摘要：【目的】研究转宿主粘虫颗粒体病毒(Pseudaletia unipuncta granulovirus,Pu GV-Ps)增效蛋白基因截短片段优化及其增效作用,探索增效蛋白基因的合理利用途径。【方法】生物信息学分析增效蛋白结构域,构建增效蛋白基因截短片段原核表达载体,分析目的基因片段表达产物的表达水平、围食膜蛋白降解效能和增强活性,进一步明确Pu GV-Ps增效蛋白基因的功能区域。【结果】Pu GV-Ps增效蛋白含有M60-like结构域、锌离子催化域和糖蛋白结合域,并包含13个潜在的糖基化位点。以此为依据设计P69(短截M60-like结构域)和P77(短截糖蛋白结合域)2个截短片段,构建了表达载体p ET15b-P69和p ET15bP77,原核表达量明显高于全长基因P104。表达产物纯化蛋白围食膜降解活性表明,P69对斜纹夜蛾围食膜大分子蛋白降解程度高于P77,但两者均低于P104。病毒增强苏云金杆菌(Bt)实验表明,截短片段的表达产物提高了Bt对小菜蛾的毒力,但增强活性显著低于P104。【结论】研究结果表明,Pu GV-Ps增效蛋白基因N端M60-like结构域和C端糖蛋白结合域对其增效作用的发挥都具有一定功能,这些结构对维持增效蛋白的构象也发挥了一定的作用,截短片段P69有利于保持Pu GV-Ps增效蛋白的活性、提高表达水平。该研究结果对增效蛋白的工业化生产具有一定的指导意义。

摘要：近些年来发现有些非纤维素酶组分的蛋白能协同纤维素酶系水解纤维素,大大提高纤维素酶的酶解效率,这些蛋白统称为增效蛋白。增效蛋白的发现为木质纤维素的水解提供了新的思路。本研究根据NCBI上甘薯链霉菌中潜在纤维素酶增效蛋白基因（登录号WP_009327266）设计相关引物,从甘薯链霉菌c DNA中扩增出潜在目的基因,命名为Sip1,并构建重组质粒Sip1-p ET-32a（＋）转入大肠杆菌,得到重组菌Sip1-p ET32a（＋）-*** BL21和Sip1-p ET32a（＋）-*** Rosetta（DE3）。表达的粗蛋白产物具32.3%纤维素酶增效活性。

摘要：为了寻找高效的微生物源纤维素酶增效蛋白,基于对微生物发酵液进行超滤、盐析、Sephadex G-75凝胶过滤层析等分离纯化手段,设计了检测微生物发酵液中纤维素酶增效蛋白存在的实验方案,并分别对细菌、真菌两大类共10种供试微生物中发酵产生的胞外蛋白进行检测,筛选出4株能产纤维素酶增效蛋白的菌。其中康氏木霉、真菌F2、真菌F1、产黄纤维单胞菌产的增效蛋白对纤维素酶的增效率分别为94.22%、50.22%、42.30%、19.86%。这为进一步研究新类型的纤维素酶增效蛋白的理化性质及其增效作用机制打下了基础。