摘要：基于多肽设计合成技术建立了一个快速、高通量、自动化的多聚抗原肽微阵列分析平台.选取人巨细胞病毒(HCMV)的包膜糖蛋白B和被膜碱性磷酸蛋白PP150,幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶(Ure)β亚基为靶蛋白,分析筛选出优势线性表位序列,Fmoc法固相合成上述线形表位的多聚抗原肽(MAPs),高效液相色谱仪(HPLC)纯化后,用机器人点样仪按一定的矩阵排列形式点印至硝酸纤维素膜上,2%的小牛血清封闭,塑料壳体封装制备成MAPs微阵列成品.随机抽样经质控血清鉴定后用于随机人群血清试验并与ELISA检测结果进行比较.筛选、合成并鉴定出4条MAPs.用该MAPs微阵列检测的Hp和HCMV阳性及阴性质控血清结果均与质控血清情况相符,120份随机血清检测结果与用重组抗原和病原微生物裂解物抗原包被的ELISA法检测结果相比具有较好的一致性,Ure-1、Ure-2和PP150三种MAPs的灵敏度和特异性均大于90%.MAPs微阵列片间质控试验结果变异系数小于7%,示重复性良好.MAPs微阵列是一种快速、高通量、自动化的分析平台,该平台在预防性疫苗的开发和蛋白质组学的研究中具有较大的前景.

摘要：目的基于可重复利用的免疫磁珠,建立一种简捷快速的特异性抗体检测方法。方法设计人类巨细胞病毒(humancytomegaloviruses,HCMV)PP150蛋白的抗原表位,并合成8分枝多聚抗原肽PP150-8MAPs。将PP150-8MAPs以共价结合形式包被于DynabeadsM-450Tosylactivated磁珠表面,制备特异性免疫磁珠。用PP150-8MAPs免疫Balb/c小鼠制备抗此抗原表位的标准抗血清。应用免疫磁珠检测标准抗血清中的抗体,优化检测条件。在抗体检测反应结束后,洗脱抗体-二抗复合物,再生后的免疫磁珠重复用于标准抗血清样品的检测分析,并分析免疫磁珠可重复利用的次数。结果制备免疫磁珠时,PP150-8MAPs的最佳包被量为100μg/mL,包被效率为79%。用PP150-8MAPs免疫小鼠后,得到的抗血清滴度可达到112800。用免疫磁珠法检测小鼠标准抗血清,免疫磁珠可重复进行20次以上的检测分析。结论基于酶联免疫检测方法,包被抗原的免疫磁珠可重复应用于血清样品中特异性抗体的检测分析。此实验为建立一种新的可重复检测的高效清样品中特异性抗体的检测分析。此实验为建立一种新的可重复检测的高效免疫磁珠抗体分析方法奠定了基础,在基础研究与临床检测中具有广泛的应用前景。