摘要：生物剂量估算是指建立剂量和不确定性因素间的联系,这就需要用数学算法将实验数据拟合成数学曲线,再进行估算分析.人离体外周血辐射实验能够较好地反映人体电离辐射损伤情况[1].因此,实验室建立的外周血辐射生物剂量-效应曲线常用于辐射事故后剂量评估.染色体畸变实验、微核实验、单细胞凝胶电泳和淋巴细胞计数等是辐射剂量估算的常用手段,其相关剂量效应曲线拟合的精确度尤为重要.本研究通过计算机语言VC和相关拟合算法编写了新的辐射生物剂量估算软件BioDoser,旨在提高剂量估算的效率和精确度.

摘要：目的　研究人造血增效因子 (hHSF)在大肠杆菌 (E .coli)中的表达及其动员恒河猴外周血造血干 /祖细胞的作用。方法　应用重叠PCR方法合成编码hHSF的DNA片段 ,克隆测序证实其序列正确后 ,重组到表达载体 pET30a中 ,转入E .coliBL2 1(DE3) ,并用IPTG诱导表达 ,目的蛋白用凝胶过滤和阳离子交换层析法进行分离纯化和复性。用飞行时间质谱仪和氨基酸测序仪分别测定纯化的目的蛋白相对分子质量、N端氨基酸序列以及氨基酸组成。选用恒河猴 8只 ,随机分为两组 ,每组4只 :一组为单次皮下注射重组hSCF 5 0 0 μg/kg ,另一组为皮下注射rhG CSF 10 μg·kg-1·d-14d后 ,单次注射rhHSF 5 0 0 μg/kg。观察恒河猴外周血CD34+ 细胞、CFU GM数目以及血常规。结果　测序证实合成的hHSF序列与设计一致 ,构建的重组表达载体 pET30a hHSF在E .coli中获高效表达 ,目的蛋白占菌体总蛋白的 30 %左右 ,主要以包涵体形式存在。目的蛋白纯度达 95 %以上 ,N端前 10个氨基酸序列分析结果与预期一致 ;相对分子质量为 75 4 0 ;氨基酸组成分析结果与理论值基本一致。恒河猴实验结果表明 ,单次皮下注射重组hHSF后外周血CD34+ 细胞、CFU GM和中性粒细胞数分别在用药后 3h ,1h和 4 5min达高峰 ,动员幅度分别为用药前检测值的 16 .3倍、1.9?

摘要：背景 已有研究表明,白内障患者晶状体和房水中一氧化氮合酶（NOS）含量增加,但检测较为困难,而确定人体血液中NOS的过度表达是否与白内障有关对于白内障的临床检测和早期预防具有重要意义.目的 探讨白内障患者外周血中NOS的表达变化及其临床意义.方法 采用前瞻性队列研究设计,选择2014年1-6月在苏州大学附属第一医院及上海交通大学医学院附属新华医院眼科就诊的年龄相关性白内障患者25例、糖尿病性白内障患者12例和同期体检的健康者20名,3个组患者基线特征匹配.收集所有受检者的外周血样本2.0 ml,离心法获得沉淀细胞.分别采用逆转录PCR（RT-PCR）法和流式细胞术检测受检者外周血中总NOS mRNA和诱导型NOS（iNOS） mRNA及其蛋白的表达水平,对各组间的检测结果进行比较.结果 年龄相关性白内障组、糖尿病性白内障组和健康对照组受检者外周血细胞中总NOS mRNA的相对表达值分别为1.46±0.31、1.59±0.28和1.22±0.23,3个组间的总体比较差异有统计学意义（F=7.572,P=0.001）,其中年龄相关性白内障组、糖尿病性白内障组受检者外周血中NOS mRNA的相对表达值明显高于健康对照组,差异均有统计学意义（q=4.095、5.170,均P＜0.01）;年龄相关性白内障组、糖尿病性白内障组和健康对照组受检者外周血细胞中iNOS mRNA的相对表达值分别为1.17±0.21、1.08±0.15和0.89±0.17,3个组间的总体比较差异有统计学意义（F=12.801,P=0.000）,其中年龄相关性白内障组、糖尿病性白内障组受检者外周血中iNOS mRNA的相对表达值明显高于健康对照组,差异均有统计学意义（q=7.112、3.932,均P＜0.01）.年龄相关性白内障组、糖尿病性白内障组和健康对照组受检者外周血细胞中总NOS蛋白的相对表达值分别为15.82±2.11、17.19±3.37和10.63±2.28,总体比较差异有统计学意义（F=34.895,P=0.000）,其中年龄相关性白内障组、糖尿病性白内障组受检者外周血中NOS蛋白的相对表达值明显高于健康对照组,差异均有统计学意义（q=9.885、10.266,均P＜0.01）.结论 年龄相关性白内障和糖尿病性白内障患者血液中NOS含量增加,可能在白内障的形成和进展过程中发挥重要作用,外周血中NOS的检测可作为白内障防治的监测指标.

