摘要：[目的]建立一种新型宫颈肿瘤组织高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测及分型方法,并评价其临床应用。[方法]基于我国人群流行的5种高危型HPV(HPV 16、18、31、33、51)的E6/E7早期基因序列,设计特异性引物,以明确HPV型别的宫颈癌细胞株及宫颈肿瘤组织为模板,进行PCR检测,结合基因测序验证引物的特异性。进一步优化条件,建立高危型HPV多重PCR检测方法,检测65例宫颈肿瘤组织标本,与临床上使用的流式荧光杂交HPV检测法比较,评价其敏感性和特异性。[结果]成功建立可同时检测5种高危型HPV的多重PCR检测方法,对65例宫颈肿瘤组织进行高危型HPV检测,检出率为72.3%,明显高于临床流式荧光杂交检测法的检出率(32.31%)(χ2=3.86,P<0.05)。[结论 ]基于HPV E6/E7早期基因的高危型HPV多重PCR检测方法是特异、灵敏的高危型HPV检测方法。

摘要：目的 利用RNA干扰（RNAi）技术沉默宫颈癌细胞系HeLa细胞中乙酰肝素酶（HPA）基因的表达,并探讨其对宫颈癌细胞侵袭力的影响.方法 根据GenBank数据库提供的HPA基因核苷酸序列,设计4对针对HPA基因的短发夹状RNA（shRNA）特异性寡核苷酸序列（即shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658）,并设计1条随机无关序列作阴性对照,分 别克隆到pYr-1.1质粒中.用脂质体法将上述质粒转染入HeLa细胞,以未转染质粒者为空白对照,采用逆转录（RT）-PCR技术、免疫荧光法分别检测转染后HeLa细胞中HPA mRNA和蛋白的表达,筛选出其中对HPA基因沉默效果最佳的质粒.将该质粒转染入HeLa细胞,采用穿膜（transwell）小室体外侵袭实验检测转染后HeLa细胞侵袭力的变化.结果 RT-PCR技术检测显示,转染shRNA-HPA-592、shRNA-HPA-995、shRNA-HPA-1351、shRNA-HPA-1658质粒后,HeLa细胞中HPA mRNA的表达水平分别为0.54±0.05、0.89 ±0.18、0.82±0.22、0.91 ±0.47,阴性对照和空白对照细胞中HPAmRNA的表达水平分别为1.31 ±0.72和1.09±0.16；免疫荧光法检测显示,转染上述不同质粒后HeLa细胞的胞质中均可见绿色荧光,HPA蛋白均呈阳性表达,其中转染shRNA-HPA-592质粒后HeLa细胞的胞质中绿色荧光强度最弱.故筛选出的对HPA基因沉默效果最佳的质粒即为shRNA-HPA-592质粒.体外侵袭实验检测显示,转染shRNA-HPA-592质粒后HeLa细胞的穿膜细胞数为（44±4）个,明显低于空白对照、阴性对照[分别为（182±6）、（258±17）个],差异有统计学意义（P＜0.01）；而阴性对照与空白对照比较,差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 本研究成功筛选出了靶向HPA基因的shRNA表达质粒,转染宫颈癌HeLa细胞后可高效抑制其HPA基因的表达,明显降低宫颈癌细胞的侵袭力,为进一步研究HPA基因的表达与宫颈癌侵袭的机制奠定了基础.

摘要：人乳头瘤病毒（ HPV）感染是宫颈癌的明确病因，病毒生活周期中DNA含量变化情况和各种mRNA和蛋白质的表达与宫颈病变各个阶段的发生发展联系密切。文章主要阐述高危型HPV的自然生活史、空间分布特征与宫颈病变的关系，根据不同应用环境设计和应用不同检测技术，对筛查和临床应用有重要的指导意义。

