摘要：本文利用荧光光谱和园二色光谱研究了新天花粉蛋白的盐酸胍去折叠过程。结果显示 :新天花粉蛋白的盐酸胍去折叠是一个只包含天然蛋白和变性终态的二态过程 ,与已经报道的天花粉蛋白的盐酸胍去折叠过程不同。

摘要：本文利用FTIR光谱技术和计算机辅助解析技术 (二阶导数、去卷积和曲线拟合 )研究了天花粉蛋白的热诱导去折叠过程。结果表明 :在 2 5～ 85℃温度范围内 ,天花粉蛋白的热去折叠是一个不可逆的分子间聚集的过程 ;二级结构随温度的变化暗示了折叠中间体的存在。

摘要：利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）技术，对天然天花粉蛋白（ｎＴＣＳ）基因在Ｔｙｒ１４和Ａｒｇ２２两个保守残基处同时进行定点突变，即Ｔｙｒ１４变成Ｐｈｅ，Ａｒｇ２２变成Ｌｅｕ，然后克隆到ｐＥＴ－８ｃ高效表达载体上，构建成重组质粒ｐＥＴＹ１４Ｆ／Ｒ２２Ｌ．经序列分析，定点突变的结果与预先设计的完全一致，突变后的天花粉蛋白命名为Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ．将ｐＥＴＹ１４Ｆ／Ｒ２２Ｌ转化到Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３，ｐＬｙｓＳ）中，进行表达．经ＣＭ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ柱纯化，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ鉴定，纯度可达９０％．ＲＩＰ活性测定显示，Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ的活性比ｎＴＣＳ降低了７．５倍，活性变化不显著，因此，ＴＣＳ的Ｔｒｙ１４和Ａｒｇ２２对维持其活性部位构象并不是必需的．但由于Ｙ１４Ｆ／Ｒ２２ＬＴＣＳ在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达量与ｎＴＣＳ相比明显下降，因此，Ｔｙｒ１４和Ａｒｇ２２可能与ＴＣＳ翻译后的折叠有关．

摘要：α-天花粉磺白(α-Trichosanthin,缩写α-TCS),通常称之为天花粉蛋白,是从葫芦科植物栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)块根中分离纯化的一种用于中期引产、抗早孕和治疗滋养层恶性肿瘤的活性蛋白。分子生物学研究指出α-TCS属于Ⅰ型核糖体失活蛋白,它对真核细胞的28S rRNA的4324位腺嘌呤N-糖苷键有特异的酶切活力,从而损及蛋白质生物合成的肽链延伸因子EF2与60S核糖体亚基间的相互作用,最终导致蛋白质合成的中断。

摘要：目的:构建天花粉蛋白(TCS)突变体,并将其在原核系统内进行表达及纯化。方法:借助计算机预测TCS可能的抗原决定簇(YFF81-83)并设计出适当的突变引物。以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增TCS突变体全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态***5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序。将所获阳性重组质粒转化感受态***21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行W estern b lot鉴定。最后用N i-NTA亲和层析柱对所获突变体蛋白进行纯化。结果:成功构建了TCS突变体(TCSYFF81-83ACS),并获得了突变体蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达,经N i-NTA亲和层析柱纯化后,产生出大量均一的TCS突变体蛋白。结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了新的途径。

摘要：目的:构建具有抗HIV活性的突变型天花粉蛋白(TCS),并将其在原核系统内进行表达与纯化。方法:借助计算机预测TCS分子上可能的抗原决定簇(YFF81-83和KR173-174),并依此设计适当的突变引物;以栝楼基因组DNA为模板,利用重组PCR技术扩增双突变型TCS全长基因,经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后与原核表达载体pRSET-A连接,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒进行酶切鉴定及测序;将所获阳性重组质粒转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,对表达产物进行Western印迹鉴定;用Ni-NTA亲和层析柱对所获突变型TCS蛋白进行纯化。结果:构建了突变型TCSYFF-KR,并获得了该蛋白在大肠杆菌内的可溶性高效表达;经Ni-NTA亲和层析柱纯化,产生大量均一的突变型TCS蛋白。结论:TCS的定点突变及其在原核系统内的表达,为基因工程方法改造TCS提供了一条新途径。

摘要：加强对生物分离工程综合实验的设计,是强化学生系统性认知能力、工程能力的重要环节。根据现代生物分离工程的特点,以天花粉蛋白为模型,提出了其提取、分离和纯度检测的操作单元及相应的实验内容,并应用于研究生的实验教学,达到了预期的设计要求。

摘要：2005年10月12日上午9时, 载有费俊龙、聂海胜两名航天员的“神舟”六号飞船自酒泉卫星发射中心升空,17日凌晨4时33分,在经过115小时32分钟的太空飞行,完成中国真正意义上有人参与的空间科学实验后,“神舟”

摘要：目的利用蛋白重组技术和PEG定点修饰技术,制备具有肿瘤微环境双重响应性的智能型蛋白毒素给药系统。方法利用基因重组技术,在天花粉蛋白(trichosanthin,TCS)的C端引入天冬酰胺内肽酶(legumain)的底物天冬酰胺肽段和半胱氨酸残基,将所构建的突变体转化到大肠杆菌中表达目的蛋白并纯化。进一步将重组蛋白末端的半胱氨酸与具有巯基反应性的m PEG-Hz-Mal偶联合成TCS-Asn10-Hz-PEG,采用弱阳离子交换柱纯化TCS-Asn10-Hz-PEG,并在体外考察了TCS-Asn10-Hz-PEG的酸敏感性和酶敏感性。结果成功制备、分离和纯化得到了TCS-Asn10-Cys,完成了m PEG-Hz-Mal与TCS-Asn10-Cys的定点偶联,得到智能型蛋白毒素给药系统TCS-Asn10-Hz-PEG。TCS-Asn10-Hz-PEG在体外p H 5.6的介质中和天冬酰胺内肽酶的作用下,能够水解或酶解释放出TCS,具有酸敏感特性和酶敏感特性。结论本实验设计的蛋白毒素给药系统,具有酸敏感和酶敏感双重响应特性。