摘要：目的建立并优化夏枯草ISSR-PCR反应体系和扩增程序,为探讨夏枯草种质间遗传多样性奠定基础。方法采用单因子试验和正交设计方法,研究Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶、模板DNA、退火温度及循环次数对PCR扩增的影响。结果夏枯草ISSR-PCR的最佳反应体系为:在20μL的反应体系中含模板DNA30ng,Mg2+2.2mmol/L、dNTP175μmol/L、引物0.75μmol/L、TaqDNA聚合酶1.0U。在此基础上,从92条引物中筛选出18条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。结论采用单因子试验和正交设计方法可以快速建立ISSR-PCR反应体系,经过24份夏枯草种质检验,证明该体系稳定可靠,可用于夏枯草遗传分析。

摘要：苯丙氨酸解氨酶(PAL)是迷迭香酸合成途径中的关键酶之一,根据其他植物PAL基因的保守区域设计特异引物,利用3'-RACE-PCR技术,本研究首次从夏枯草中克隆得到了PAL基因的cDNA片段序列,命名为PvPAL,Gen-Bank登录号为JN65446。PvPAL基因cDNA片段长1 306 bp,其中编码区域为1 047 bp,编码349个氨基酸。蛋白质序列多重比较结果显示,PvPAL蛋白质序列与丹参、地黄、黄芩、藿香等植物的PAL蛋白质高度同源。PAL系统进化树分析结果表明,PvPAL与唇形科植物的PAL基因亲缘关系最近。组织表达分析结果显示,PvPAL基因在根、茎、叶中均表达,其中根中表达量最高。PvPAL基因的克隆为进一步研究夏枯草迷迭香酸合成的分子机制奠定了基础。

摘要：夏枯草为临床常用中药,药理作用广泛,我国资源丰富。夏枯草含有三萜类、甾体类、黄酮类、香豆素类、有机酸和多糖等药效成分,其中多糖作为夏枯草主要药效成分之一,具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和调节免疫功能等药理作用,有重要的临床应用和开发利用价值,在食品、医药、保健品等行业有诱人的应用前景。从提取、纯化和药理作用等方面梳理概述了国内夏枯草多糖研究进展,并展望了其研究方向,旨为夏枯草多糖的深入研究和临床应用提供参考。

摘要：分析超声波辅助提取对夏枯草总黄酮得率的影响,采用正交设计试验优化总黄酮提取工艺,筛选适合于分离总黄酮的大孔吸附树脂,最后研究其自由基清除活性。结果发现:超声波辅助提取不能提高夏枯草总黄酮得率,最佳提取条件为乙醇体积分数50%、料液比1:30(g/mL)、时间3h、温度80℃,得率可达5.05%;大孔吸附树脂AB-8适合于分离夏枯草总黄酮;紫外-可见光谱分析其可能为黄烷酮和双氢黄酮醇类;随质量浓度增加,夏枯草总黄酮的DPPH自由基和羟自由基清除活性越接近VC,当质量浓度分别大于82μg/mL和0.83mg/mL时,两者的清除率都大于90%,显著高于叔丁基羟基茴香醚。

摘要：黄酮类化合物由于其较好的抗炎、抗氧化、抗肿瘤等作用,其研究一直备受关注。目前,黄酮类化合物的提取主要以有机溶剂提取为主,而使用绿色安全的溶剂作为溶媒的研究相当有限。因此,该研究通过绿色合成不同类型的低共熔溶剂（deep eutectic solvents,DESs）,考察其对夏枯草中黄酮类化合物提取的影响并优化其工艺,同时,考察DESs溶剂回收利用效率和总黄酮的回收方法。该研究以总黄酮提取率作为评价指标,以中心组合设计（central composite design,CCD）响应面法来优化DESs提取条件。结果表明,总黄酮的最佳提取最优条件为水与DESs（氯化胆碱-甘油1∶4）的体积比为27%,液固比为15m L·g（-1）,提取温度83℃,提取时间42 min。在此条件下,提取率的平均值（Y=75.05）与预测值相（Y=77.86）符合。而且,DESs法所得结果较先前报道的传统提取方法具有更高效、经济和环保等优势,此外,运用AB-8大孔树脂可对夏枯草总黄酮达到97.88%吸附率;采用5倍树脂量的100%乙醇可达到88.12%解吸附剂,收集上述处理后的DESs溶液按照同样方法提取样品,可达到95.23%重复提取率,说明大孔树脂的方法可进行高效简单的回收以及重利用,该项研究表明,DESs可作为一种可持续和高效的天然产物提取介质用于夏枯草等中药中黄酮类组分的提取。