摘要：子宫颈癌已经成为严重威胁女性健康的公共卫生问题,人乳头瘤病毒(HPV)感染是子宫颈癌最主要致病因素。为了预防HPV感染,目前使用的预防性疫苗主要通过诱导宿主产生体液免疫反应,从而生成中和抗体。相较之下,HPV治疗性疫苗的设计目标是诱导宿主产生以Th1为主的细胞免疫应答,并清除已有的病毒感染并延缓或抑制肿瘤的发展。目前,已有多种基于不同机制和技术的HPV治疗性疫苗进入临床试验阶段。本文对上述疫苗的临床试验进展进行了梳理和总结,以期为我国HPV治疗性疫苗的研发工作提供参考。

摘要：目的探讨宫颈癌术后三维适形放射治疗(3D-CRT)和共面等分设野调强放射治疗(IMRT)计划靶区及其周围危及器官受照剂量的差异。方法随机选择10例宫颈癌术后患者,进行CT扫描、靶区和危及器官的勾画,处方剂量50 Gy。分别进行3D-CRT和共面等分设野IMRT计划设计,计算靶区剂量均匀度指数(HI)、适形度指数(CI)、最大受照剂量、最小受照剂量、平均受照剂量和危及器官照射体积等并对结果进行比较分析。结果 5F-IMRT、7F-IMRT和9F-IMRT在靶区适形度方面明显优于3D-CRT;在危及器官(膀胱V30、V40、V50,小肠V50和直肠V30、V40、V50)保护方面,5F-IMRT、7F-IMRT和9F-IMRT明显优于3D-CRT,P0.05。结论宫颈癌术后辅助放疗共面等分IMRT计划无论在靶区适形度还是正常组织保护方面均优于3D-CRT,同时也证实7野或9野IMRT未必较5野获益更多。5野与7、9野的IMRT相比,在治疗时间及费用方面有独特的优势,值得在临床上推广。

摘要：目的通过观察乙酰肝素酶（HPA）抑制剂对子宫颈癌HeLa细胞体外生长的抑制作用及HPA表达的影响，为子宫颈癌HPA分子靶向治疗提供理论依据。方法优化设计并合成了两个系列共13种1，3-O，N螺杂环类化合物，产品编号为10～22号，其中21号为HPA抑制剂——DMB0化合物，余12种为新合成的化合物。其中，1个系列含甲氧苯基，产品编号为10-14号；另1个系列不含甲氧苯基，产品编号为15～22号。（1）采用乙酰肝素降解检测试剂盒检测新合成的化合物（选择与DMBO结构类似度高的6个化合物，即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性的作用，以50％抑制浓度（IC50）表示作用的强弱；（2）四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测新合成的化合物（7个化合物，即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用后HeLa细胞生长的抑制作用，选择抑制作用最大的化合物（即16号化合物）用于以下实验；（3）细胞划痕实验观察16号化合物作用后HeLa细胞迁移能力的变化；（4）流式细胞仪检测16号化合物作用后HeLa细胞的细胞周期比例和细胞凋亡率的变化；（5）实时定量逆转录（RT）-PCR技术、蛋白印迹法和免疫组化法检测16号化合物作用后HeLa细胞中HPAmRNA和蛋白表达的变化。结果（1）6个新合成的化合物（即14、15、16、20、21、22号化合物）对HPA活性均有不同程度的抑制作用，除22号化合物抑制作用不明显无法测出IC50值外，14、15、16、20、21号化合物的Ic，。值分别为4．47、21．81、8．36、14．13、47．19μmoFL。（2）MTT比色法检测显示，不同浓度（分别为1、5、15、30、60、120、180、240μmol／L）的7个新合成的化合物（即11、12、14、15、16、20、22号化合物）作用48h对HeLa细胞的生长均有抑制作用，并呈明显的浓度依赖性（P〈0．01），其中16号化合物的抑制效果最显著（IC50值为48．16μmoFL）；进一步检测显示，16号化合物作用不同时间（分别为24、48、72、96h）后对HeLa细胞生长的抑制作用呈明显的时间依赖性（P〈0．01）。（3）细胞划痕实验观察显示，作用24h后，实验组（加入50μmol／L的16号化合物，下同）HeLa细胞迁移能力明显受到抑制，其划痕的宽度明显大于对照组（不加16号化合物，下同）。（4）流式细胞仪检测显示，作用48h后，实验组HeLa细胞GdG1期、G2/M期比例分别为（75．85±1．77）％、（11．65±0．64）％，均明显高于对照组[分别为（49．10±3．11）％、（0．17±0．24）％；P〈0．01]；S期细胞比例为（12．50±1．13）％，明显低于对照组的（50．70±2．83）％（P=0．003）。实验组HeLa细胞的凋亡率为（11．9±1．2）％，明显高于对照组的（6．6±1．8）％（P=0．013）。（5）实时定量RT—PCR技术和蛋白印迹法检测显示，作用48h后，实验组HeLa细胞中HPAmRNA和蛋白的表达水平分别为1．23±0．46和0．46±0．31，明显低于对照组的3．43±0．45和1．30±0．58（P〈0．05）；免疫组化法检测显示，实验组累积吸光度（伪）值为0．39±0．04，对照组为0．50±0．09，两组比较，差异有统计学意义（P=0．026）。结论新型1，3-O，N螺杂环类HPA抑制剂可能通过凋亡途径显著抑制子宫颈癌HeLa细胞的生长；该类抑制剂可明显抑制HeLa细胞的HPA活性，并下调其HPAmRNA和蛋白的表达。

