摘要：目的建立实时荧光聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒(HBV)基因型B^D方法并验证其准确性。方法比较GenBank中已发表的明确分型的143株HBV全序列,设计特异的组合引物探针,应用实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法对兰州地区128例慢性乙型肝炎患者血清标本进行基因型B、C、D检测,并随机对检测的基因型各3株标本进行S基因测序验证。结果128例标本中B型检出率为20.3%(26/128),C型71.9%(92/128),D型7.8%(10/128);18株HBV克隆标本S基因测序结果与本分型法完全一致。结论实时荧光聚合酶链反应HBV基因分型法能够简便、灵敏、快速、准确地鉴定HBV基因型,适宜用于HBV基因型的大规模临床和流行病学调查。

摘要：目的建立实时荧光定量聚合酶链反应(PCR),检测肺部感染患者痰液中军团菌属特异性16SrRNA基因。方法利用军团菌属特异性16SrRNA基因保守序列设计引物和探针,优化反应条件和反应体系,对嗜肺军团菌、非嗜肺军团菌及其他病原菌标准菌株进行检测,验证该方法的特异性、敏感性、重复性;并对557例肺部感染患者痰液标本进行检测,同时采用PCR酶切法作比较,阳性者对基因扩增产物测序做验证试验。结果该方法检测军团菌属所有标准菌株均出现阳性信号,其他非军团菌属检测结果均为阴性,灵敏度为102 CFU/mL;577例肺部感染患者的痰液标本,实时荧光定量PCR军团菌检出阳性率为23.1%,PCR酶切法检出阳性率为19.9%,经16SrRNA基因测序验证军团菌阳性率为17.2%,3种方法检出阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR检测患者痰液标本中军团菌,具有快速、简便的特点,可作为临床军团菌感染患者的一种辅助诊断试验。

摘要：目的建立一种快速、灵敏和特异的人型支原体实时荧光聚合酶链反应(real-time PCR)检测技术。方法依据人型支原体gap基因保守区域使用Beacon Designer 7.0软件设计引物和探针,建立人型支原体real-time PCR检测方法并优化。对优化后的方法进行实验室灵敏度、特异度和检测限评价,并与聚合酶链反应(PCR)进行比较。结果该real-time PCR对于人型支原体的检测限为50 cfu,PCR检测限为5×103cfu,其检测灵敏度为PCR的100倍。所建立的检测方法对其他10种常见支原体、12种泌尿生殖道感染病原菌染色体及人类染色体的扩增均为阴性。结论本研究建立的real-time PCR方法可灵敏、特异的检测人型支原体,有望用于临床标本检测。

摘要：目的建立快速、准确、特异的检测WU多瘤病毒的实时荧光聚合酶链反应方法。方法根据TaqMan探针技术荧光定量PCR原理，以WU多瘤病毒VP2基因为靶序列，设计并合成引物和荧光探针；优化PCR反应条件，评价实时荧光PCR方法的特异性、灵敏度、重复性；并对394例临床样本进行检测。结果成功建立了WU多瘤病毒的荧光定量PCR检测方法；该试验所建立的实时荧光PCR方法可准确、特异的检测WU多瘤病毒；该方法可定量检测1．0×10^0～1．0×10^7拷贝范围的wu多瘤病毒；检测的批间和批内的变异系数均〈5．0％；394例患儿痰标本中共检测出3例人WU多瘤病毒阳性，阳性率为0．76％。结论所建立的WU多瘤病毒荧光定量PCR法敏感性较高，重复性、特异性良好，适合于临床标本检测及大样本量筛查，可为临床诊断及流行病学研究奠定方法学基础。

摘要：目的:为食品监管部门有效检测食品中大豆、小麦过敏原提供技术支撑。方法:分别依据小麦醇溶蛋白基因及大豆Lectin基因为模板设计并创建TaqMan探针双重荧光PCR方法,大豆Lectin基因检测采用FAM标记,小麦醇溶蛋白基因检测采用HEX标记,同时以真核生物18S rRNA作为内参基因确保检测体系的有效性。结果:所创建的实时多重TaqMan探针PCR体系对大豆、小麦过敏原之外的物种成分无荧光扩增;大豆、小麦混合样品的检出限均能达到0.01%(质量分数)。结论:所创建的实时多重TaqMan探针PCR体系针对大豆、小麦过敏原有高特异性,可用于食品中过敏原大豆、小麦成分的同步快速检测。

摘要：根据PCR对温度控制的要求设计出一种模糊PID控制器,采用误差和误差变化率作为模糊PID控制器的输入,PID参数作为模糊PID控制器的输出,并使用一组模糊规则实现对PID参数的在线优化调节。通过使用Simulink图形化工具平台对模糊PID控制器和传统的PID控制器进行建模和仿真。结果表明,与传统PID控制器相比,模糊PID控制器性能优良,使系统响应速度加快,超调减小。

摘要：目的建立检测肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因mRNA表达的实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法。方法设计特异性引物和TaqM an探针,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因作为对照,建立检测TSLC1基因表达的实时荧光PCR方法,并采用细胞株和宫颈组织样本进行验证。结果该方法检测TSLC1基因mRNA的检测下限为每反应10个细胞或2拷贝cDNA,总不精密度为3.1%。TSLC1基因mRNA在子宫肌瘤、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)与宫颈癌患者宫颈组织中的表达率分别为100%、75%、55%和24%。宫颈癌细胞株中未检出TSLC1基因mRNA表达。所有样本中均有GAPDH基因mRNA表达。结论该实时荧光PCR方法能够有效检测TSLC1基因mRNA表达,是进一步研究TSLC1基因在宫颈癌发生中的作用及宫颈癌早期诊断的重要工具。

摘要：目的:构建实时荧光PCR法以测定人类双埃可病毒RNA。方法:通过相关资料自行设计合成人类双埃可病毒引物,将病毒RNA进行反转录之后,进行基于EVaGreen染料的实时荧光定量(Real-time)PCR扩增,通过高分辨率溶解曲线、核酸电泳及产物测序验证PCR结果。结果:对该病毒保守区约260BP片段扩增成功,测序证实为人双埃可病毒序列,建立了该病毒EVaGreen实时荧光PCR检测方法。结论:为人类双埃可病毒的检测提供了一种快速简便的方法。

摘要：目的建立快速、敏感、特异的食品中单增李斯特菌检测方法。方法针对单增李斯特菌溶素A基因（hlyA）设计一对引物和一条探针，并用该引物和探针运用实时荧光PCR技术对单增李斯特菌的DNA、细胞、质粒和样品进行实时荧光PCR定量检测。结果利用实时荧光PCR技术，建立了DNA校正曲线、细胞校正曲线和质粒校正曲线。DNA校正曲线在1～32CFU/ml、细胞校正曲线在32—320CFU／ml、质粒校正曲线在1—37Copies／ml，线形关系良好，且三种校正曲线检测样品得出的结果基本吻合。结论本试验建立起来的实时荧光PCR定量检测单增李斯特菌的方法灵敏度高、特异性好、准确，可应用于食品中单增李斯特菌的检测。