摘要：应用微卫星富集文库—菌落原位杂交的方法,筛选得到了33个仿刺参的微卫星标记。富集文库中900个重组克隆经过菌落原位杂交后,415个(46.1%)为阳性克隆。随机挑取100个阳性克隆进行测序,结果显示这些克隆都含有微卫星位点。设计了57对特异性PCR引物,33对能扩增出清晰的条带。利用48个野生仿刺参个体对33个微卫星位点进行评价,结果显示位点都具有多态性。33个多态位点共获得222个等位基因,平均每个位点获得6.7个等位基因。观测杂合度(Ho)和期望杂合度(He)的范围分别为0.050 0~1.000 0和0.203 2~0.915 9。结果表明,富集文库—菌落原位杂交法筛选微卫星标记比较高效,获得的微卫星标记可以用于仿刺参的分子遗传学研究。

摘要：甜叶菊是我国一种重要特种经济作物,其分子标记相关遗传背景研究甚少。本研究基于生物素与链霉亲和素的强亲和性原理,用链霉亲和素顺磁颗粒捕捉人工合成的标记有生物素的寡核苷酸探针(AG)15,间接筛选出含有甜叶菊基因组微卫星序列的DNA酶切片段,将筛选得到的片段连接到pUC-T载体中,构建甜叶菊微卫星序列的富集文库。挑取354个克隆进行菌落PCR检验,从中筛选出158个阳性克隆进行测序。结果表明,134个(84.81%)克隆中含有微卫星序列,其中完美型85个(63.43%)、非完美型15个(11.19%)、复合型34个(25.38%)。根据微卫星序列共设计出71对微卫星引物,其中62对能扩增出稳定的条带。利用24个甜叶菊品系对这62对引物的遗传多样性的分析表明,有16个位点表现出多态性,等位基因数为2～8个,平均每个位点扩增得到4.5个等位基因,多态性信息含量在0.3163～0.7595之间,观测杂合度(Ho)与期望杂合度(He)的范围分别为0.2174～0.9167与0.3555～0.8076。通过聚类分析,将甜叶菊分为大小叶两大类。本研究开发出的微卫星标记可为甜叶菊的分子遗传育种提供有效的遗传标记。

摘要：通过磁珠富集法构建了藏酋猴AC重复和AAAG重复的微卫星富集文库,分离微卫星序列并对其进行分析。将藏酋猴基因组DNA经Sau3AI酶切后纯化回收,连接特定接头。用生物素标记的探针与酶切片段杂交,捕获300～1000bp片段,随后将获得的片段连接到pMD-19T载体上,转化至JM109中,成功构建藏酋猴微卫星富集文库。(AC)n富集文库和(AAAG)n富集文库的阳性克隆率分别为50%和10%左右。根据测序得到的48个微卫星序列成功设计了24对引物,最终筛选出6个微卫星标记,这些标记将为藏酋猴的遗传多样性研究、圈养种群结构的分析和遗传图谱的构建等奠定一定的基础。

摘要：用磁珠富集法构建了岩原鲤Procypris rabaudi AC重复和GATA重复的微卫星富集文库。采用PCR方法分别以人工合成的oligoA和探针(AC)12或(GATA)6为引物筛选含有微卫星的阳性克隆。(AC)n富集库和(GA-TA)n富集库的阳性克隆率分别为30%和7%左右。对40个AC重复的阳性克隆和30个GATA重复的阳性克隆测序,共获得61个微卫星序列,其中包含了一个三碱基重复(TGA)的微卫星序列。选择设计了19对AC重复和16对GATA重复的微卫星引物以及1对TGA重复的微卫星引物,通过PCR优化,共有20对引物能够产生稳定、清晰的目的产物带。为了检测获得的岩原鲤微卫星座位是否能用于近缘物种的研究,我们将20对岩原鲤微卫星引物用于中华倒刺鲃Spinibarbus sinensis基因组DNAPCR扩增,有60%的引物对能产生特异性的目的条带。本研究获得的20个岩原鲤微卫星座位可以用于岩原鲤及近缘物种的遗传多样性、种群遗传结构等的进一步研究。

