摘要：目的:探讨信号转导因子与转录激活因子3(STAT3)短发夹RNA(shRNA)真核表达载体对宫颈癌SiHa细胞定植和侵袭能力的影响。方法:针对人STAT3的基因设计并合成编码小干扰RNA(siRNA)的寡核苷酸,克隆入pSilencer2.1-U6-neo质粒中,构建STAT3基因shRNA真核表达质粒,脂质体法将重组质粒转染人宫颈癌SiHa细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)法分别检测STAT3基因的mRNA及蛋白表达水平;软琼脂克隆形成实验和体外侵袭实验检测SiHa细胞的定植和侵袭能力。结果:构建的STAT3基因shRNA真核表达载体成功地转染人宫颈癌SiHa细胞,细胞STAT3蛋白及mRNA表达均下降(P<0.05);SiHa细胞在软琼脂中形成的克隆数和穿透Matrigel膜的细胞数均明显减少(P<0.05)。结论:STAT3基因shRNA真核表达载体通过下调STAT3基因表达,抑制宫颈癌细胞的定植和侵袭能力。

摘要：目的:研究宫颈癌调强放疗(IMRT)和三维适形放疗(3D-CRT)时靶区及其周围正常组织受照剂量的差异。材料方法:用拓能公司生产的WiMRT三维适形调强放疗计划系统分别进行6～9个照射角度的3D-CRT和IMRT计划设计,肿瘤量45Gy,计算出正常组织和靶区的剂量—体积直方图以及所需照射的总跳数。用Siemens生产的Primart电子直线加速器(X射线能量6MV,MLC叶片29对)实施放疗计划,测量出10cm×10cm射野外漏射线和散射线剂量率,估算放疗时正常组织所受辐射剂量随距离的变化关系。结果:照射野数和照射角度一致,IMRT时膀胱、直肠、阴道所受平均剂量分别只有3D-CRT时的19.5%(29.3/150.3)、64.5%(538.0/833.0)和61.0%(1553.6/2546.3),靶区平均受照剂量略高于3D-CRT。IMRT病人正常组织所受散射线和漏射线剂量约为3D-CRT病人的1.5倍。结论:宫颈癌IMRT剂量分布优于3D-CRT。

摘要：目的探讨靶向HPV18 E6基因不同锌指区编码序列的siRNA对HeLa细胞的影响。方法分别设计靶向E6蛋白不同锌指区编码序列的两对siRNA,脂质体法转染HeLa细胞。半定量RT-PCR检测E6 mRNA转录表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖活性;流式细胞仪Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况。结果与siRNASCR转染组比较,RT-PCR结果显示,siRNA1和siRNA2转染后E6表达水平明显降低(F=8.709,P<0.05),且siRNA2组较siRNA1组下降更为显著(t=3.61,P<0.05)。MTT结果提示,2对siRNA转染后48 h和72 h的细胞增殖活性均明显下降(F=60.583、102.421,P<0.05),siRNA2组较siRNA1组下降更为明显(t=4.717、7.932,P<0.01);2对siRNA转染后均未检测到明显的细胞凋亡。结论靶向锌指2区编码序列的siRNA抑制E6基因表达和HeLa细胞增殖的效果更好,锌指2区可能是使HeLa细胞发生恶性转化并使其增殖失调控的关键区域。

摘要：目的:探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E6基因序列的多态性及同源性.方法: 采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E6,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而分析其同源性.结果: 50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.含有HPV16型的标本34例中扩增出HPV16E6 25例.其中178位核苷酸变异较大,变异率为72%,其相应氨基酸均由天冬氨酸变为谷氨酸.结论: HPV16E6 DNA序列发生碱基替换的区域主要在氨基端94～241位,羧基端相对保守,未见变异.广东地区宫颈癌组织中HPV16E6的热点突变为Nt178.

摘要：目的观察RNA干扰下调人类端粒酶反转录酶(h TERT)表达对宫颈癌He La细胞增殖及侵袭能力的影响。方法针对h TERT基因设计两对siRNA片段,瞬时转染人宫颈癌He La细胞;采用RT-PCR、Western印迹法检测转染后He La细胞h TERT在mRNA水平和蛋白水平的表达变化;PCR-TRAP法检测细胞端粒酶活性;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力变化;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡;transwell实验检测细胞运动侵袭能力。结果 RT-PCR及Western印迹法结果显示,h TERT-siRNA能有效下调h TERT在mRNA和蛋白水平的表达,抑制效率分别为(85.8±3.26)%、(97.5±3.72)%;RNA干扰下调h TERT基因表达后,He La细胞端粒酶活性抑制效率为75.5%,增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,处于G0/G1期细胞增多,由(58.18±3.76)%上升到(68.97±4.01)%(P<0.05);未处理组细胞凋亡(4.14±0.79)%,h TERT-si-RNA组细胞凋亡(8.1±1.22)%,细胞凋亡率增加(P<0.05)。transwell实验检测结果显示,细胞运动侵袭能力下降约30%(P<0.05)。结论 h TERT-siRNA可有效下调h TERT在人宫颈癌He La细胞中的表达,抑制He La细胞生长并降低其侵袭能力。

