摘要：目的建立实时荧光环介导恒温扩增(Rea-LAMP)快速检测无乳链球菌的方法,为无乳链球菌的快速检测提供一种新的方法。方法针对无乳链球菌纤连蛋白fbsB基因的6个区域设计6条特异性引物,利用链置换DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)恒温反应60min,通过荧光信号实时检测无乳链球菌。结果研究的反应体系在使用引物1时,扩增效果最好;在10株相关菌株的检测中,除无乳链球菌出现很好的阳性外,其余菌株均为阴性;本研究检测无乳链球菌DNA的灵敏度可达到300pg/μl。结论 Rea-LAMP检测无乳链球菌的特异性强、稳定性高、操作简便快速,具有较大的推广应用前景,可用于无乳链球菌的快速检测。

摘要：大丽花潜隐类病毒（Dahlia latent viroid,DLVd）是Verhoeven et al.（2013）用Return-PAGE和s-PAGE技术从大丽花中鉴定出的一种新类病毒。根据2015年国际病毒分类委员会分类报告,DLVd为马铃薯纺锤形块茎类病毒科啤酒花矮化类病毒属成员。该病毒单独侵染时,大丽花没有明显的症状,其与马铃薯纺锤块茎类病毒（Potato spindle tuber viroid.

摘要：研究建立一种实时荧光环介导等温扩增技术(Real-time?uorescence loop-mediated isothermal amplification,RF﹣LAMP)检测沙门氏菌的方法。利用invA基因设计引物,进行特异性验证,并对灵敏度和人工污染蛋糕的检出限进行测定。结果显示,沙门氏菌呈阳性结果,非沙门氏菌呈阴性结果,表明特异性良好。该方法检测纯培养物的灵敏度为6.3 cfu/mL,人工污染蛋糕样品的检出限为63 cfu/g。另外,利用该方法对65份糕点样品进行检测,并与GB 4789.4—2016方法进行比较,其敏感性、特异性和符合率分别为100%、98.44%和98.46%。该方法特异性好,灵敏度高,操作简单,可实时监测扩增反应,对沙门氏菌引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义。

摘要：本研究成功建立了植原体分类鉴定和检测的 Taq Man探针实时荧光 PCR方法 ,该方法根据植原体 16S r DNA保守区设计了 1个 Taq Man广谱探针和 3个植原体组间点突变特异性探针 ,并对 9种植原体和 5种细菌以及 3个植物样本进行实时荧光 PCR。结果表明 ,用广谱探针可检测到所有植原体产生荧光信号 ,而细菌不产生荧光信号。当用植原体组间特异性探针检测时 ,仅能检测到该组植原体产生荧光信号 ,检测的敏感性比常规的 PCR-电泳检测高约 10 0倍、检测速度有较大提高。由于PCR产物是荧光探针检测 ,本方法特异性强 ,并可以用组特异探针直接确定植原体种类。实验采用完全闭管检测 ,降低了污染机会。本研究为其它原核生物、特别是不能培养菌。

摘要：为建立犬瘟热病毒(CDV)临床快速检测方法,针对CDV保守N基因依据重组酶聚合酶等温扩增(RPA)引物设计原理进行RPA引物探针设计,通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验和临床样品检测,建立了CDV实时荧光RT-RPA检测方法。结果显示,反应体系中M-MLV反转录酶最适浓度为4 U/μL,所建CDV实时荧光RT-RPA检测方法特异性较好,敏感性最低可检测到5.68×102 copies/μL,高于国标RT-PCR(GB/T 27532-2011)检测方法。建立的CDV实时荧光RT-RPA检测方法具有较高的敏感性和特异性、操作简便、20 min内判定结果,可用于临床犬瘟热快速诊断,对犬瘟热的防控具有重要意义。

摘要：利用实时荧光PCR方法建立了快速鉴定鸡源性成分的方法,选择鸡线粒体DNA为研究对象,设计了特异性引物及探针。对不同含量的鸡粉进行检测,实时荧光PCR方法能够检测到的最低含量是0.001%。该方法具有很高的特异性和灵敏性,而且鉴定过程非常快捷,可作为鸡源性成分鉴别检测的常规方法。