摘要：目的:研究氮、磷、钾及有机复合肥不同施肥量对夏枯草果穗干物质及其产量的影响,以期为夏枯草规范化栽培技术的建立提供理论依据。方法:田间小区试验采用四因素二次正交旋转组合设计,建立夏枯草果穗产量的函数模型。结果:通过模型解析,氮、磷、钾对夏枯草果穗产量均有显著影响,其中,氮肥对夏枯草果穗产量影响最大,其次为磷肥、再次钾肥,有机复合肥最小;在低肥力条件下,夏枯草果穗产量均随氮、磷、钾及有机复合肥施用量增加而提高;当氮、磷、钾及有机复合肥施用量过多,则导致果穗产量下降。结论:本试验条件下,夏枯草果穗产量超过为722 ***-2的优化施肥方案为N 303.9～335.1 ***-2,P2O5 432.5～500.6 ***-2,K2O 206.6～240.2 ***-2,有机复合肥2 312.5～2 687.5 ***-2。

摘要：首先采用单因素和正交设计试验优化总黄酮提取工艺,再分析其抑菌活性。结果发现,夏枯草总黄酮的最佳提取条件为乙醇浓度50%,料液比1:30(g/mL),时间3 h,温度80℃,得率可达5.05%。该提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有明显的抑菌效果,抑菌圈直径分别为27.6 mm和22.5 mm,对大片酵母菌、黑曲霉没有抑菌效果。

摘要：目的:克隆分析夏枯草中对羟基苯丙酮酸双氧化酶基因PvHPPD,并对其编码蛋白进行原核表达与纯化,为日后探索对羟基苯丙酮酸双氧化酶的生物学作用提供依据。方法:基于夏枯草转录组数据库,利用同源比对和电子克隆得到PvHPPD cDNA序列,设计引物扩增PvHPPD cDNA,并进行生物信息学分析。将PvHPPD cDNA序列连接到pMAL-c5x载体上融合麦芽糖标签,转化BL21(DE3)表达菌中,IPTG诱导蛋白表达并进行纯化。结果:PvHPPD的cDNA序列长1850 bp,ORF序列长1452 bp,编码483个氨基酸,编码蛋白为亲水性非跨膜蛋白。多序列比对分析表明,该基因具有HPPD蛋白特有的保守结构域,保守区域多集中在C端,N端多变化。系统进化分析表明,PvHPPD基因表达蛋白与唇形科植物聚为一组,并与虎尾紫苏的同源性达85%。体外蛋白表达发现该蛋白在上清液和沉淀(包涵体)中均有表达,沉淀中的表达更多。结论:该研究成功获得PvHPPD基因,并掌握了该基因编码蛋白的生物信息学特征及体外表达体系,该结果将有利于后续深入研究PvHPPD基因及其在迷迭香酸生物合成途径中的功能和调控机制。

摘要：为探究夏枯草中GGPPS基因的生物学特性及功能,该文在夏枯草转录组测序的基础上设计特异性引物,采用逆转录PCR技术获得夏枯草中GGPPS基因的全长核苷酸序列,并进行生物信息学分析;采用qPCR法分析PvGGPPS基因在不同外源性物质诱导下在夏枯草果穗中的表达量以及该基因在夏枯草不同组织中的表达量。结果表明:PvGGPPS基因开放阅读框1092 bp,编码363个氨基酸,理论分子量为38815.68 D,等电点为5.69。PvGGPPS蛋白具有异戊烯基焦磷酸合酶家族的特征结构域。系统进化树表明PvGGPPS蛋白与丹参、毛喉鞘蕊花GGPPS蛋白具有较高的亲缘关系。qPCR分析表明,PvGGPPS基因在叶中表达量高于果穗及茎。对果穗施加7种外源性物质处理24 h后,GA3处理组该基因表达量升高。PvGGPPS基因在夏枯草不同组织中表达量差异较大,且受外源物质诱导表达。该研究结果为进一步研究PvGGPPS基因对夏枯草萜类成分合成途径中的功能及表达调控奠定基础。

摘要：目的采用星点设计-效应面法优化夏枯草总黄酮的富集纯化工艺。方法夏枯草70%乙醇提取液用聚酰胺吸附,水洗除杂,加在大孔吸附树脂柱顶部。以上样液总黄酮质量浓度、乙醇用量、乙醇体积分数为影响因素,总黄酮含有量为评价指标,通过星点设计-效应面法优化工艺。结果最佳条件为上样液总黄酮质量浓度2.19 mg/m L,乙醇用量4.5 BV,体积分数75%,总黄酮含有量19.08%,与预测值(19.84%)相当。结论该方法稳定简便,预测性好,可用于富集纯化夏枯草总黄酮。