摘要：根据GenBank公布的致病性鸡大肠杆菌的Ⅰ型菌毛pilA基因和外膜蛋白C基因序列,分别设计了两对引物,并以分离的致病性鸡大肠杆菌基因组为模板,经PCR特异性扩增出pilA基因和ompC基因,基因产物大小为别为549bp和1104bp,与GenBank报道的参考菌株的两个基因序列的同源性为高达98.18%和97.28%。将扩增得到的两个基因分别定向克隆到原核表达载体pET-28a中,得到两个重组质粒pETpilA和pETompC,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,得到重组菌株BL21(pETpilA)和BL21(pETompC),经IPTG诱导后,SDS-PAGE分析分别可见表达的20kD和40.9kD的特异条带;Westernblotting结果表明,两种蛋白可与抗体发生特异性结合,说明其具有良好的免疫原性。将表达的菌毛蛋白和外膜蛋白的菌株分别制成基因工程疫苗,免疫小鼠后,具有很好的保护能力,表明这两株基因工程菌株有望作为鸡致病性大肠杆菌基因工程疫苗的候选生产菌株。

摘要：布鲁氏菌病是一种世界范围流行的细菌性人兽共患传染病,由布鲁氏菌属细菌引起,给畜牧业生产和公共卫生安全带来了极大的威胁。外膜蛋白是布鲁氏菌主要的免疫和保护性抗原,与布鲁氏菌的毒力、免疫调节和胞内寄生等特性密切相关。本文对布鲁氏菌主要外膜蛋白的研究进展予以综述,从而促进对布鲁氏菌抗原特性的理解,为布鲁氏菌新型诊断方法的建立和疫苗设计提供参考。

摘要：本实验对鸭疫里默氏菌(包括6个血清型)、大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和多杀性巴氏杆菌进行了16S rRNA基因片段的扩增和测序,并将测序结果进行了同源性比较和酶切分析；同时根据标准血清2型鸭疫里默氏菌外膜蛋白的基因序列设计一对引物进行扩增。根据16S rRNA的测序结果及EcoRⅠ和HaeⅢ酶切片段分析,可将鸭疫里默氏菌与其它临床症状易混淆的细菌感染相区别,而外膜蛋白基因序列的特异性也为鸭疫里默氏菌的鉴别诊断提供了一种快速、准确的PCR鉴定方法。

摘要：根据Genbank中大肠杆菌K 12外膜蛋白A基因的核苷酸序列设计引物,从禽大肠杆菌O2、O78及它们的融合株O2,78(ChlrNorr)中分别扩增得到外膜蛋白A基因(ompA),进行序列测定及分析发现3个菌株的ompA均由2276nt组成,核苷酸序列完全相同,只有一个大的开放性阅读框(ORF),长1041bp,编码由346个氨基酸组成的前外膜蛋白A(pro OmpA),前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成,相对分子质量为37000.其氨基酸序列也完全相同.从基因水平上证明了禽大肠杆菌O2和O78菌株存在相同的外膜蛋白A抗原.

摘要：根据GenBank中登录的副猪嗜血杆菌(HPS)D15基因鸟枪序列(登录号:NZ_ABKM01000005)设计1对特异性引物,以HPS5型SP毒株DNA为模板,通过PCR方法扩增了D15基因。将其进行T-A克隆,构建pMD18D15质粒并进行序列测定和分析。结果表明,D15基因含有一个2418bp的开放阅读框,编码805个氨基酸,与D15基因参考序列的同源性为99.9%。该HPSD15基因的推导氨基酸序列具有典型Omp85蛋白家族的拓扑结构特征。以pMD18D15质粒为模板,用PCR方法扩增HPSD15基因,并将其克隆到pET-28a(+)中,构建pETD15原核表达质粒,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG诱导重组菌,并用SDS-PAGE和Western-blot检测诱导物。结果表明,pETD15重组表达质粒在大肠杆菌中实现了高效表达,融合蛋白的分子质量约为94ku,融合蛋白能被HPS阳性血清识别,提示该融合蛋白具有反应原性。昆明小鼠和豚鼠免疫试验结果表明,D15重组蛋白具有一定的诱导免疫保护反应的能力。