摘要：根据公牛Sry特异性序列设计两对寡核苷酸引物。并对20份妊娠晚期母牛外周血DNA样品进行PCR扩增,结果有9份样品检测出有Sry片断(阳性),其余11份为阴性。经分娩牛犊性别验证,在20份被检测的样品中,有16份PCR检测结果与犊牛实际性别相符,其余4例不符。我们的实验结果说明,胎儿细胞可以进入到孕牛的外周血中去。

摘要：传统的CD4阳性淋巴细胞的检测方法是通过计数外周血总白细胞和淋巴细胞百分比来计算T淋巴细胞亚群的绝对数.这一方法需用手工或血细胞计数仪来计数总白细胞(WBC)和各分类白细胞,再用流式细胞仪或显微镜得出淋巴细胞亚群百分比,相乘得出CD4T淋巴细胞的绝对数.这种双平台方法由于多步骤测定方法,得到的结果误差很大,一定程度上限制了其临床应用.FACSCount系统是BD公司最近研发的一个是专门设计用来自动计数CD3+,CD3+CD4+(CD4+), CD3+CD8+(CD8+)阳性细胞及CD4+/CD8+比值的集成细胞计数仪,样本标记步骤简捷,可以直接测量T细胞各亚群细胞的绝对数量而无须计数外周血白细胞和淋巴细胞百分比[1].本研究选用另一种单平台计数淋巴细胞各亚群的方法,以FACS MultiSET系统作为参照系统来比较两个系统得到数据的精确性、重复性以及操作特点等,评价使用FACSCount系统临床应用的可行性。

摘要：目的研究难治性癫患者外周血中多药耐药1(MDR1)基因的表达以及抗癫药物和性发作在难治性癫多药耐药发生中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测120例研究对象外周血中MDR1基因mRNA的表达。根据析因设计分性发作和抗癫药物两个因素,共分为A组(难治性癫组)、B组(癫治疗有效组)、C组(性发作未用药组)和D组(健康正常对照组),各30例。结果4组的外周血中MDR1基因的表达水平明显不同(F=4.456,P=0.005),其中性发作引起MDR1mRNA的表达明显增高(F=10.005,P=0.002),抗癫药物的作用则不明显(F=0.919,P=0.340),抗癫药物与性发作两者之间没有交互作用(F=2.445,P=0.121)。结论难治性癫患者外周血中MDR1基因mRNA的表达上调是性发作而非使用抗癫药物的结果,外周血中MDR1基因mRNA表达水平的监测可以作为评价癫耐药的一项指标。

摘要：背景:预输注供者凋亡细胞能够诱导受者体内产生针对供者抗原发生的特异性免疫耐受,但其具体途径尚不清楚。目的:观察供体凋亡淋巴细胞输注后受体外周血细胞因子的变化。设计、时间及地点:细胞观察性实验,于2007-11/2008-05在南方医科大学附属珠江医院移植免疫实验室完成。材料:供体C57BL雄性小鼠14只,8～10周龄,受体Balb/c雄性小鼠50只,6～8周龄。方法:分离供体小鼠脾脏细胞,放置于紫外线灯距离20cm处的摇床上照射1h,紫外线诱导C57BL小鼠脾脏细胞凋亡。将受体Balb/c小鼠随机分为凋亡细胞组和活细胞组,分别将107个供体C57小鼠脾脏凋亡细胞、活细胞经尾静脉输注于受体小鼠。主要观察指标:输注后0,1,3,6,12h经心脏采血,Luminex技术液态芯片法检测外周血白细胞介素1β、白细胞介素2、白细胞介素4、白细胞介素5、白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ、肿瘤坏死因子变化。结果:只检测到白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素12、粒细胞-巨细胞集落刺激因子、干扰素γ5种细胞因子,其他细胞因子未测出。经紫外线诱导后小鼠脾脏细胞凋亡率达到93.86%。与0h相比,外周血中干扰素γ和白细胞介素10分别在输注活细胞后6h和3,6h明显升高,其他细胞因子无明显变化。与0h相比,输注凋亡细胞1,3,6,12h后,外周血中各细胞因子无明显变化。活细胞组输注后1h白细胞介素6和输注后3,6h白细胞介素10浓度高于凋亡细胞组,其他细胞因子差异不显著。结论:同种异源供者凋亡淋巴细胞输注对外周血细胞因子浓度无变化,提示其对受体外周免疫功能可能无明显影响,其诱导产生的免疫耐受可能主要在局部发挥作用。

