摘要：目的从大蓟根中分离抗结核杆菌活性成分,并初步探讨其抗结核杆菌的作用机制。方法采用活性跟踪分离方法,从大蓟根中分离抗结核杆菌活性成分,运用棋盘试验法研究大蓟活性成分与异烟肼、利福平和吡嗪酰胺的联合抗菌作用,运用分子对接软件初步探讨活性单体成分与KatG酶的亲和力,采用qRT-PCR法考察活性化合物干预结核分枝杆菌后KatG酶基因的相对转录量,采用紫外分光光度法测定KatG酶的活力,采用扫描电镜观察结核杆菌的形态。结果从大蓟根分离得到具有抗结核杆菌活性的化合物HP01,鉴定为槲皮素。槲皮素抑制结核杆菌的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值为160μg/mL。槲皮素与吡嗪酰胺存在相加作用,与异烟肼、利福平无拮抗作用。分子对接显示,槲皮素与KatG酶具有较强的亲和力。酶活力测试结果表明槲皮素对结核杆菌KatG酶具有抑制作用。结核杆菌被槲皮素处理后其KatG基因转录出现明显的补偿上调。扫描电镜结果显示,槲皮素能破坏结核杆菌细胞壁。结论大蓟抗结核杆菌的活性成分为槲皮素,槲皮素能够抑制结核杆菌KatG酶活性,导致结核杆菌结构破坏,从而杀死结核杆菌。在设计新的抗结核组合用药方案时,可以考虑加入槲皮素。

摘要：[目的]利用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP),建立快速鉴别大蓟混伪品飞廉和魁蓟的方法。[方法]通过比对ITS基因序列,分别筛选飞廉、魁蓟的限制性内切酶位点并设计鉴别引物。考察PCR反应的退火温度、循环数及不同酶的适用性,对酶切反应时间和酶切底物量进行优化。同时对该方法适应性及掺伪比例的专属性、稳定性进行考察。[结果]当退火温度为58~60℃、循环数为30个时,样品均能扩增出一条379 bp的DNA条带。底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应120 min时,ZraI酶将飞廉切割成120 bp和259 bp两条DNA条带;DNA底物为8μL、酶切温度为37℃、酶切反应60 min时,ApaLI酶将魁蓟切割成126 bp和253 bp两条DNA条带。[结论]试验建立的PCR-RFLP方法能够准确地鉴别大蓟混伪品飞廉、魁蓟,避免此类药材的混用,以保证临床用药安全。

摘要：目的利用响应面分析法对大蓟炮制工艺进行优化。方法在单因素实验基础上选取实验因素与水平,根据中心组合(Box-Benhnken)实验设计原理采用三因素三水平的响应面分析法,确定各工艺条件的影响因素,以HPLC测定大蓟黄酮的主要成分变化为响应面和等高线,优选出大蓟炒炭的最佳工艺。结果大蓟炮制的最佳工艺为炮制时间13 min、炮制温度(310±10)℃、投药量100 g。结论响应面方法是一种有效的统计技术,它是利用实验数据,通过建立数学模型来解决受多种因素影响的最优组合问题,应用于中药炮制工艺优选方面非常有意义。

摘要：目的:通过正交实验建立大蓟炮制的最佳工艺。方法:以外观性状、凝血时间、浸出物三者为指标,选择大蓟炒炭温度和时间以及二者的交互作用三个因素,用L9(34)正交设计表,采用直观分析和方差分析的方法对大蓟的炒炭工艺进行考察。结果和结论:确定大蓟最佳炮制工艺为190℃炒11 min。

摘要：目的:建立HPLC法测定炮制后大蓟中柳穿鱼苷元的含量,并以其含量为指标,优选大蓟最佳炮制方法。方法:色谱柱:Hypersil ODS2柱(4.6 mm×250 mm,5μm);检测波长:330 nm;流动相:甲醇-水(55:45);柱温:45℃;流速:1.0 mL/min;进样量:10μL;以柳穿鱼苷元的含量为指标,以大蓟炮制的温度和时间作为影响因素,对大蓟的炮制工艺进行优选。结果:柳穿鱼苷元在4～400μg/mL(r=0.9998,n=6)的范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)为99.03%,RSD为1.62%。确定大蓟最佳炮制工艺为190℃,烘制10 min。结论:该法简便快速,重复性好,准确度高,为大蓟的合理炮制提供参考。