摘要：背景:脑干孤束核是内脏痛信息向高位脑中枢传递的一个关键的中继站。形态学证据表明,大鼠孤束核中分布有大量的神经激肽B受体(neurokininBreceptors,NKR)。然而,孤束核中表达NKR的神经元是否参与内脏痛信息的传入与整合目前仍不清楚。目的:阐明孤束核中表达NKR的神经元在脑肠通路中传递内脏痛信息中的作用。设计:随机的对照实验性研究。地点和对象:12只SD大鼠购自第四军医大学实验动物中心。大鼠均为雄性,体质量220～250g,用随机数字表法分为实验组和对照组,每组各6只。干预:6只雄性大鼠吸入麻醉后,将2mL50g/L的乙酸经导管注入大鼠升结肠内,20s后再注入5mL生理盐水冲洗结肠。对照组大鼠则注射等体积的磷酸缓冲液(0.01mol/L)。24h后大鼠开胸经心脏灌流40g/L的甲醛。灌注毕后取出鼠脑修块,然后将含有孤束核的脑块在300g/L的蔗糖溶液中浸泡过夜,冰冻切片机切片。用抗FOS抗体和抗NKR抗体行免疫组化双重标记染色。免疫组化由第一作者完成,动物模型构建由第二作者完成,第三及第四作者负责免疫组化结果评估。主要观察指标:孤束核中NKR和FOS蛋白的共表达。结果:孤束核各个亚核中均有大量的NKR免疫阳性的神经元,但在内侧亚核和联合亚核中尤其浓密。阳性产物分布在细胞膜和树突上;胃肠道给予甲醛刺激后,表达FOS蛋?

摘要：目的了解小发夹核糖核酸(short hairpin ribonucleic acid,shRNA),在小鼠孤束核抑制血管紧张素Ⅱ1型受体(angiotensin Ⅱ receptor 1,AT1R)信使核糖核酸(messenger RNA,mRNA)表达的有效性和特异性。方法8只雄性C57BL小鼠作为动物模型,选择脑干孤束核作为研究靶点,用微量注射方法,将携带shRNA的腺病毒注入脑干右侧孤束核,左侧同时注射对照腺病毒。正常饮食喂养10d后宰杀,用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干AT1aR mRNA表达的情况,用配对的t检验进行统计学分析。结果注入携带针对AT1aR mRNA的shRNA腺病毒后,AT1aR mRNA的表达量由1.81μCi/mg下降为0.71μCi/mg,降低了61%±7%,差异有统计学意义(P0.05)。结论本所设计的shRNA,能够在活体上有效和特异地抑制AT1aR mRNA表达;脑干孤束核的解剖特点适宜作为活体上评价小片段RNA干扰AT1R mRNA表达效率的位置。

摘要：目的探讨所设计针对血管紧张素Ⅱ1型受体（angiotensin Ⅱ receptor 1，AT1R）不同亚型的小发夹RNA（short hairpin ribonucleic acid，shRNA）的腺病毒注入小鼠脑干孤束核（nucleus tractus solitarius，NTS）相应受体mRNA表达抑制的有效性和特异性。方法选择雄性C57BL小鼠作为动物模型，将携带针对各自受体的shRNA腺病毒注入脑干右侧NTS部位，左侧注射对照用的腺病毒。正常饮食喂养10d后处死，采用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干NTS的AT1aR mRNA和AT1bR mRNA表达情况。结果注入携带针对AT1aR的shRNA腺病毒后，AT1aR mRNA表达量的同位素亮度平均由1．81μCi／mg下降为0．71μCi／mg，降低了（61．2±6．8）％，P〈0．01；AT1bR mRNA的表达则不受影响（P〉0．05）。注入携带针对AT1bR的shRNA腺病毒，AT1bR mRNA表达量的同位素亮度平均由10.28μCi／mg下降到4．97μCi／mg，降低了（51．6±5．2）％，P〈0．01；而AT1aR mRNA的表达不受影响（P〉0．05）。结论所设计的shRNA，可以特异地抑制相应各自亚型受体mRNA的表达，而对另一个亚型受体mRNA表达未发生交叉影响。

摘要：目的针对小鼠血管紧张素Ⅱ 1型受体(Angiotensin Ⅱ Receptor 1,AT1R)两亚型之间无工具药区分的现状,研究应用RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术来区分两种亚型受体功能的可行性。方法选择雄性C57BL小鼠作为动物模型,通过在脑干孤束核(nucleus tractus solitarius,NTS)注射携带短发夹RNA(shor thairpin RNA,shRNA)腺病毒的方法,喂养10d后取出脑干组织做标本,使用原位杂交的方法检测每只小鼠脑干NTS部位AT1R mRNA两种亚型的表达情况,同时使用免疫组织化学的方法显示受体蛋白表达的情况。结果注入携带针对AT1aR mRNA的shRNA腺病毒后,AT1aRmRNA的表达降低了(61.2±6.8)%(P0.05);改用AT1bR mRNA相应的shRNA腺病毒,AT1bRmRNA的表达降低了(51.6±5.2)%(P0.05)。用免疫组织化学显示AT1R蛋白表达情况,发现两种情况下表达均出现不同程度的下降。结论所设计的针对不同亚型AT1R的shRNA,可以特异地沉默各自不同受体的mRNA表达,并同时在蛋白水平上显示出AT1R受到抑制的结果,故可以将其应用于区别AT1R两种亚型受体功能的研究。

摘要：随着下丘中与调节能量稳态有关的脑星形胶质细胞信号传导的发现,星形胶质细胞在控制摄食的脑回路中的作用正逐渐被认识。脑干背侧迷走神经复合体(DVC)内的孤束核(NTS)整合了来自内脏的迷走神经传入信息,并起调节摄食的作用。我们假定该核团中的星形胶质细胞对食物摄入做出反应并影响食物摄入。在黑暗期喂食高脂食物12 h的小鼠出现NTS星形胶质细胞活化,表现为与对照饲料喂养的小鼠相比,极后区(AP)邻近的神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应性细胞数量增加(65%)和形态复杂性增高。为了检测星形胶质细胞活化对食物摄入的影响,我们使用腺相关病毒(AAV)载体(AAV-GFAPh M3Dq-m Cherry)将设计药物激活的设计受体(DREADDs)导入DVC星形胶质细胞(包括孤束核、极后区和迷走神经背运动核)。使用氯氮平-N-氧化物(0.3 mg/kg)进行化学遗传激活星形胶质细胞使其产生了比平行处理组星形细胞更复杂的形态,并在注射后4 h使动物在黑暗期进食减少84%。与表达AAV-GFAPm Cherry的对照小鼠相比,DVC星形胶质细胞的h M3Dq激活在禁食过夜后仍然减少黑暗期摄食(注射后4 h降低71%)。DREADD介导的星形胶质细胞激活不影响运动功能。DVC中星形胶质细胞的h M3Dq激活引起邻近的摄食神经回路(包括臂旁核)中c-FOS的表达。这表明NTS星形胶质细胞能对急性营养过剩做出反应,参与外周饱腹感信号的整合,并且在其激活后可以减少食物摄入。