摘要：目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,然后设计嵌套引物,以兔外周血总RNA为模板,进行RT-PCR和Nested-PCR扩增,产物经胶回收后克隆到T载体,随机挑选白色克隆测序,最后将序列用Bioedit软件的Local Blast功能比对出Cγ的基因型,同时提交到IMGT/V-QUEST分析出所属的VH、D和JH胚系基因。结果获得25个克隆的插入子序列,每个克隆均为兔IgG重链可变区的编码基因,且包含了完整的VH、D、JH胚系基因片段,以及Cγ基因第1个外显子(CH1)序列的5’端部分,但没有任何2个克隆的序列完全相同。37个IGHV功能基因出现了2个;11个IGHD功能基因出现了8个;11个IGHJ功能基因出现了4个。VH-D-JH组合方式共出现18种,即使VH-D-JH组合方式相同,序列仍具有明显的差异。结论从兔外周血总RNA中直接扩增出了IgG重链可变区,自行设计的引物显示出了高度的特异性和良好的兼并性。

摘要：采用３Ｈ－ＴｄＲ释放法分别检测了单纯ＮＫ细胞活性及红细胞作用下ＮＫ细胞的活性，结果显示肺癌患者外周血ＮＫ细胞活性（２３．７８％±６．３４％）较正常对照组（４１．３７％±７．４３％）明显降低（Ｐ＜０．００５），但在正常人红细胞作用下，其ＮＫ细胞毒活性为３０．３０％±６．５６％，经配对设计ｔ检验有显著性差异（Ｐ＜０．００１）；在肺癌患者红细胞作用下，机体ＮＫ细胞活性无明显变化，经检验不存在显著性差异（Ｐ＞０．０５）。表明正常人红细胞对自身及肺癌患者的ＮＫ细胞活性均有显著的促进作用，在肿瘤免疫学及临床肿瘤的治疗方面将有积极的意义。

摘要：目的　研究鸭IFN γ(DuIFN γ)在感染及控制病毒过程中的作用和机制。方法　基于β actin的高度保守序列设计引物 ,通过RT PCR方法获得了 β actin的部分cDNA为看家基因 ,然后构建DuIFN γ靶片段的竞争性内参照 ,建立检测DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法。结果　建立了检测DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法 ,并检测了在PHA刺激下鸭外周血单核细胞IFN γmRNA动态变化 ,结果表明PHA刺激 2 4～ 36h ,DuIFN γmRNA转录量最高。以此方法对用DHBVpreSDNA或与IFN γDNA共免疫DHBV感染鸭进行了测定 ,结果表明IFN γ表达质粒作为DNA免疫佐剂 ,可以增强宿主IFN γ的应答。结论　IFN γ表达质粒为DNA疫苗的有效佐剂。DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法为研究鸭IFN γ在DHBV感染及清除中的作用和机制奠定了基础。

摘要：目的　引入四聚体技术比较基于不同表位组合的模拟抗原分子的免疫原性 ,研究其结构与诱导免疫应答之间的关系。方法　以乙型肝炎病毒核心抗原 (HBcAg) 18～ 2 7表位为基础 ,分别引入了TH、TH +B细胞表位 ,合成了 3种模拟抗原 ,并以这 3种模拟抗原在体外刺激慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞为模型 ,通过HLA A2 0 2 0 1tetramer定量检测抗原特异性细胞毒性T细胞 (CTL)。结果　 3种模拟抗原分子能有效地诱导慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生抗原特异性CTL反应 ;TH 和B细胞表位的引入可增强该效应。结论　我们所建立的四聚体技术可定量检测表位特异性CTL ;模拟抗原的设计中引入TH 。

摘要：背景与目的:CD4+CD25+T细胞又称为调节性T细胞(Treg),是一群具有免疫抑制功能的T细胞亚群。近来的研究表明Treg能够显著地抑制免疫反应,导致肿瘤细胞的免疫耐受。然而,Treg在肝癌临床中的意义目前尚未阐明。本研究旨在探讨Treg水平与肝癌临床病理特征及预后的关系。方法:采用前瞻性研究设计,117例原发性肝癌患者于1999年1月至2000年12月住院且首次行肝癌根治性手术切除,术前用流式细胞仪检测其外周血Treg水平。术后随访至2005年12月30日。分析外周血Treg水平与肝癌临床病理特征及生存率的关系。40例正常对照来自健康献血者。结果:肝癌患者外周血中Treg的水平为(12.54±4.69)%,正常对照组为(8.81±1.98)%,两者比较差异有显著统计学意义(P<0.01)。全组1、3、5年生存率分别为83.8%、49.6%、35.9%。在单个病灶的患者中,Treg水平与肿瘤的边界有关,肿瘤边界不清楚者Treg水平显著增高;外周血Treg水平与其它临床病理特征无关。外周血Treg水平增高的患者预后差。结论:肝癌患者外周血Treg比例升高是影响预后的独立危险因素。

摘要：目的从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列。方法首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,最终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型。结果共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列。没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5’端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率最高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03。33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次)。18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率最高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次)。Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异。结论利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因。

摘要：一例辐射事故病人外周血淋巴细胞ＨＰＲＴ基因突变谱分析赵艳华邢瑞云夏寿萱次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（ＨＰＲＴ）基因是研究电离辐射所致ＤＮＡ损伤和衡量对人体的近、远期辐射效应较为理想的靶基因。作者利用计算机辅助设计，合成ＨＰＲＴ基因全部外显子的寡核苷酸引物，...