摘要：目的初步探究布鲁氏菌外膜蛋白16、19脂化型重组蛋白(L16、L19)对人单核细胞白血病细胞系(THP-1细胞)免疫调控因子表达的影响。方法以佛波酯(PMA)活化的THP-1细胞为体外实验细胞模型,采用成组设计,分别将L16、L19与THP-1细胞共培养(L16刺激组、L19刺激组),并以PMA活化的THP-1细胞为对照组。共培养4 h时,分别采用免疫荧光染色(IFS)法和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测L16、L19是否进入细胞。共培养12、24 h时,实时荧光定量PCR法测定干扰素调节因子1(IRF-1)、Ⅱ类主要组织相容性复合物反式激活蛋白(CⅡTA)mRNA表达水平;Western blot法检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)和γ干扰素受体1(IFNGR1)蛋白表达水平。结果共培养4 h时,可见L16、L19分别进入L16、L19刺激组THP-1细胞内。共培养12 h时,L16刺激组IRF-1 mRNA表达水平(0.16±0.15)明显低于对照组(1.00±0.00,P0.05)。Western blot结果显示,共培养12、24 h时,对照组、L16刺激组、L19刺激组INFGR1、Tim-3蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(F=50.92、6.80、148.73、156.57,均P<0.05)。其中,共培养12 h时,L16、L19刺激组INFGR1蛋白表达水平均明显低于对照组,且L19刺激组高于L16刺激组(均P<0.05);而L19刺激组Tim-3蛋白表达水平高于对照组(P<0.05)。共培养24 h时,L16、L19刺激组INFGR1蛋白表达水平均低于对照组,且L19刺激组高于L16刺激组(均P<0.05);而L16刺激组Tim-3蛋白表达水平高于对照组和L19刺激组(均P<0.05)。结论布鲁氏菌L16可以下调THP-1细胞IRF-1、CⅡTA mRNA表达水平;L16、L19均能够下调IFNGR1、上调Tim-3蛋白表达水平。

摘要：对鱼源4种病原弧菌(鳗弧菌、哈氏弧菌、鱼肠道弧菌、秦皇岛弧菌)进行了对常用抗菌类药物的耐药性测定,结果表明,鳗弧菌对青霉素G、苯唑青霉素、氨苄青霉素、克林霉素、万古霉素、杆菌肽等6种常用药物耐药;哈氏弧菌对青霉素G、苯唑青霉素、氨苄青霉素、杆菌肽等4种常用药物耐药;鱼肠道弧菌对苯唑青霉素和杆菌肽等2种耐药;秦皇岛弧菌对青霉素G、苯唑青霉素、氨苄青霉素、克林霉素、杆菌肽等5种耐药。根据已知的弧菌外膜蛋白OmpK序列设计1对简并引物,利用聚合酶链式反应(PCR)方法从4种病原弧菌总DNA中均扩增外膜蛋白OmpK的基因片断,结果鳗弧菌、哈氏弧菌、秦皇岛弧菌及鱼肠道弧菌均扩增得到约800bp DNA片段,但鱼肠道弧菌扩增的片段较模糊。

摘要：目的在大肠杆菌中表达重组1-4型登革病毒外膜蛋白,为研制登革病毒抗体快速检测试剂提供原材料。方法根据基因序列设计、合成引物并经PCR方法扩增1-4型登革病毒部分外膜蛋白基因片段,克隆至表达载体pET30a(+)并在大肠杆菌中诱导表达。小量表达以及纯化后的重组蛋白做SDS-PAGE分析并经WB实验验证其免疫活性。结果酶切消化及电泳结果表明4种重组质粒均构建成功。经IPTG诱导后,4种重组大肠杆菌均可表达相应的重组蛋白。纯化前后的重组蛋白经WB实验表明,4种重组蛋白均能与对应型别的病毒感染者血清反应。结论利用大肠杆菌表达系统,成功表达重组1-4型登革病毒外膜蛋白,4种型别的重组蛋白可被各自血清型的抗体结合,均具有免疫反应活性。

摘要：为建立布鲁菌的快速检测方法,通过引物设计、PCR扩增、表达载体构建、SDS-PAGE和Western-blot分析对牛布鲁菌3种外膜蛋白OMP19、OMP22、OMP28基因进行原核表达,利用亲和层析法纯化3种重组蛋白,将3种重组蛋白混合作为包被抗原,经重复性、灵敏度和特异性试验建立了布鲁菌抗体检测间接ELISA,并对300份牛血清样品进行检测应用,同时使用进口的商品化试剂盒进行平行检测。结果显示,成功构建了p Cold-TF/OMP19、p Cold-TF/OMP22和p Cold-TF/OMP28原核表达载体,诱导后分别表达大小分别为69、74和80 ku的可溶性且具有良好反应原性的重组蛋白r OMP19、r OMP22和r OMP28。基于此3种重组蛋白混合抗原建立的间接ELISA具有良好的重复性和特异性,其灵敏度达1∶1 600。临床样品检测试验结果显示,与进口试剂盒总符合率高达96%(288/300),其中阳性符合率为93.5%(58/62),阴性样品符合率为96.64%(230/238)。将3种重组外膜蛋白联合作为包被抗原进行牛布鲁菌抗体检测,为我国牛布鲁菌病的诊断检测技术相关研究提供了新的思路和参考。

摘要：根据已发表的外膜蛋白基因核苷酸序列设计一对特异性引物,应用PCR方法扩增出禽巴氏杆菌5:AC48-1株的ompH全长片段,将ompH进行T-A克隆、序列测定和分析。结果表明,ompH全长1597bp,含有一个1056bp的开放性阅读框架(ORF),编码352个氨基酸,前20个氨基酸组成信号肽。与已知的15个血清型及疫苗株CU的ompH的核苷酸及其推导的氨基酸序列比较,核苷酸同源性在51.5%～98.7%之间,氨基酸同源性在39.3%～98.7%之间。氨基酸多序列比较显示,血清型特异性抗原表位位于60～80位和200～220位氨基酸处。