摘要：目的观察双氢青蒿素(DHA)对经转化生长因子-β1(TGF-β1)孵育的来源于人子宫壁的内膜组织中的间质细胞(ESCs)数目和活力的变化。方法2018年1月1日—6月1日,收集人正常的子宫内膜组织并分离出ESCs。实验设计分为4组。正常组:加入不含血清的培养液;TGF-β1组:在正常组的基础上加10 ng/mLTGF-β1;DHA组:在正常组的基础上加100 ng/mLDHA;TGF-β1+DHA组:在TGF-β1组的基础上加100 ng/mLDHA。通过噻唑蓝法检测每组细胞的增殖变化;用酶联免疫吸附(ELISA)法判定每组细胞孵育液中Ⅰ型胶原和纤黏连蛋白的水平。免疫印迹(Western blot)评估胞质内的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的含量。结果正常组和DHA组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05);与正常组相比,TGF-β1组的ESCs数目增加,细胞分泌Ⅰ型胶原[(0.7334±0.0073)ng/L]与纤黏连蛋白[(0.6834±0.0081)ng/L]的量增多,细胞内MMP-9含量(0.471±0.030)降低,然而TIMP-1的含量(0.692±0.010)升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与TGF-β1组相比,TGF-β1+DHA组的ESCs数目减少,细胞分泌Ⅰ型胶原[(0.6543±0.0101)ng/L]和纤黏连蛋白[(0.5549±0.0092)ng/L]的量降低,细胞内MMP-9含量(0.593±0.026)升高,而TIMP-1含量(0.543±0.013)降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ESCs在TGF-β1的作用下数目增多且分泌功能活跃,而DHA能抑制TGF-β1对子宫内膜间质细胞的这种作用。

摘要：目的分析枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对过氧化氢刺激引起的人子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cells,ESCs)凋亡的影响以及对同源物磷酸脂酶基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome 10,PTEN)/蛋白激酶(protein kinase,AKT)信号通路蛋白的激活情况。方法体外培养传代人ESCs,实验设计对照组、LBP组、过氧化氢组以及治疗组共4组。对照组:常规培养液;LBP组:常规培养液+100 mg/L的LBP;过氧化氢组:常规培养液+100μmol/L的过氧化氢;治疗组:提前加入100 mg/L的LBP作用24 h,再加入100μmol/L的过氧化氢,观察细胞在形态方面的改变。细胞活力检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)分析各组细胞的存活率,流式细胞技术测量细胞的凋亡率,比色法测量4组细胞中丙二醛(malondiald ehyde,MDA)的含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活力,蛋白免疫印迹分析细胞中B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 Associated X,Bax)、PTEN、AKT以及磷酸化的AKT(p-protein kinase,p-AKT)的含量。结果LBP组和对照组相比,细胞形态、存活率、凋亡率以及细胞中的Bcl-2、Bax、PTEN、p-AKT和AKT比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。过氧化氢组和正常组比较,细胞呈圆形,脱落多而贴壁少;存活率[(51.37±3.28)%]降低,而凋亡率[(53.42±2.37)%]升高;MDA含量[(4.56±0.70)mmol/L]上升而SOD活力[(9.39±0.72)U/L]下降,胞质中Bcl-2(0.148±0.020)和p-AKT(0.457±0.053)含量降低,Bax(1.076±0.036)和PTEN(0.538±0.049)含量升高(均P<0.05)。治疗组和过氧化氢组比较,细胞伸展且有短突起,脱落少而贴壁多;存活率[(87.72±4.52)%]升高,而凋亡率[(25.02±2.76)%]降低;MDA含量[(2.14±0.47)mmol/L]下降而SOD活力[(16.60±1.25)U/L]上升,胞质中Bcl-2(0.852±0.051)和p-AKT(0.942±0.095)含量上升,Bax(0.202±0.014)和PTEN(0.283±0.022)含量下降(均P<0.05)。结论LBP能明显拮抗过氧化氢刺激导致的细胞存活率降低及凋亡率升高,降低氧化应激产物,这与激活PTEN/AKT信号通路密切相关。

摘要：背景:富血小板血浆可促进薄型子宫内膜细胞的增殖,但存在剂量难以控制、取样困难等问题。微流控芯片具有高通量、低消耗、操作简便等优点,为模拟子宫内膜细胞在体微环境提供了新途径。目的:利用三通道微流控芯片构建富血小板血浆促进子宫内膜细胞增殖的研究模型。方法:从1名女性外周静脉血中提取富血小板血浆。采用含不同浓度[0%(对照),0.5%,1%,2%]富血小板血浆的无血清细胞培养基培养人子宫内膜间质细胞,采用划痕实验检测细胞迁移,CCK-8法检测细胞增殖。利用聚二甲基硅氧烷胶制备微流控芯片,该微流控芯片设计有3个通道,中间通道为细胞外基质水凝胶通道,左右两侧分别为人子宫内膜间质细胞及富血小板血浆通道,3个通道之间保存有可以相互沟通以及实现物质交换的面积,实验组两侧通道分别加入人子宫内膜间质细胞(绿色荧光蛋白GFP标记)和含0.5%富血小板血浆的无血清培养基,对照组两侧通道分别加入人子宫内膜间质细胞(绿色荧光蛋白GFP标记)和无血清细胞培养基,共培养48 h后,采用Ki67免疫荧光染色观察细胞增殖与迁移。结果与结论:(1)细胞划痕实验和CCK-8检测结果显示,与对照组相比,0.5%,1%,2%浓度的富血小板血浆可促进人子宫内膜间质细胞的迁移与增殖(P <0.05),并且0.5%浓度富血小板血浆的促进细胞迁移与增殖作用强于其他2个浓度(P <0.05);(2)Ki67免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,实验组人子宫内膜间质细胞的增殖和迁移能力更强;(3)实验证实通过三通道微流控芯片可以模拟子宫内膜细胞的微环境,同时利用该系统验证了富血小板血浆可显著促进子宫内膜间质细胞的增殖与迁移。