摘要：目的:利用响应面法优化放线菌L012产壳聚糖酶的培养基。方法:采用部分因素实验设计,确定壳聚糖、牛肉膏、NaNO3、MgSO4为影响壳聚糖酶产量的主要因素,用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域,然后采用中心组合设计和响应面分析法确定放线菌L012产壳聚糖酶的最佳培养基组成。结果:放线菌L012产壳聚糖酶的最佳培养基组成(g/L):壳聚糖10.66,牛肉膏7.97,NaNO30.96,K2HPO4·3H2O 0.55,KH2PO4·3H2O 0.2,NaCl 0.05,FeSO4·7H2O 0.03,此时预测的最大壳聚糖酶活为2.62 IU/mL,实测壳聚糖酶活为2.61 IU/mL。结论:经响应面优化培养基,放线菌L012产壳聚糖酶酶活力提高了65%,具有工业化应用的潜力。

摘要：壳聚糖是一类来源丰富的大分子聚合物,在化工、食品、生物等多个领域都有广泛的应用价值,然而,只有降解成小分子的低聚糖才能更好地发挥其活性。随着酶法降解壳聚糖相较于其它方法的优势愈来愈明显,探索新型稳定高效的壳聚糖酶引起研究者的关注。参考GeneBank数据库中中村芽胞杆菌(Bacillus nakamurai)的壳聚糖酶氨基酸序列设计相应的编码基因,利用大肠杆菌原核表达系统表达和纯化重组蛋白。酶学性质研究结果显示:该酶在最适温度37℃,46℃处理30 min时仍有50%的相对酶活,最适pH值4.5。在pH 2.5条件下处理60 min时,仍可保持60%相对酶活。Ag^(+)、Hg^(+)完全抑制酶活性,Mn^(2+)、Mg^(2+)、Ca^(2+)对酶活性有促进作用,K^(+)、Na^(+)、EDTA对酶活性无明显作用。本文首次研究来源于中村芽胞杆菌的壳聚糖酶的酶学性质,以拓展该酶库资源,为该酶后续研究和应用提供理论依据。

摘要：壳聚糖酶是一类对壳聚糖具有较高催化活性而几乎不水解几丁质的糖苷水解酶,其可将高分子量的壳聚糖转化为低分子量的功能性壳寡糖。近年来,对壳聚糖酶的相关研究取得了显著进展,因此,本文对其生化性质、晶体结构、催化机制和蛋白质工程改造进行总结和探讨,并对酶法制备壳寡糖纯品进行展望,这将加深研究者对壳聚糖酶作用机制的认识,推动壳聚糖酶的工业应用。

摘要：目的:从全国各地土样中分离纯化出一株产壳聚糖酶活性较高的真菌M7a,并优化其固体发酵产酶条件。方法:综合形态学观察和18S rDNA序列测定进行鉴定,采用单因素和响应面设计确定其最佳固体发酵产壳聚糖酶条件。结果:菌株M7a被鉴定为淡紫紫孢菌,其最佳固体发酵产壳聚糖酶条件为:10 g/L胶体壳聚糖+5 g/L葡萄糖,10 g/L蛋白胨,豆粕麸皮质量比7∶5,初始pH值为6.0,发酵温度33℃及发酵时间5.5 d。产壳聚糖酶优化后达到16.80 U/mL,是初始条件的5.1倍。SDS-PAGE和酶谱分析发现该菌株产胞外分子质量为40.0 ku的壳聚糖酶,且无同工酶。结论:本研究筛选鉴定出一株新颖且产壳聚糖酶活力较高的淡紫紫孢菌M7a,优化了固体发酵条件,提高了产酶水平,为淡紫紫孢菌壳聚糖酶的分离纯化和应用提供了理论基础。

