摘要：目的为实现赤小豆加工食品的真伪和品质鉴别,建立赤小豆加工食品中被误用或混用的红豆成分实时荧光聚合酶链式反应(PCR)定性和微滴数字聚合酶链式反应(ddPCR)定量检测方法。方法根据赤小豆和红豆基因组DNA中保守基因,分别设计适用于赤小豆和红豆成分实时荧光PCR定性检测的特异性引物探针,并设计适用于赤小豆加工食品中红豆成分双重ddPCR定量检测的通用引物探针,建立赤小豆加工食品中红豆成分质量百分比-DNA拷贝数浓度百分比线性关系式。结果本方法对赤小豆和红豆基因组DNA检测低限分别为0.1和0.01 ng/μL,对赤小豆和红豆基因组DNA拷贝数浓度定量检测限均为6 copies/μL,可对赤小豆加工食品中质量百分比为5%~80%的红豆成分准确定量。结论本方法可用于赤小豆加工食品中红豆成分的定性和质量百分比定量检测。

摘要：目的本研究旨在建立一种具有高特异性的TaqMan探针实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法,用于美洲大蠊药材以及中药饮片美洲大蠊粉的鉴别。方法依据美洲大蠊基因组序列的特点,设计出适用于实时荧光PCR检测的特异性引物和探针,并对探针浓度、循环数和退火温度进行优化,建立能够快速鉴别美洲大蠊的TaqMan探针实时荧光PCR最佳方法,进一步验证该方法的特异性和灵敏度。结果研究表明特异性引物和探针仅对美洲大蠊药材以及美洲大蠊粉有特异性扩增,对杜比亚蟑螂、土鳖虫、德国小蠊和九香虫均未扩增出荧光曲线。结论所建立的TaqMan探针实时荧光PCR法能够准确、快速对美洲大蠊及常见混伪品进行鉴别,为美洲大蠊的鉴别提供一种专属性更强的技术手段参考。

摘要：根据双歧杆菌属16S rRNA基因的保守区序设计特异性引物和探针,建立一种鉴定食品中双歧杆菌属的实时荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）检测方法.对方法的特异性、灵敏度、重复性和体系抗干扰能力进行验证,最后采用该方法对市售25 份标示含双歧杆菌样品进行检测.结果表明：该检测方法可特异性检测双歧杆菌属细菌,对近缘的乳杆菌属、链球菌属及食品中常见菌群包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌等均无扩增.双歧杆菌DNA检测绝对灵敏度可达到2 pg,相对灵敏度可达到104 CFU/mL.重复性测试表明相对标准偏差小于1%.同时进行了杂菌干扰检测实验,在培养物水平和纯基因组DNA水平上将青春双歧杆菌ATCC15703与大肠杆菌ATCC25922混合进行检测,检出Ct值较纯菌检测时无显著影响,表明建立的荧光PCR方法抗干扰能力良好.对25 份市售实际样品进行测试,有5 份标识含有“双歧杆菌”的样品未检测出双歧杆菌成分.本研究所建立的实时荧光PCR法能准确、快速检测食品中双歧杆菌属细菌.

摘要：根据产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)高度保守的plc基因,设计特异性引物和探针,建立产气荚膜梭菌的实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和实时荧光聚合酶重组酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)检测方法。特异性分析结果表明,建立的两种检测方法特异性强,仅对产气荚膜梭菌有特异性扩增,对其他细菌均无扩增;两种方法的检出限均为1.3 pg/μL。在人工污染模拟样品的检测中,两种方法的检出限均为1.0×102 CFU/mL;实时荧光RPA需要3~13 min即可实现对所有阳性样品的检测,而实时荧光PCR则需要24~46 min(Ct值为17.45~33.65)。实时荧光RPA方法在检测时间、操作方便性和仪器便携性方面,明显优于实时荧光PCR方法。本研究建立的实时荧光PCR和实时荧光RPA检测方法特异性强、灵敏性高、操作方便,为实验设备装备较差的基层检测实验室和疫情突发现场产气荚膜梭菌的快速检测提供有效技术手段。

