摘要：禽源呼肠孤病毒是一类重要的禽类病原体,能引起感染家禽和水禽法氏囊、脾和胸腺等器官严重受损,造成免疫抑制,且易与其他病原体混合感染,极大地阻碍了全球养禽业的健康发展。天然免疫应答具有反应迅速、不针对特定抗原且作用范围广的特性,是当前免疫学和微生物学的研究热点。适应性免疫应答能够排除体内特异性抗原异物,抵抗相同病原体的再次入侵,是预防接种的免疫学基础。本文将从禽源呼肠孤病毒诱导宿主天然免疫应答和适应性免疫应答两方面,阐述此类病毒感染对宿主免疫系统的影响,以期为靶向病毒和宿主免疫反应的疫苗设计提供参考依据。

摘要：目的通过研究高糖和血管紧张素Ⅱ（AngII）环境下人肾小管上皮细胞Toll样受体4（TLR4）表达及其相关的炎性和纤维化因子的变化及TLR4siRNA的干扰作用，从天然免疫角度探讨糖尿病。肾病（DN）发病机制和靶向干预措施。方法设计并合成3对针对人TLR4基因的特异性siRNA片段，以带有红色荧光的BLOCK-ITAlexaFluor作为阴性对照，荧光显微镜下观察细胞转染效率，实时定量PCR检测TLR4mRNA的表达变化。确定TLR4siRNA基因沉默效果较佳后再进一步实验。实验分2部分进行，第1部分细胞分3组：正常糖对照组（NG，5．5mmol／L葡萄糖）、甘露醇组（M，5．5mmol／L葡萄糖＋19．5mmol／L甘露醇）和高糖组（HG，25mmol／L葡萄糖），初步验证高糖、高渗的影响。第2部分7组：NG组、HG组、AngⅡ（10-7mmol／L）组、AnglI＋空载体对照组、HG＋空载体对照组、AnglI＋TLR4siRNA转染组及HG＋TLR4siRNA转染组。采用实时定量PCR法检测TLR4、髓样分化因子88（MyD88）、热休克蛋白47（HSP47）mRNA的表达；Western印迹法检测TLR4、MyD88、HSP47、核因子KB（***）、Ⅳ型胶原蛋白（ColⅣ）的蛋白表达；ELISA法检测细胞上清液单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、白细胞介素6（IL-6）的水平。结果与NG组比较，甘露醇组TLR4、MyD88蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0．05）；HG、AngⅡ组TLR4、MyDS8、HSP47mRNA及TLR4、MyD88、***、HSP47、ColⅣ蛋白表达均显著上调（p〈0．01），细胞上清液MCP-1、IL-6水平亦升高（P〈0．01）；TLR4siRNA转染后，与HG组或AngU组相比上述指标均显著下调（P〈0．01）；空载体转染后，与HG组或AngⅡ组相比上述指标差异无统计学意义（P〉0．05）。结论高糖或血管紧张素Ⅱ均刺激人肾小管上皮细胞TLR4信号并引起天然免疫应答，导致炎性和纤维化因子上调。特异性基因沉默可通过阻断由高糖或AngⅡ诱导的TLR4信号，下调炎性及纤维化因子释放。TLR4信号可能是高糖或高肾素环境下人肾小管上皮细胞天然免疫应答的共同关键通路。

摘要：目的探讨高糖条件下肾小球系膜细胞Toll样受体4(TLR4)及其信号通路中下游因子MyD88、核因子-κB(NF-κB)以及炎性因子的表达变化,论证高糖环境下血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)与TLR4的对话关系,以期阐明TLR4信号通路在糖尿病肾病(DN)发病机制中的作用。方法设计3对针对大鼠TLR4基因的特异性siRNA片段以及带有绿色荧光的阴性对照,筛选出转染效率最高的siRNA,用于后续实验。第1部分实验在高糖的基础上分别加入AngⅡ、TLR4siRNA、血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(ARB)、阴性对照siRNA,探讨高糖对各组细胞TLR4、MyD88及NF-κB表达的影响;第2部分实验在AngⅡ的基础上分别加入高糖、TLR4siRNA、ARB、阴性对照siRNA,探讨AngⅡ对各组细胞TLR4,MyD88及NF-κB表达的影响。采用荧光定量PCR检测各组TLR4、MyD88 mRNA的表达,Western blot检测TLR4、MyD88及NF-κB蛋白表达水平的变化,ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的表达情况。结果高糖及AngⅡ都可以上调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88mRNA的表达水平(均P<0.05),也可上调IL-6及MCP-1的表达(均P<0.01)且二者协同刺激情况下上调更明显。siRNA干扰及ARB可下调TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及TLR4、MyD88 mRNA的表达,下调IL-6及MCP-1的表达,与高糖及AngⅡ组相比差异有统计学意义(均P<0.05)。结论高糖环境和AngⅡ刺激系膜细胞TLR4/MyD88信号通路激活,特异性TLR4siRNA基因可以部分阻断由高糖及AngⅡ诱导的TLR4信号的激活,厄贝沙坦也可部分阻断TLR4信号通路,高糖和AngⅡ共刺激增强由TLR4介导的天然免疫炎症效应,TLR4/MyD88信号通路在此效应中扮演重要角色;TLR4siRNA基因沉默技术为寻找DN的治疗方法提供了新思路,也为临床上使用ARB延缓DN进程提供了新的理论依据。