摘要：从连云港海滩晒虾蟹壳的泥土里筛选出一株产壳聚糖酶能力较高的菌株S-1,根据其形态特征、生理生化以及16S rDNA鉴定,初步认定该菌为芽孢杆菌属(Bacillus)。利用NCBI数据库中已经报道的Bacillus壳聚糖酶序列设计兼并引物,以菌株Bacillus sp. S-1的基因组DNA为模板进行聚合酶链式反应(PCR),克隆到壳聚糖酶基因的部分序列;利用Clontech公司Universal GenomeWalker试剂盒构建该菌株的基因组步移文库,根据已测定的序列信息设计特异性引物,结合两步法PCR技术分别克隆两端未知序列,拼接获得壳聚糖酶基因的全长序列(该基因全长1362bp编码453个氨基酸,注册号:EU924147),并对该序列进行了生物信息学方面的分析。

摘要：目前,利用壳聚糖酶降解壳聚糖已成为生产功能性壳寡糖的首选途径。本研究在单因素试验的基础上,通过响应面法结合中心组合设计优化了Bacillus thuringiensis ZJOU-010产壳聚糖酶的培养条件。结果表明:当虾壳粉质量浓度为44.96g/L、(NH4)2SO4质量浓度为1.48g/L、pH值为6.78时,*** ZJOU-010的壳聚糖酶活力达到4.25U/mL。优化后获得的实验值与模型的预测值(4.16U/mL)基本相符,且较优化前的酶活力(3.59U/mL)提高了18.47%。研究表明,利用生物催化技术以虾加工企业的副产物——虾壳粉为唯一碳源和氮源生产壳寡糖是可行的。

摘要：目的:通过对发酵培养基的统计优化提高海洋细菌Renibacterium ***1壳聚糖酶的产量。方法:通过Plackett-Burman实验筛选影响壳聚糖酶产量的显著性因素。在此基础上利用最陡爬坡路径逼近最大响应区域,利用响应面法进行回归分析。结果:确定了影响壳聚糖酶产量的3个显著因素,其最佳浓度分别是壳聚糖14.23g/L、酵母粉4.72g/L、p H6.42。经模型验证,预测值与验证实验平均值接近。结论:在最优培养基中壳聚糖酶活力达到608.11U/m L,比优化前提高了52.03%。

摘要：采用Plackett-Burman(PB)试验设计法及响应曲面法,对***-Z发酵生产壳聚糖酶的培养基进行了优化分析。PB试验设计与统计学分析表明:壳聚糖、酵母粉、葡萄糖是影响其产酶的重要因素。以酶活力为响应目标,对3因素进行Box-Benhnken试验设计,并经响应曲面法优化分析得到影响产酶的二阶模型,确定了***-Z发酵生产壳聚糖酶的最适条件为:壳聚糖1.36%,葡萄糖0.126%,酵母粉0.125%,(NH4)2SO41.0%,KH2PO40.1%,MgSO40.05%,pH值5.0,壳聚糖酶活力最大预测值为15.0 U/mL。在优化培养基中菌株发酵液的壳聚糖酶活力可达14.1 U/mL,表明试验值与预测值之间有较好的拟合度。

摘要：采用响应面分析对影响烟曲霉K1(Aspergillus fumigatus K1)生产壳聚糖酶的发酵培养基进行优化。首先采用部分因素试验筛选出影响壳聚糖酶产量的显著因素:牛肉膏和CaCl2。利用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域。最后,应用中心组合设计和响应面分析确定烟曲霉K1产壳聚糖酶的最佳培养基组成(%,W/V)为:壳聚糖1.5、牛肉膏2.1、KH2PO40.1、MgSO4·7H2O0.1、CaCl20.4和Tween0.1。经过优化,壳聚糖酶产量可达44.24U/ml,比开始条件提高2.4倍以上。

摘要：从自然界中采集土壤样品，经筛选获得了一株产高活性壳聚糖酶的菌种，经初步鉴定属于青霉属。对该菌种进行紫外光诱变提高了它的产酶能力。通过Ｐｌａｃｋｅｔｔ－Ｂｕｒｍａｎ设计初步优化了产酶条件，并研究了培养温度、摇床转速、培养基组成和装液量等培养条件对菌种产酶能力的影响，确定了该菌种的最佳产酶条件。在最佳培养条件下，壳聚精酶活最高可达２１６．６Ｕ／ｍｌ．