摘要：为了建立猪细小病毒(PPV)核酸环介导等温扩增(LAMP)定量检测方法,选择PPVNS1基因序列为靶序列,设计3对特异性引物,通过优化反应体系和反应条件,筛选用于提高反应体系稳定性的化学制剂,建立了一种PPV的实时荧光定量LAMP(qLAMP)检测方法。结果显示,添加Eva Green的反应体系的扩增效果明显好于SYBR GreenⅠ和钙黄绿素;体系中加入的10 g/L聚丙烯酰胺使质粒标准品在1.39×10^(5)~1.39×10^(1)copies/μL和C_(t)值之间的线性关系良好,标准曲线方程为Y=-2.9435X+44.354,相关系数R^(2)为0.9849;该方法不与其他病毒的核酸样品发生交叉反应,检测灵敏度达13.9 copies/μL,变异系数≤1.08%;对200份流产猪胎儿的样品进行检测,阳性率为18%,与实时定量PCR的检测结果一致。本试验中建立的qLAMP检测方法为PPV的临床快速检测提供了新方法。

摘要：目的建立实时荧光环介导等温扩增法(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测阪崎克罗诺杆菌。方法以阪崎克罗诺杆菌(基因号AY702093)16S^23S rRNA的保守序列进行引物设计,对dNTPs、Mg^(2+)及模板浓度等反应条件进行优化,并考察该方法的特异性和灵敏度。结果实时荧光LAMP法检测的最佳反应体系为:内引物1.6μL FIP和1.6μL BIP,外引物:0.5μL F3和0.5μL B3,2.5μL2.5mmol/L d NTP,2μL 4 mmol/L MgSO_4,3μL Buffer,1.6μL 10×Bst DNA聚合酶,3μL DNA模板,0.5μL 100×荧光染料,用灭菌双蒸水补足25μL体系,在63℃下反应60 min。除阪崎克罗诺杆菌之外其他菌株均没有产生特异性荧光扩增曲线。实时荧光LAMP检测克罗诺杆菌的灵敏度可达到8×10-2 CFU/mL。结论本方法检测克罗诺杆菌具有耗时短、特异性强及灵敏度高等优点,可为快速检测婴儿配方奶粉中的克罗诺杆菌提供参考。

摘要：目的建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RF-LAMP)快速检测大肠杆菌(Escherichia coli,EHEC)O157的分析斱法。方法针对大肠杆菌O157编码O抗原的rfbE基因设计引物。对该斱法迚行特异性验证,同时对大肠杆菌O157:H7纯培养物的灵敏度和人工污染牛肉的检出限迚行测定,对61份牛肉样品迚行RF-LAMP检测,幵与GB4789.36-2016斱法迚行比较,评价RF-LAMP斱法的敏感性、特异性和准确度。结果 10株大肠杆菌O157呈阳性结果, 21株非大肠杆菌O157呈阴性结果,该斱法特异性良好。纯培养物检测的灵敏度为5.1CFU/mL,人工污染的牛肉样品的检出限为5.1 CFU/g。结论本研究建立的RF-LAMP技术特异性好、灵敏度高、操作简单,可实时监测扩增反应,避克了繁琐的电泳过程,实现了对大肠杆菌O157的快速检测,对大肠杆菌O157引起的食源性疾病的预防和控制具有重要意义。

摘要：目的建立实时荧光单引物等温扩增(SPIA)检测阪崎克罗诺杆菌的方法。方法本文以阪崎克罗诺杆菌Omp A基因特异序列为靶序列,设计RNA-DNA组合引物和链终止序列,优化反应体系,对4株不同来源阪崎克罗诺杆菌和21株其他食源性致病菌进行实时荧光SPIA特异性分析,通过不同浓度梯度阪崎克罗诺杆菌菌悬液灵敏度的检测和添加有阪崎克罗诺杆菌的婴儿配方奶粉样品检出限的确定,评价方法的准确度。结果除4株阪崎克罗诺杆菌外,其他细菌均未出现特异性荧光扩增曲线,具有良好的特异性。在40 min内,实时荧光SPIA检测阪崎克罗诺杆菌纯培养基因拷贝灵敏度为每反应1 copies,相应活菌数为1.6×10-1cfu/ml;对婴儿配方奶粉模拟样品中阪崎克罗诺杆菌的检出限是1.5×100cfu/100 g。结论本研究建立的方法具有灵敏度高、特异性强、耗时短、操作简单等优点,适用于实验室快速检测阪崎克罗诺杆菌Omp A基因。