摘要：背景:观察血管内皮祖细胞在牙周血管改建中的作用规律对于研究正畸牙周改建机制具有重要意义。目的:对牙移动大鼠外周血内皮祖细胞进行体外分离、培养及鉴定,探讨牙齿移动是否可动员骨髓内皮祖细胞进入外周血。设计、时间及地点:细胞体外分离培养及生物学指标检测,随机对照动物实验。于2007-09/2008-04在吉林省口腔生物医学工程重点实验室完成。材料:24只Wistar大鼠,随机分为实验组和对照组,每组12只。方法:实验组建立大鼠牙移动模型,对照组置牵拉装置但不加力。加力第2天取两组动物外周血制作细胞涂片,检测其中CD133阳性细胞数。同时以Percoll密度梯度分离提取其外周血单个核细胞,培养至第12天,取两组细胞爬片进行相关指标检测。主要观察指标:以免疫细胞化学染色和免疫荧光化学染色检测细胞表面标志物,荧光化学检测细胞吸收乙酰化低密度脂蛋白及荆豆凝集素1情况,MTT法检测细胞增殖情况。结果:实验组细胞涂片中CD133阳性细胞率明显高于对照组(P<0.05)。所培养细胞可同时吸收Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白、FITC标记的荆豆凝集素1,呈CD133、Ⅷ因子、CD34阳性。实验组细胞增殖活性高于对照组(P<0.05)。结论:实验初步证实了实验性牙移动可动员大鼠骨髓内皮祖细胞进入外周血。

摘要：背景:血管平滑肌细胞是构成血管壁组织结构及维持血管张力的主要细胞成分。研究表明从外周血获得的平滑肌祖细胞可分化为血管平滑肌细胞。目的:课题特点在于选择成人外周血来源的平滑肌祖细胞,并与成熟血管平滑肌细胞进行细胞形态、增殖潜能等方面异同点的比较。设计、时间及地点:以细胞为培养对象,观察性实验,于2008-10/2009-04在江西省分子医学重点实验室完成。材料:采取6名健康志愿者外周血20mL,6名下肢大隐静脉曲张患者大隐静脉。方法:分离成人外周血单个核细胞,用纤粘连蛋白、血小板衍生生长因子BB和EGM培养基诱导培养;同期用胶原酶消化大隐静脉获得平滑肌细胞,用高糖DMEM培养基培养。主要观察指标:观察细胞形态,用细胞免疫荧光法和反转录-聚合酶链反应法检测α-SMA和calponin1的表达,四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖能力。结果:成人外周血中平滑肌祖细胞具有血管平滑肌细胞的生物学特性,表达α-SMA和calponin1,平滑肌祖细胞增殖能力明显强于血管平滑肌细胞的增殖能力。结论:成人外周血中单核细胞在血小板衍生生长因子BB的刺激下可以分化为平滑肌祖细胞,且平滑肌祖细胞较平滑肌细胞增殖旺盛,长时间培养不易老化,具有发展为一种理想的血管组织工程种子细胞来源的可能性。

摘要：背景：内皮祖细胞在贴壁分化过程中其干细胞标记以及内皮细胞表型的变化过程将有助于了解内皮祖细胞的分化特性。但目前还未找到区别于成熟内皮细胞特异性的细胞标记。目的：观察大鼠外周血单个核细胞外分化为内皮细胞的过程中干细胞标志物以及内皮细胞表型的变化。设计、时间及地点：细胞观察实验,于2004-06/2008-12在青岛市市立医院心脏外科实验室完成。材料：抽取雄性SD大鼠外周血,应用Ficoll密度梯度离心的方法获得单个核细胞。方法：单个核细胞体外培养于纤连蛋白处理的培养皿中,同时应用血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子诱导,使之向内皮细胞转化。主要观察指标：以免疫组织化学方法检测细胞CD31、CD34、Flk-1、vWF在第1-7天的表达。结果：贴壁细胞的CD31、CD34、Flk-1、vWF在不同时段呈不同程度的表达。干细胞标志物CD31、CD34在培养的第2天开始表达,第4天最强,以后逐渐减弱,第6天消失。而Flk-1在第3天开始表达,以后逐渐增强,第7天时最强。vWF表达是逐步出现的,第7天时表达为100%。结论：大鼠外周血干细胞向内皮祖细胞分化的过程中,干细胞标志物逐渐消失,内皮细胞的表型逐步出现。