摘要：本试验旨在研究丁酸钠(SB)刺激牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖的分子机制。采用单因素设计,以含不同浓度(0、15、30、45、60和75μmol/L)SB的DMEM/F12培养基(含10%新生胎牛血清)培养BMECs,通过细胞计数试剂盒(CCK⁃8)检测细胞活性,确定适宜SB浓度。然后以对照(0μmol/L)和适宜SB浓度培养BMECs,并采用蛋白激酶B(Akt)阻断剂(AKT⁃IN⁃1)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)阻断剂雷帕霉素(Rap)或小干扰RNA(siR⁃NA)沉默G蛋白偶联受体41(GPR41)对信号通路及受体进行处理,检测BMECs细胞增殖、凋亡以及GPR41和Akt/mTOR信号通路相关基因和蛋白表达的变化。结果表明:1)与对照组相比,60μmol/L的SB显著提高了BMECs细胞活力(P0.05)。3)与对照组相比,60μmol/L的SB极显著提高了GPR41的mRNA相对表达量(P<0.01),显著提高了GPR41蛋白相对表达量(P<0.05)。GPR41 siRNA沉默GPR41后完全逆转了60μmol/L SB对BMECs增殖的促进作用以及Akt/mTOR信号通路相关的增殖基因和蛋白的mRNA或蛋白表达(P<0.05或P<0.01)。由此可见,60μmol/L SB可通过GPR41介导Akt/mTOR信号通路促进BMECs增殖。

摘要：目的制备共载藤黄酸和雷帕霉素的脂质体(liposomes co-loaded with gambogic acid and rapamycin,GR@Lip)并优化其处方,研究GR@Lip的体外抗肿瘤机制、体内药动学和生物分布。方法以包封率、载药量及粒径为评价指标,通过单因素和正交设计实验筛选GR@Lip的最佳处方,并对其进行表征和稳定性研究;通过CCK-8法和流式细胞术考察GR@Lip对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响,细胞划痕实验与Transwell实验考察GR@Lip对肿瘤细胞迁移与侵袭的影响,透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)和免疫荧光考察GR@Lip对肿瘤细胞自噬的影响,液相色谱-质谱联用技术(liquid chromotography with mass spectrometry,LC-MS)和活体成像仪研究GR@Lip的体内药动学和生物分布。结果GR@Lip的最佳处方为制备温度40℃,药脂比1∶1∶20,磷脂与胆固醇比例4∶1,超声功率195 W,超声时间5 min,水化介质为超纯水,水相pH值为7.1;该方法制备的GR@Lip藤黄酸包封率为(97.27±2.76)%,雷帕霉素包封率为(96.58±3.82)%,藤黄酸载药量为(3.29±0.44)%,雷帕霉素载药量为(4.91±0.44)%。TEM形态观察显示GR@Lip呈球形,动态光散射(dynamic light scattering,DLS)检测其平均粒径为(157.19±1.74)nm、ζ电位为(−22.1±1.3)mV,且具有良好的稳定性。体外抗肿瘤活性实验结果显示,藤黄酸和雷帕霉素联用能协同抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭,并显著促进肿瘤细胞凋亡,增强自噬。此外,体内药动学和生物分布结果显示,GR@Lip可在体内滞留更长时间且具有良好的肿瘤靶向性。结论成功制备了GR@Lip,揭示其具有通过多途径协同抗肿瘤的活性,并显著改善了藤黄酸和雷帕霉素的药动学行为,为进一步体内研究和未来临床应用提供了实验依据。

摘要：目的探讨富含谷氨酸的WD重复序列蛋白1(glutamate-rich WD40 repeat containing1,GRWD1)蛋白表达水平对胃癌MKN-45细胞增殖和侵袭能力的影响.方法分别构建GRWD1过表达载体和设计siRNA并转染胃癌MKN-45细胞,设立GRWD1过表达组及对照组、siRNA基因沉默组及对照组.采用CCK-8法测定各组细胞增殖差异,采用transwell检测GRWD1过表达和基因沉默对胃癌细胞MKN-45侵袭能力的影响.结果siRNA组转染MKN-45细胞24h后,细胞增殖水平和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01),过表达组转染MKN-45细胞24h后,细胞增殖水平和侵袭能力明显增强(P<0.01).结论GRWD1与MKN-45胃癌细胞增殖和侵袭能力有关,下调GRWD1可抑制MKN-45细胞增殖水平和侵袭能力.反之,上调GRWD1可提高MKN-45细胞增殖水平和侵袭能力.