摘要：以鸭肉细胞核中基因序列(IL-2)为目标序列,设计特异性引物和TaqMan探针,设计并构建扩增内标,针对内标设计TaqMan探针,通过对聚合酶链式反应(PCR)反应体系和反应条件的优化,建立用于检测食品中鸭肉成分的添加有扩增内标的的荧光PCR方法。通过扩增曲线和Ct值分析该方法的特异性、检测限和灵敏度。结果表明:TaqMan探针实时荧光PCR法具有很高的特异性,所建立的方法能够检测出0.5ng的鸭组分DNA,灵敏度可达0.1%。应用该方法对市售38份样本进行抽样检测,结果令人满意。

摘要：根据狐狸线粒体基因组中的保守序列和貉子线粒体D-loop基因保守序列设计狐狸、貉子特异性引物和Taq Man探针,建立一种基于实时荧光聚合酶链式反应的肉及肉制品狐狸、貉子源性成分测定方法,通过特异性、灵敏性、线性检测对该方法体系进行检验和评价。本研究建立的狐狸、貉子源性成分实时荧光聚合酶链式测定方法体系具有良好的特异性及灵敏性,最低可检测0.5 pg/μL纯狐狸DNA和5 pg/μL纯貉子DNA。本研究建立的狐狸貉子源性成分荧光PCR检测方法,可以用来检测实际样品中是否含有狐狸貉子源性。

摘要：目的:建立基于实时荧光聚合酶链式反应技术的食品中鸡源性成分快速检测方法。方法:以鸡线粒体细胞色素b为目的基因,设计特异性引物和探针,通过特异性、灵敏性实验及模拟混合肉样和市售肉制品检测,对该体系进行验证。结果:该鸡源荧光聚合酶链式反应检测体系具有很好的特异性及灵敏性,可检测3.5 pg/μL鸡源DNA的存在;经含鸡源成分的模拟混合肉样检测,证实体系抗干扰能力强;并且通过市售食品检测表明体系可用于定性加工食品中的鸡源成分。结论:所建立的鸡源引物探针体系具有特异性好、灵敏度高、快速高效等优点,可用于对食品中鸡源性成分的掺假鉴别。

摘要：采用实时荧光聚合酶链式反应技术检测食品中梅花鹿成分。通过对梅花鹿基因序列对比分析,选取种间差异大、种内差异小的线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ基因序列作为靶序列,利用Primer Express、Oligo和DNAMAN等软件设计了梅花鹿特异性的引物和Taq Man探针,并用已知样本对引物和Taq Man探针的物种特异性、检测灵敏度进行验证和检测。实验结果表明,引物和探针对梅花鹿成分检测的特异性良好,与其他物种DNA无非目标扩增,对梅花鹿DNA的扩增效率为91.68%,该方法的检测灵敏度达0.42 pg/反应。

摘要：根据鲑亚科鱼类生长激素基因保守序列设计特异性引物和探针,建立了一种鉴定食品中鲑亚科鱼类成分的实时荧光聚合酶链式反应(PCR)方法。结果表明:建立的检测方法高度特异于鲑亚科鱼类检测,鲑科的另两个亚科——白鲑亚科和茴鱼亚科样品均无扩增曲线。采用5种常见鲑亚科鱼品种可稳定检测到的最低DNA量为100pg;分别将大西洋鲑鱼和北极红点鲑鱼肉混入玉米、鸡肉和鲫鱼样品中测定的相对灵敏度为0.01%(m/m)。检测方法的重复性测试结果表明,Ct值标准偏差和相对标准偏差均在可接受范围内。运用建立的实时荧光PCR检测方法对25份市售实际样品进行测试,有4份标识含有"三文鱼"的样品未检测出鲑亚科鱼类成分。

摘要：针对芝麻Sesamum indicum2S albumin mRNA基因设计引物、探针,在实时荧光PCR仪上进行扩增、检测和分析.结果显示:该组探针和引物对芝麻有很强的特异性,除黑芝麻和白芝麻外,其余6种对照材料均未检测到荧光信号,黑白芝麻成分检测灵敏度达到0.1%.该方法具有灵敏度高、快速、简便的特点,可用于芝麻致敏原成分的定量检测.