摘要：以天麻为研究对象,采用响应面法优化天麻蛋白的提取条件。在单因素水平测定的基础上,选取提取温度、提取时间、盐含量作为影响因素,应用Box-Behnken中心组合进行3因素3水平的试验设计,以对白色念珠菌的抑菌率作为响应值,进行响应面分析。将最佳工艺条件下得到的天麻蛋白浓缩液梯度稀释,进行量效和时效曲线的测定。结果表明,天麻蛋白的最佳提取条件为:提取温度77℃,提取时间4 h,盐含量0.8%,在此工艺条件下进行3次验证试验,对白色念珠菌的平均抑菌率为88.23%,与预测值(89.08%)接近。天麻蛋白质量浓度为1 g/m L,蛋白含量0.596 g/m L,与白色念珠菌作用5 min时,抑菌率在90%以上。响应面法优化的天麻蛋白浓缩液对白色念珠菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌具有很强的抑菌活性,抑菌圈直径分别为20.89,22.02,22.71,16.73 mm。

摘要：目的分析1987-2023年我国天麻相关专利、科技成果及文献,探究天麻产业发展现状及研究热点。方法检索IncoPat、国家知识产权局专利检索系统、中国知识资源总库(CNKI)、国家科技成果转化项目库和信息服务平台等多个数据库,运用统计学方法对1987-2023年我国天麻专利申请趋势、地域、机构、领域及科技成果登记时间、机构、成果分类等进行整理分析。并对近年发表的300篇天麻相关文献进行关键词聚类可视化分析。结果共收集到申请专利2558件,其中发明专利1722件(已授权446件),实用新型466件,外观设计370件。以辅助改善睡眠、维持血压平衡等功效的专利数量多,且贵州和云南两省专利申请及授权量较高。天麻科技成果共214项,主要集中于医药健康和栽培技术领域。天麻研究热点多见于天麻素药理作用和保健功能及天麻多糖的提取分离等领域。结论我国贵州和云南天麻产业化发展比较成熟,保健食品及活性成分药理作用为当前研究热点,天麻在化妆品市场尚有广阔前景。

摘要：依据天麻(***)抗真菌蛋白GAFP_1的N端部分氨基酸序列设计简并引物,通过RACE(快速分离cDNA末端)的方法扩增得到GAFP_1全长cDNA。该cDNA包含一个编码171个氨基酸的ORF,推导的多肽序列与测得的蛋白质部分序列相同;在5′端有一个长为55bp的5′非编码区;终止密码子下游有一个141bp长的3′非编码区,其中含有两个加poly(A)信号及长度为26个腺苷酸的poly(A)。经检索发现该推导蛋白序列与火烧兰(Epipactishelloborine)和二叶兰(Listeraovata)的甘露糖结合蛋白以及雪花莲(Galanthusnivalis)中的甘露糖结合凝集素具有很高同源性。

摘要：以天麻素的含量及出膏率为指标,用正交设计和单因素比较法对天麻的提取工艺进行优选,结果表明天麻的最佳提取工艺为:用10倍量的70％乙醇提取3次,每次2 h。

摘要：从新鲜天麻次生块茎中将天麻抗真菌蛋白(GAFP)提纯,然后测得其N端的30个氨基酸,根据氨基酸序列设计了一段30bp的核酸探针,从cDNA文库中筛选到了编码该蛋白的基因,为这一新型蛋白在抗真菌基因工程中的应用奠定了基础。

摘要：目的:探索鲜天麻干制的最佳加工条件。方法:以天麻素含量为指标,在单因素实验的基础上,采用正交设计法,筛选鲜天麻干制的最佳加工条件。结果:鲜天麻采收后当天洗净泥沙,常压蒸煮25 min,切片,105℃烘干,HPLC法测得天麻素的含量达0.532%,比传统加工法(0.371%)提高了43.40%。结论:不同的加工条件对天麻素含量影响较大。

