摘要：以 CMV亚组 1株系 Fny- CMV RNA2基因组为模板 ,根据其序列设计引物进行 PCR扩增 ,得到 2 .5 kb的全长复制酶基因扩增产物 .对此产物进行纯化 ,并用 N co I和 Bsp HI进行双酶切 ,得到 3个片段 .将不含有 GDD保守区的 2个片段用 T4 DNA连接酶连接 ,并对连接产物进行 PCR扩增 ,得到 2 .2kb左右缺失 GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶基因的扩增产物 .将其克隆到 p GEM- T Easy Vector上 ,进行序列测定 ,结果表明 GDD保守区确已缺失 .该缺失不导致开放阅读框架的移码 .将缺失 GDD保守区的基因定向克隆到植物表达载体 p BI12 1中 ,并经三亲交配导入根癌农杆菌中 ,经 PCR及酶切鉴定 。

摘要：中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是引起我国小麦花叶病的重要病原之一,其基因组由2条单链正义RNA片段(RNA1-2)组成。本研究根据发表的基因组序列设计特异性引物,扩增了CWMV复制酶基因的部分片段(nt102~1101),并克隆至原核表达载体pGEX-6P1,然后导入大肠杆菌*** BL21(DE3)pLysS中诱导表达。重组的复制酶蛋白经亲和层析纯化后免疫家兔制备多克隆抗体。Western-blot分析表明该抗体具有高度的特异性,能用于病株体内CWMV复制酶蛋白的检测。检测分析显示在病株体内,CWMV基因组RNA1可直接充当其复制酶基因的mRNA;在感染的细胞中,其复制酶组分主要是RNA1 ORF1编码的蛋白,分子量约153 kDa,且特异性地定位于膜结构上。

摘要：用设计合成的两对特异性引物 ,以马铃薯卷叶病毒中国分离株PLRV ChRNA为模板 ,经反转录PCR扩增 ,将复制酶基因 3′端 0 .6kb和 5′端 1.2kb ,克隆于 pUC19中 ,分别构建了重组质粒pLR3和 pLR5,并分五段进行了序列分析。将获得的核苷酸序列及氨基酸序列与国外报导的四个PLRV分离株的相应区段的序列同源性进行了比较。结果表明具有高度同源性。文中对核苷酸序列中存在的可能移码序列和其下游的茎环结构或假节结构、以及特征性三次重复区及氨基酸序列中复制酶蛋白N端的碱性氨基酸序列以及C端区域中包括GDD在内的 8个特征序列进行了讨论。作者发现移码序列上游的三次重复的核苷酸序列可以形成连续折叠的互补双链区和发夹结构 ,这一结构可能和转译移码有关。此外PLRV复制酶蛋白N端部分氨基酸序列易变 ,而C端氨基酸序列十分保守 ,可能和复制酶功能有更重要关系。