摘要：背景:目前常用鼠作为动脉粥样硬化动物模型,但其体型较小,试验条件受限。兔也是常用的动脉粥样硬化动物模型之一,但其树突状细胞的培养和鉴定方式需要进一步摸索。目的:探讨兔外周血源性及骨髓源性单核细胞体外向树突状细胞转化的可行性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-12/2008-10在南方医科大学珠江医院儿科实验室、中山医科大学达安医学检测中心完成。材料:6周龄雄性纯种新西兰大白兔12只,购自南方医科大学实验动物中心。人粒-巨噬细胞集落刺激因子、人白细胞介素4、脂多糖为美国Pepro Tech Inc产品。方法:兔心尖穿刺抽取血液20mL,同时行骨髓穿刺抽取骨髓10mL,采用密度梯度离心法分离收集中间云雾状细胞层,加入适量的含双抗的胎牛血清的1640培养液,培养2h后弃去未贴壁细胞,即为兔外周血源性和骨髓源性单核细胞。2种不同来源的单核细胞均分为2组:实验组以含有20μg/L人粒-巨噬细胞集落刺激因子、20μg/L人白细胞介素4的上述培养基隔日换液培养6d,其中在第5天加入10mg/L脂多糖刺激并孵育过夜;对照组未添加任何细胞因子。主要观察指标:光镜及电镜观察细胞形态,流式细胞仪鉴定细胞表型。结果:培养6d后,外周血源性和骨髓源性对照组细胞呈圆形或椭圆形,表面有小杆状突起,符合巨噬细胞的特征;实验组细胞呈不规则形,表面粗糙,胞体有形态不一的突起,符合树突状细胞的特征。流式细胞仪检测结果显示,外周血源性和骨髓源性的实验组细胞均高表达HLA-DR,CD86,低表达CD14,组间比较差异无显著性意义(t=0.5187,t=1.7151,t=0.0250,P均>0.05);对照组细胞HLA-DR,CD86,CD14的表达则与实验组相反。结论:在人粒-巨噬细胞集落刺激因子、人白细胞介素4及脂多糖联合作用下,兔外周血源性单核细胞及骨髓源性单核细胞均能转化为成熟树突状细胞。

摘要：通过TaqMan实时荧光定量PCR（聚合酶链式反应）,建立一种快速检测凋亡抑制蛋白survivin基因的特异检测方法.选择survivin基因的保守序列设计引物和对应的探针,经PCR扩增95bp序列,经pES1002质粒克隆后转入大肠埃希氏菌*** DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为模板制作TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线,然后进行方法的重复性和灵敏度实验.结果表明,该检测方法能够检测外周血survivin基因,线性范围为1×10^7～1×10^4copies/μL,相关系数为0.998,灵敏度为1×10^2copies/μL.

摘要：背景:针刺对红细胞免疫和T细胞亚群均有正向调节作用,但其机制尚未完全阐明。目的:探讨免疫系统在针刺治疗相关疾病中的调控作用及可能的机制。设计:随机对照实验研究。地点和对象:实验地点:解放军第四军医大学唐都医院消化内科实验室。将SD大鼠40只随机分成正常对照组、非经非穴组、免疫抑制组、足三里组、足三里+免疫抑制组(n=8)。干预:应用放射免疫法测定脑垂体和外周血P物质放免活性(ir-SP)和血管活性肠肽放免活性(ir-VIP)含量的变化;应用流式细胞仪技术,通过微量全血直接免疫荧光染色法测定外周血T细胞亚群以反映细胞免疫功能;应用红细胞C3b受体-酵母菌花环试验和红细胞-IC花环试验检测红细胞免疫功能。主要观察指标:各组大鼠的ir-SP和ir-VIP含量;T细胞亚群和红细胞免疫功能的变化。结果:足三里组大鼠外周血和脑垂体中P物质(substanceP,SP)、血管活性肠肽(vasoactiveintestinalpeptide,VIP)含量犤外周血SP:(591.83±142.59)pg/L,VIP(92.05±22.11)pg/L;脑垂体SP:(47.00±9.12)pg/L,VIP(308.36±34.16)pg/L、T4(CD4+)细胞百分率犤(65.55±8.42)%犦、C3b受体花环率(RBC-C3bRR)犤(15.88±2.99)%犦、红细胞免疫复合物花环率(RBC-ICR)犤(12.14±1.22)%犦明显高于正常对照组犤(569.36±8.04)pg/L,(20.45?