摘要：目的了解成渝地区HPV16亚型基因的一级结构特点,为成渝地区宫颈癌的防治及HPV疫苗的研制提供理论基础。方法收集宫颈癌组织标本,针对HPV16亚型分别设计L1、E6和E7基因特异性引物,用PCR方法从宫颈癌组织中获得各基因的全长序列,并构建克隆载体pGEM-T,进行序列分析,同时分别以L1、E6和E7基因序列进行进化分析。结果在102例宫颈癌标本中,99例为HPV阳性,感染率为97.1%,其中32例(32.3%)为HPV16单重感染,所占比例最高。通过与标准株比较,发现成渝两地HPV16亚型E6、E7和L1基因都存在一定程度的变异,变异率分别为90.6%、78.1%和25.0%。结论与标准序列比较,成渝地区HPV16亚型L1、E6和E7基因存在一定范围的变异,提示我们,在预防治疗成渝地区妇女宫颈癌病人以及研制开发针对西南地区的宫颈癌疫苗时,需要注意这些位点的变异,特别是一些引起氨基酸变异的位点。

摘要：目的:介绍一种新型宫颈刷,探讨其在宫颈癌筛查中的实用性。方法:详述本新型宫颈刷的结构及工作原理。选取2017年3月至2018年1月于温州医科大学附属第二医院就诊,以传统宫颈刷法进行宫颈癌筛查时"宫颈细胞学异常或高危型人乳头瘤病毒(HPV)阳性"的30例患者为研究对象,采用新型宫颈刷刷取患者宫颈鳞柱交界区上皮脱落细胞,分析比较两种宫颈刷法刷取标本的满意率、异常细胞检出率及HPV阳性检出率。结果:传统宫颈刷法与新型宫颈刷法标本满意率均为100%;传统宫颈刷法异常细胞检出率为76.7%,HPV阳性检出率为83.3%,新型宫颈刷法异常细胞检出率为63.3%,HPV阳性检出率为76.7%,两种方法一致性较好(Kappa>0.75)。结论:本新型宫颈刷可以有效地刷取宫颈脱落细胞,异常细胞检出率和HPV阳性检出率与传统宫颈刷相似,同时该新型宫颈刷能有效地简化宫颈癌筛查的流程,为宫颈癌筛查提供便利。

摘要：目的：探讨应用网络信息平台的延续护理对中晚期宫颈癌患者社会支持和遵医行为影响。方法选取中晚期宫颈癌同步放化疗患者120例，随机分为干预组和对照组，每组60例。两组患者出院前均按常规给予出院指导，干预组患者出院后由专职随访护士应用自行设计的网络信息系统，实施延续护理3个月。出院前、出院后3个月对患者的社会支持状况和遵医行为（复诊、阴道冲洗及饮食依从性）进行问卷调查，比较两组患者的社会支持状况和遵医行为。结果出院前两组患者社会支持各项得分差异无统计学意义；出院3个月后干预组患者社会支持状况包括主观支持、客观支持、社会支持利用度和社会支持总得分均明显高于对照组（均P＜0.05），患者遵医行为的按时复诊、按要求阴道冲洗及遵照饮食指导均明显高于对照组（均P＜0.05）。结论应用网络信息平台的延续护理能够使护理人员高效、快捷地为离院患者提供康复指导，能有效提高中晚期宫颈癌同步放化疗出院后患者社会支持和遵医行为，从而改善患的治疗效果。

摘要：目的:建立针对人信号传导与转录激活因子3(STAT3)的小发夹RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,建立稳定感染的人乳头瘤病毒16(HPV16)阳性宫颈癌细胞系,以进一步探讨STAT3在HPV16阳性宫颈癌发生和发展中的作用。方法:设计合成3条靶向STAT3基因的小干扰RNA(siRNA),从中选择1条具有最佳干扰效果的siRNA,构建STAT3-shRNA载体pSUPERretro-puro-STAT3,用293FT细胞包装质粒产生STAT3 shRNA逆转录病毒,感染HPV16阳性的宫颈癌细胞株SiHa和CaSki细胞后,通过嘌呤霉素筛选2周,约3 d传代1次,建立稳定细胞株,稳定沉默STAT3的细胞株命名为SiHa/STAT3-sh和CaSki/STAT3-sh。通过实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹(Westernblotting)分别从mRNA和蛋白水平检测STAT3的表达量。结果:经RT-PCR和Western blotting实验证实,在SiHa/STAT3-sh和CaSki/STAT3-sh细胞中,STAT3 mRNA的抑制率达99%以上(P<0.01),STAT3总蛋白抑制率达70%以上(P<0.01),磷酸化STAT3蛋白的抑制率达78%以上(P<0.01)。结论:稳定沉默STAT3的HPV16阳性宫颈癌细胞株建立成功。

摘要：宫颈癌是我国最常见的女性生殖系统肿瘤之一,严重威胁女性的生命健康。HOX转录反义RNA(HOTAIR)是一种典型的反义长链非编码RNA,在宫颈癌细胞中的表达显著升高,与宫颈癌的发生发展密切相关。近年HOTAIR在宫颈癌发生发展中发挥作用的机制研究发现其抑制大量抑癌基因的表达,广泛参与宫颈癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和迁移等各个环节,通过调节放疗耐受、抗逆转录和免疫靶向助力晚期宫颈癌治疗,在宫颈癌的遗传易感性中起着重要的作用,且与肿瘤进展及不良预后有显著相关性。未来根据HOTAIR的分子机制设计治疗靶点,通过大样本、多中心、前瞻性的临床试验证实其有效性和实用性,将为宫颈癌患者的早期诊断和个性化治疗提供新的思路。