摘要：目的:探讨zeste同源物2的增强子(EZH2)和人类mutL同源物1(hMLH1)在神经胶质瘤中的作用。方法:设计合成靶向抑制EZH2和hMLH1和hMLH1特异的小干扰RNA(siRNA),转染U-87细胞,分为对照组和敲低组,通过5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)增殖实验分析两组的增殖能力。采用t检验进行组间比较。结果:神经胶质瘤组织和细胞中EZH2(7.97±0.14、6.00±0.18、6.24±0.11,t=83.80、47.18、83.55)和hMLH1(6.15±0.08、3.93±0.17、4.25±0.12,t=103.700、29.800、45.510)的mRNA水平明显高于对照组(P<0.01)。U-87胶质瘤细胞的siRNA转染导致细胞增殖能力降低,对照组(68.2±14.8),EZH2敲低组(33.5±13.1),hMLH1敲低组(43.1±10.0)。敲低EZH2和hMLH1表达后增强转染细胞凋亡(t=3.041、2.934,P<0.05)。沉默后磷酸化丝裂原细胞外激酶1(p-MEK1)/丝裂原细胞外激酶1(MEK1)和磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1)/细胞外信号调节激酶(ERK1)的比例下调,p-MEK(t=5.590、6.548,P<0.05)和p-ERK1的水平降低(t=10.730、9.260,P<0.05)。与单独转染EZH2-siRNA和hMLH1-siRNA比较,EZH2-siRNA和hMLH1-siRNA共转染的U-87细胞中,抑制作用增强(t=6.425、7.273,P<0.05)。结论:对EZH2和hMLH1的抑制可能通过激活MEK/ERK途径影响神经胶质瘤的生长和细胞死亡。

摘要：本研究以柳叶马鞭草盆栽苗为实验材料,探索其快繁体系。结果表明,将5~6 cm的带腋芽茎段以75%酒精与20%NaClO组合设计试验,发现用75%酒精消毒30 s, 20%NaClO消毒8 min的效果最好,7 d后污染率为12.78%,死亡率为4.44%,成活率达82.78%。将3~4 cm腋芽放在添加不同浓度6-BA、NAA的MS培养基中进行增殖诱导培养,发现在培养基为MS+1.5 mg/L 6-BA+0.10 mg/L NAA培养时,30 d后诱导率为100%,增殖系数达4.77,产生的丛生芽数目多。将3~4 cm的丛生芽剪成单芽,在培养基为MS+0.10 mg/L NAA进行培养时,15 d后株高差为4.64 cm,芽苗健壮且无枯萎现象。将长势好、高度5 cm左右的柳叶马鞭草无根苗置于培养基中探索IBA、NAA激素浓度,在MS+0.10 mg/L IBA+0.05 mg/L NAA条件下,15 d后生根率为100%,平均生根数为40.43,平均根长为3.27 cm;45 d后,平均根长为14.33 cm。进一步以蛭石代替琼脂作为基质,15 d后生根率为100%,平均根长可达4.50 cm, 45 d后平均根长可达42.33 cm,显著高于琼脂基质中的平均根长。自然光条件下炼苗4 d后,移栽至配比为V_(蛭石)∶V_(营养土)=1∶2的基质上,30 d后成活率为93.33%。

摘要：结核分枝杆菌耐热抗原(MTB-HAg)是从结核分枝杆菌(MTB)减毒菌株H37Ra经121℃,20 min,高温高压处理后从菌体释放到上清液中一种多肽类抗原。γδ T细胞是一类广泛分布于非淋巴组织的非常规T细胞,可分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)等细胞因子,在抗MTB感染的免疫应答中发挥重要作用。MTB-HAg可在体外有效刺激γδ T细胞增殖活化,使其更加高效地参与抗结核感染的过程,故MTB-HAg可作为设计新型结核疫苗或药物的潜在靶点。但由于MTB-HAg组成复杂,具体是何种成分刺激γδ T细胞发挥抗MTB感染功能还不清楚。