摘要：目的:评价高剂量率(high dose rate,HDR)与低剂量率(low dose rate,LDR)近距离放射治疗技术对宫颈癌治疗的有效性和安全性。方法:计算机检索PubMed、EMBASE、Cochrane Library、中国生物医学文献数据库(Chinese Biomedical Literature Database,CBM)、中国期刊全文数据库(Chinese Journal Full Text Database,CJFD)和中文科技期刊全文数据库(Chinese Scientific Journals Full Text Database,CSJD),同时从参考文献中进行追溯查找,按纳入标准全面搜索相关的随机或半随机对照试验。按Cochrane系统评价的方法,采用RevMan 4.2.10软件进行Meta分析。结果:共纳入4项研究,1 253例患者。Meta分析结果显示,HDR组与LDR组相比,其3、5、10年生存率,3、5年骨盆控制率,3、5、10年无复发生存率差异均无统计学意义,相对危险度(95%的可信区间)分别为0.96(0.80～1.16)、0.92(0.83～1.01)和0.86(0.70～1.05),0.96(0.86～1.07)和0.95(0.87～1.05),1.02(0.84～1.23)、0.98(0.89～1.07)和1.02(0.88～1.19)。在复发和转移方面,其局部区域复发、局部复发联合远处转移、主动脉旁淋巴结转移和远处转移的差异也无统计学意义,相对危险度(95%的可信区间)分别为1.03(0.83～1.30)、2.23(0.78～6.34)、1.06(0.50～2.24)和1.00(0.76～1.32)。在3～5级迟发性并发症方面,膀胱、直肠乙状结肠和小肠并发症的发生率差异均无统计学意义,相对危险度(95%的可信区间)分别为1.08(0.18～6.63)、0.90(0.25～3.21)和3.12(0.96～10.15)。结论:本研究结果提示,HDR与LDR在提高宫颈癌患者生存率和肿瘤控制方面疗效相当。由于纳入研究的样本量较小且质量参差不齐,因此尚需设计科学严谨的大样本多中心随机对照试验以进一步验证。

摘要：目的 构建表达HPV18E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒，并对E7E6蛋白的免疫原性进行研究。方法 将去除了转化活性的HPV18E6、E7基因融合，插入痘苗病毒重组质粒，通过同源重组构建表达HPV18E7E6的重组痘苗病毒，观察其免疫效果。结果 构建了表达ETE6融合蛋白的重组痘苗病毒，PCR鉴定及测序表明融合基因序列与设计相符，正确插入到痘苗病毒TK区域；Western-Blot检测表明该重组病毒能表达HPVl8E7E6融合蛋白。免疫后的小鼠可产生E6、E7特异性抗体，但ELISPOT没检测到E7肽库刺激小鼠脾细胞产生分泌IFN-γ的阳性反应。结论构建了一株表达HPVl8E7E6融合蛋白的重组痘苗病毒，可以有效诱发小鼠产生针对E6、E7的体液免疫，但不能诱发产生相应的细胞免疫，为进一步研究不同动物模型中HPVl8E6E7的细胞免疫特点提供了实验基础。

