蚀的危险因素(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清MMP-2、MMP-9、抗CCP抗体、25-(OH)D水平预测RA患者治疗后发生骨侵蚀的截断值分别为493.979 ng·L^(-1)、400.554 ng·L^(-1)、0.18 Ru·L^(-1)、28.885μg·L^(-1),曲线下面积分别为0.813、0.809、0.852、0.867。结论 血清MMP-2、MMP-9、抗CCP抗体过表达及25-(OH)D低表达是RA患者非甾体抗炎药治疗后发生骨侵蚀的危险因素,血清抗CCP抗体、25-(OH)D、MMP-2、MMP-9水平对RA患者非甾体抗炎药治疗后骨侵蚀的发生有一定预测价值。

摘要：目的：探讨胡黄连苷Ⅱ对大鼠脑缺血性损伤和基质金属蛋白酶－9（ MMP－9）表达的影响，以及最佳治疗时间窗与剂量的选取。方法将174只Wistar大鼠随机分为脑缺血组、正常对照组和治疗组，按正交试验设计治疗组大鼠再分为缺血1．0 h、1．5 h、2．0 h、2．5 h，以及分别用胡黄连苷Ⅱ5 mg／kg、10 mg／kg、20 mg／kg和40 mg／kg亚组。用双侧颈总动脉结扎法制作脑缺血大鼠模型，治疗组大鼠按相应时间点和剂量经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ。用HE染色观察脑变性细胞指数（ DCI）及形态；电镜观察脑组织超微结构。免疫组化染色和Western blot法检测脑组织MMP－9蛋白水平，逆转录（ RT）－PCR检测MMP－9 mRNA水平。结果脑缺血组大鼠脑组织损害和MMP－9表达水平明显高于正常对照组（均P＜0．05）。与脑缺血组比较，治疗组的脑组织损害及DCI和MMP－9表达水平明显减轻和降低（均P＜0．05）。治疗组各亚组间两两比较，缺血1 h亚组与2 h、2．5 h亚组间脑DCI的差异有统计学意义（均P＜0．05）；缺血2 h与2．5 h亚组间的脑MMP－9阳性细胞指数，缺血1 h与1．5 h、2 h亚组，1．5 h与2．5 h亚组，2 h与2．5 h亚组间的脑MMP－9蛋白水平的差异均有统计学意义（均P＜0．05）；以及剂量5 mg／kg与20 mg／kg亚组间的脑MMP－9 mRNA水平的差异有统计学意义（均P＜0．05）。各剂量亚组间的脑DCI、MMP－9阳性细胞指数和蛋白水平的差异均无统计学意义（均P＞0．05）。结论胡黄连苷Ⅱ能抑制大鼠脑缺血后MMP－9的表达，并有显著的脑保护作用。按治疗时间窗最大化和用药剂量最小化的原则，其最佳的治疗时间窗为脑缺血后2 h内，剂量为（10～20） mg／kg。

摘要：目的观察脑清喷鼻微乳治疗急性缺血性卒中患者的疗效及对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法采用随机、双盲的试验设计,将2022年1—10月于广州医科大学附属中医医院神经科治疗的60例急性缺血性卒中患者随机分为脑清喷鼻微乳组(30例)和空白微乳剂组(30例),2组患者均接受常规治疗,脑清喷鼻微乳组同时给予脑清喷鼻微乳喷鼻,空白微乳剂组给予空白微乳剂喷鼻,均3次/d,3喷/次,疗程为10 d。观察2组患者治疗前后血清MMP-9水平、血液流变学指标、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、日常生活能力Barthel指数评分及中医证候积分的变化,比较2组临床疗效。结果治疗10 d后,脑清喷鼻微乳组血清MMP-9水平、全血高切黏度、全血中切黏度、全血低切黏度、血浆黏度、NIHSS评分、中医证候积分均明显低于治疗前及空白微乳剂组(P均<0.05);脑清喷鼻微乳组Barthel指数评分明显高于治疗前及空白微乳剂组(P均<0.05)。治疗10 d后脑清喷鼻微乳组总有效率为83.3%(25/30),空白微乳剂组为60.0%(18/30),脑清喷鼻微乳组明显高于空白微乳剂组(P<0.05)。结论脑清喷鼻微乳治疗急性缺血性卒中患者疗效更好,能显著降低患者血清MMP-9水平,保护血脑屏障,改善神经功能及临床症状,提高患者日常生活能力。

摘要：目的了解阿尔茨海默病(AD)大鼠口服补阳还五汤后,其大脑海马区基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的水平和钙蛋白酶活性的变化。方法制作AD大鼠模型,因不同的处理方式将实验设计为4组:正常组,AD组,补阳还五汤组和脑复康组。补阳还五汤组和脑复康组分别服用补阳还五汤和脑复康,正常组和AD组服用同等量的生理盐水,服用时长为4周。观察4组大鼠的行为能力的变化;免疫印迹技术分析大鼠海马区MMP-9的值;试剂盒检测大鼠海马区钙蛋白酶的活性变化。结果和正常组比较,AD组大鼠的行为能力变弱,海马区MMP-9的值升高(0.715±0.037),钙蛋白酶活性增强(2.741±0.384),差异均有统计学意义(均P<0.05);和AD组比较,补阳还五汤组和脑复康药组大鼠的行为能力提高,补阳还五汤组海马区MMP-9的值降低(0.338±0.016),钙蛋白酶活性变弱(1.821±0.149),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论补阳还五汤能改善AD大鼠的行为能力,这与其能减少AD大鼠海马区MMP-9的量和减弱钙蛋白酶活性密切相关。

摘要：目的探讨针刺对脑缺血再灌注模型大鼠脑损伤区组织基质金属蛋白酶(MMP-9)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法以大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型,采用随机区组设计将大鼠分为电针、针刺、药物、针药结合、模型、假手术等6个大组,其中电针、模型、假手术组又分12、24、48、72、96和144 h 6个时间点以,另设空白对照组7只。HE染色检测损伤区组织形态学变化;免疫组化法检测MMP-9和ICAM-1积分吸光度值。结果 HE染色显示,梗死核心区病理损伤高峰时间出现在48 h;72 h后间质水肿减轻,大量小胶质细胞和胶原纤维增生,出现大量新生血管。免疫组化结果显示,MMP-9和ICAM-1在血管内皮细胞和炎性细胞及少数神经元广泛表达,缺血区明显高于自身对照区;组内比较显示表达呈48 h和144 h双峰形;组间比较显示,在48、72和96 h,电针组与其他实验组结果有显著差异。结论电针可能通过上调损伤-修复网络功能,促进梗死区神经功能的恢复。

摘要：传感器因具有高灵敏度、简便快捷及轻松实现体内外检测等优点从而广泛应用于基质金属蛋白酶(MMP)检测。现有传感器设计思路是基于MMP-9分子结构或酶活性输出不同信号响应传感。该文总结MMP-9传感检测技术的研究现状及困难点,进一步讨论MMP传感器的发展前景,为MMP-9和其他良好生物靶标分子的传感检测提供参考。