摘要：目的建立3种用于检测G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因的一步法实时逆转录pcr,用于本实验室G1、G2和G4型轮状病毒的快速检测和定量、定性分析。方法设计G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因特异性引物和探针,采用G1、G2和G4型轮状病毒特异性体外转录RNAs,建立实时逆转录pcr,特异性检测G1、G2和G4型轮状病毒VP7基因方法。结果 3种实时逆转录pcr标准曲线R^2均大于0.99,扩增效率均在90%～110%之间。不同浓度体外转录RNAs重复性检测结果 CV均<5%,且可以对单拷贝RNAs样本进行检测。结论本检测方法快速、灵敏且重复性好,可以对轮状病毒VP7基因进行特异而有效的检测,为实验室轮状病毒毒株的分型和定量检测提供了特异而有效的检测方法,也为今后多重实时逆转录pcr的建立奠定了试验基础。

摘要：目的:建立双重实时荧光RT-pcr方法(DqRT-pcr)以检测甲、乙型流感病毒。方法:设计甲、乙型流感病毒M基因的特异性引物及双标记探针,优化反应条件,建立双重实时荧光RT-pcr方法(DqRT-pcr)。设计甲型流感病毒HA1、HA3亚型的H1、H3、N1、N2基因的特异性引物,建立双重普通RT-pcr(DRT-pcr)方法。对HA1、HA3和B型细胞分离株进行DqRT-pcr和DRT-pcr检测。对80份发热病人咽拭子标本进行DqRT-pcr和DRT-pcr检测及细胞培养分离病毒。结果:DqRT-pcr检测甲型和乙型靶DNA片段(重组质粒)最低极限为1×103拷贝。DqRT-pcr和DRT-pcr对11株H1N1、16株H3N2和12株乙型细胞分离株检测,符合率100%。DqRT-pcr、DRT-pcr和细胞培养分离病毒对80份咽拭子标本的阳性率分别为:37.5%(30/80)、30.0%(24/80)和43.8%(35/80),检出率差异未见统计学意义(2χ=5.5,P>0.05)。与细胞培养分离病毒法比较,DqRT-pcr的阳性和阴性总符合率为73.7%(59/80),阳性预测值为62.9%(22/35),阴性预测值为88.9%(40/45);经配对2χ检验,差异无统计学意义(2χ=0.76,P>0.05)。结论:建立DqRT-pcr可应用于甲型和乙型流感的检测,以多种检测方法互补将有助于提高临床标本的病毒检出率。