摘要：基于天麻转录组数据,设计特异性引物,克隆天麻二羧酸-三羧酸载体蛋白编码基因GeDTC,并利用ExPASy、ClustalW、MEGA等软件对其进行生物信息学分析,利用马铃薯遗传转化体系,获得阳性转基因植株和微型薯,并对微型薯块茎的大小、质量、有机酸和淀粉含量等农艺性状进行了检测和分析,对GeDTC基因功能进行初步研究。结果显示,GeDTC开放阅读框(open reading frame)全长981 bp,编码326个氨基酸残基,相对分子质量为35.01 kDa。预测GeDTC蛋白的理论等电点为9.83,不稳定系数为27.88,亲水性平均指数为0.104,属于稳定的亲水性蛋白。GeDTC蛋白存在1个跨膜结构,无信号肽,定位于线粒体内膜。系统进化树显示,GeDTC与其他种类植物DTC蛋白之间具有较高的同源性,其中与铁皮石斛DcDTC(XP_020675804.1)同源性最高,为85.89%。运用双酶切方法构建GeDTC过表达载体pCambia1300-35Spro-GeDTC,并通过农杆菌介导转化法获得了马铃薯转基因植株,移栽收获的转基因株系微型薯和野生型株系相比体积更小,质量更轻,有机酸含量低,淀粉含量无显著差异。初步推测天麻GeDTC基因可能为三羧酸的外排通道并参与调控块茎的发育,为深入阐明天麻块茎形成的分子机制奠定了基础。

摘要：目的利用响应面法优化天麻Gastrodiae Rhizoma产地"发汗"加工工艺。方法以天麻中天麻多糖、天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、B、C、E 7种成分为指标成分,AHP层次分析法确定各指标成分权重,结合单因素实验,采用Box-Behnken设计法对蒸制时间、"发汗"时间和"发汗"次数3个因素进行考察,综合评分作为最终察指标进行天麻"发汗"加工工艺优化研究。结果最佳"发汗"加工工艺为蒸制20 min,60℃烘至麻体发软时,"发汗"9 h,取出摊开晾干麻体表面水分,再次"发汗"9 h,以60℃烘干。结论响应面法优选的天麻"发汗"加工工艺,稳定性好,可操作性强,可为天麻产地"发汗"初加工提供科学依据和技术参考。

摘要：目的克隆天麻糖基转移酶基因(glycosyltransferase,Ge GT1)的全长cDNA序列,进行序列分析和原核表达分析,并探究该基因在天麻不同器官中的表达规律。方法在天麻转录组数据库中通过注释和比对,用PrimerPremier5.0软件设计基因特异性引物。通过反转录聚合酶链式扩增(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)方法从天麻块茎中克隆得到Ge GT1全长cDNA序列,利用生物信息学软件预测基因编码蛋白的特征;利用Clustal W和MEGA6.06软件构建GeGT1的系统进化树;构建原核表达载体pET-28a-GeGT1,转化至大肠杆菌Transetta(DE3)进行诱导表达;通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)技术分析基因表达模式。结果Ge GT1基因开放阅读框(open reading frame,ORF)全长1503 bp,编码500个氨基酸,蛋白相对分子质量为55494.33,理论等电点为5.51,为稳定的酸性蛋白。襄襆襈襌襐襒襔襠襢襦襨襶襼覊覌覚覜覦覨覮覰覸覺覼覾览觊角觔觜膜结构域,无信号肽,为非分泌蛋白。通过序列同源性分析,GeGT1与铁皮石斛具有较高的同源性。系统进化树分析证实了兰科植物糖基转移酶基因的同源性。SDS-PAGE结果显示,诱导表达蛋白为63000,与预期蛋白大小一致。基因表达结果显示,Ge GT1基因的表达水平在花中最高,其次是块茎、茎。结论首次克隆并分析了Ge GT1基因,建立了原核表达体系,为进一步研究天麻活性成分合成的分子机制奠定基础。

摘要：该研究基于第二代测序技术建立了天麻的基因文库,筛选微卫星序列,并对微卫星位点的类型、丰度、长度、偏好性等进行了分析与比较;并为60条重复次数高的微卫星序列设计了引物,运用4个种群80个样本进行了PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测。结果表明:(1)天麻基因组测序得到61 048条基因序列,检测出微卫星位点12 107个,其中二核苷酸重复最多、长度变异大。(2)设计的60对微卫星引物中的20对能扩增出清晰条带且有多态性,每个位点的复等位基因数(N_a)在4~14之间,平均为8.40;多态性信息含量(PIC)平均为0.77。该研究开发的天麻微卫星分子标记为开展天麻遗传学研究及种质资源鉴定等工作奠定了基础。