摘要：目的研究旋转误差(绕前后轴)对晚期宫颈癌长靶区容积调强弧形治疗(VMAT)计划中不同位置淋巴结靶区剂量学参数的影响以及应对策略。方法简单随机抽样选取川北医学院附属医院的宫颈癌伴腹主动脉旁或腹股沟淋巴结转移患者资料进行回顾性分析,按要求勾画出离计划中心不同距离的淋巴结靶区。根据每一病例CT图像设计VMAT计划后,通过改变治疗床参数的方式引入旋转误差(绕前后轴),其他参数不变的情况下重新计算剂量分布。然后,按公式d=2πr(α/360)对原淋巴结靶区增加外放边界(r是淋巴结中心到计划中心的距离),重新制作计划,分析引入相应旋转误差后原淋巴结靶区剂量学参数的变化。结果当淋巴结靶区在与计划中心距离为6 cm误差为3°时、距离为9 cm和12 cm误差≥2.5°时、距离为15 cm误差≥2°时、距离为18 cm误差≥1.5°时,D_(95%)平均变化超过5%。旋转误差≤1°时淋巴结靶区D_(95%)的平均变化均小于5%,淋巴结距离治疗计划中心18 cm时超过3%,达到3.75%。以剂量参数V_(100%)评估,旋转误差0.5°、距离计划中心18 cm时(0.5°,18 cm)淋巴结靶区剂量变化超过5%,达到5.58%;(1°,15 cm)时V_(100%)变化达到8.96%,(1°,18 cm)时V_(100%)变化达到14.5%。按d=2πr(α/360)增加原淋巴结靶区外放边界,引入相应旋转误差后,原淋巴结靶区D_(95%)、V_(100%)参数变化均<1%。结论在宫颈癌长靶区放疗中,淋巴结靶区剂量学参数的变化随着旋转误差的增大而逐渐增大,随着与计划中心的距离增加而逐渐增大。应按d=2πr(α/360)对不同位置淋巴结靶区增加外放边界,避免欠量。

摘要：背景与目的:研究表明宫颈癌的发生发展与人乳头瘤病毒(humanpapillomavirus,HPV)E6、E7癌基因密切相关,于是人们采用核酶或HPVE6、E7反义寡核苷酸抑制其表达来治疗宫颈癌,虽然取得了一定的效果,但仍面临基因抑制效率低、维持时间短、工作量大、耗费多等问题。本研究采用最新的RNA干扰技术干扰宫颈癌CaSki细胞中HPV16E6转录,以了解其能否特异性抑制HPV16E6基因及其时效性如何。方法:设计合成针对HPV16E6的荧光标记siRNA,借脂质体转染宫颈癌CaSki细胞,通过荧光照片计数荧光细胞占所有细胞的比例计算转染效率;测定转染后不同时间点的细胞凋亡率;RT-PCR测定HPV16E6mRNA变化,Westernblot和流式细胞仪检测转染前后蛋白表达情况。结果:相差显微镜荧光照片显示细胞转染的效率为81%。HPV16E6siRNA转染细胞后24h、48h、5天凋亡率分别为7.7%、11.8%和37.4%,转染9天时凋亡率下降至12.6%。RT-PCR扩增结果显示,细胞转染前HPV16E6mRNA的量与siRNA阴性对照比较没有显著性差异,但转染后24h、48h、5天和9天分别减少了77%、83%、59%和41%;而作为内对照的β-actinmRNA在转染前后无变化。流式细胞仪定量测定HPV16E6蛋白,结果显示转染后24h、48h和5天,蛋白表达抑制率分别为79.7%、80.4%和71.3%;9天时抑制率有下降,但仍可达57.