摘要：目的探究走马胎提取物对胰腺癌细胞PANC-1增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及作用机制。方法采用MTT法检测走马胎提取物对PANC-1细胞增殖的影响,观察其对PANC-1细胞形态的影响;设计划痕及Transwell迁移/侵袭实验检测其对PANC-1细胞迁移和侵袭能力的影响;采用Western blot法检测其对癌细胞中相关蛋白p65、P-p65、Caspase-3、Caspase-9、Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、Bcl-2及Bax表达水平的影响。结果走马胎提取物对PANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,能下调P-p65、Caspase-3、Caspase-9及Bcl-2的蛋白表达水平,上调Cleaved-Caspase-3、Cleaved-Caspase-9、Bax的蛋白表达水平。结论走马胎提取物能抑制PANC-1细胞活性,其机制是通过抑制PANC-1细胞的增殖、迁移与侵袭,上调Bax,下调Bcl-2,抑制p65的磷酸化,促进Caspase-3、Caspase-9的激活以诱导PANC-1细胞凋亡,而发挥抗胰腺癌作用。

摘要：目的探讨碳水化合物磺基转移酶11(CHST11)对肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖、迁移、侵袭生物学功能的影响。方法使用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究ccRCC组织与癌旁组织中CHST11基因的表达差异,分析CHST11表达水平与ccRCC分期、分级、预后的相关性;收集2021年1月至2021年10月在山西医科大学第一医院泌尿外科行手术切除的35例ccRCC和癌旁组织,采用荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、免疫组织化学和蛋白质印迹法(Western blot)检测ccRCC组织、癌旁组织及ccRCC细胞系中CHST11基因和蛋白表达水平;采用RNA干扰技术构建CHST11低表达的786O、769P细胞系;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验方法检测细胞的增殖能力,采用Transwell实验方法检测细胞的迁移和侵袭能力。使用Graphpad Prism 9.0进行数据分析,Student’s t检验用于两组间比较,单因素方差分析用于多组间比较。结果生物信息学分析表明CHST11在ccRCC组织中mRNA表达水平高于癌旁组织(4.459±0.060比2.437±0.738,t=15.818,P<0.01),并且与患者预后生存率明显相关[风险比(HR)=1.490,P<0.01];实验结果表明,CHST11在ccRCC组织中,mRNA(1.865±1.705比1.000±0.956,t=4.949,P<0.01)和蛋白表达水平(1.989±0.353比1.000±0.539,t=4.949,P<0.01)高于癌旁组织;CHST11主要定位于细胞质与细胞膜,敲减CHST11基因可抑制ccRCC细胞增殖、迁移与侵袭的能力。结论CHST11在ccRCC中发挥促癌作用,沉默CHST11基因可抑制ccRCC细胞增殖、迁移与侵袭的能力。

摘要：为达到高燃耗、低后处理量、长换料周期,一体化快堆以高内增殖为设计方向。本文研究了棒径和P/D(栅距与棒径之比)两个主要堆芯设计参数与内增殖间的关系,研究了降低钠空泡反应性的措施对内增殖的影响。结果表明,棒径的增加和P/D的降低能够显著提高内增殖,为了降低钠空泡效应而增加上钠腔并降低堆芯高径比会造成内增殖的损失。棒径与P/D的具体取值应在物理与热工之间寻求平衡,而对钠空泡反应性应从反应堆整体安全设计上缓解,一体化快堆的设计应以内增殖性能和高效的闭式燃料循环为主要目标。

摘要：抗性淀粉是一类重要的结肠微生物碳源,研究其构效关系,有助于了解其在体内的转化过程。以用微波法和水浴法制备的莲子抗性淀粉(MP-LRS3和WB-LRS3)为原料,通过体外消化,测定其在消化过程中结构的变化,建立与内源性短双歧杆菌的营养互作关系。结果表明:体外消化后MP-LRS3和WB-LRS3的结构均发生改变,其中结晶度显著升高(P<0.05),形态由表面粗糙的叠层结构逐步解聚为粒径较小且棱角圆润的颗粒,晶体结构仍为B型,双螺旋结构更加紧密,淀粉分子的排列更加有序。MP-LRS3和WB-LRS3因制备方式不同,故消化处理前、后的晶体特性均存在差异。相同消化阶段,MP-LRS3较WB-LRS3的解聚程度高。此外,MP-LRS3和WB-LRS3对短双歧杆菌的促增殖能力均随消化进程逐渐增强,在同一消化阶段前者的促增殖能力更强,这可能与消化环境对莲子抗性淀粉的解聚程度不同造成的结构差异有关。黏附结果与促增殖能力呈正相关,推测黏附水平也受莲子抗性淀粉结构变化的影响,并可能是影响莲子抗性淀粉与短双歧杆菌营养互作关系的重要因素之一。本研究结果可为完善抗性淀粉的体内代谢和益生作用提供理论依据。