摘要：以湖北武汉和四川宜宾人工增殖放流的胭脂鱼子一代酒精浸泡鳍条样本为材料,提取完整基因组DNA,选用人工合成的生物素标记(AAAG)7探针,采用FIASCO(fast isolation by AFLP of sequences containing repeats)磁珠富集法构建胭脂鱼(Myxocyprinus asiaticus)微卫星富集文库。以MseI-N引物组和设计合成的微卫星核心序列引物(AAAG)5,用双引物PCR法筛选含有微卫星的阳性克隆,从54个阳性克隆中共获得22个微卫星序列,其中完美型(perfect)共15个(占68.2%),非完美型(imperfect)6个(占27.3%),混合型(compound)1个(占4.5%);(AAAG/TTTC)n序列在胭脂鱼的基因组DNA中含量非常丰富。根据微卫星侧翼序列最终设计并合成了18对胭脂鱼微卫星引物,经其有效性检验后,可应用于胭脂鱼遗传多样性、种群遗传结构等进一步研究及人工增殖放流效果评估。

摘要：基于磁珠富集法，利用生物素标记的寡核苷酸探针（AAC）8从藏羚羊（Tibetan antelope）基因组酶切的300—1000bp片段中筛选微卫星位点，纯化的富集片段连接到pCR@2．1载体和转化到Trans5α感受态细胞．随机挑取180个白斑克隆，PCR检测到条带数大于或等于2的阳性克隆为56个，阳性率为31．1％．对阳性克隆测序，获得43条含微卫星座位的序列，微卫星重复次数在5～20次之间．舍弃不适宜设计引物的微卫星座位，试验设计并合成了20对微卫星引物；以3个样点（青海、新疆、西藏）的24个藏羚羊基因组为模板进行PCR扩增，获得8对可得到稳定扩增产物的微卫星引物，其中4对引物的扩增产物具有多态性，座位分别为AAC050、AAC056、AAC165和AAC477．上述引物可用于藏羚羊及近缘物种的遗传多样性、种群遗传结构等研究．

摘要：为研究苹果小吉丁虫Agrilus mali Matsumura的种群遗传结构,采用磁珠富集法以生物素标记探针(AC)_(12)和(AG)_(12)构建苹果小吉丁虫微卫星文库,根据阳性克隆测序获得的微卫星侧翼序列设计引物,筛选和开发苹果小吉丁虫多态性微卫星标记,并利用开发的微卫星标记对其不同地理种群的遗传结构进行分析。结果显示,从微卫星文库中的300个阳性克隆中筛选得到248个含有微卫星片段的克隆子,阳性克隆率为82.7%,其中完美型微卫星131个,占52.8%;不完美型90个,占36.3%;混合型27个,占10.9%,表明磁珠富集法开发新微卫星标记的效率较高。从获得的248个苹果小吉丁虫微卫星中筛选获得7个多态性微卫星位点,这7个位点在苹果小吉丁虫8个地理种群样本中的等位基因数为10~23个,有效等位基因数为1.674~12.218个,多态信息含量为0.304~0.796。8个苹果小吉丁虫种群的观测杂合度为0.095~0.676,期望杂合度为0.469~0.755,Shannon指数为0.791~1.621,遗传距离为0.071~0.788。采自新疆维吾尔自治区的7个苹果小吉丁虫种群之间遗传相似度较高,但其与辽宁省种群的遗传相似度较低。

摘要：FIASCO是一种高效构建微卫星富集文库的方法。本研究采用FIASCO(fast isolation by AFLP sequences containing repeats)方法成功构建了巴东木莲(Manglietia patungensis)微卫星AC富集文库。我们对AC富集文库中的119个阳性克隆进行测序,其中57个含有微卫星序列。设计并合成了其中40对微卫星引物进行PCR扩增检测,有6对引物扩增出目的片段,然而没有位点都呈现多态性。最后对巴东木莲微卫星位点的分离效率低下的原因进行了初步探讨。

摘要：利用尼龙膜吸附杂交法构建了海湾扇贝的(AC)15、(AG)15微卫星富集文库,随机挑取3 000个克隆,经菌落原位杂交二次筛选共获得阳性克隆1 268个(42.3%)。经序列测定和生物信息学分析后得到521个独立的阳性克隆,其中微卫星506个,小卫星15个。微卫星中,完美型248个,占总数的49.0%;非完美型216个,占42.7%;复合型42个,占8.3%;其中AG/TC重复占70.4%(356个),AC/TG重复29.6%(150个)。选择其中的55条序列设计引物,筛选出其中的20对引物检测它们在海湾扇贝CC10家系的双亲和94个子代个体中的分离情况,结果表明:(1)其中6个位点在母本和子代中发生分离,10个位点在父本和子代中发生分离,4个为双亲共享位点;(2)2个位点存在无效等位基因;(3)16个位点符合孟德尔遗传定律,4个位点的子代个体基因型频率偏离孟德尔遗传定律。上述结果表明,这些微卫星引物可以用于构建海湾扇贝的遗传连锁图谱,并且所构建的富集文库适用于微卫星标记的大规模开发。

摘要：通过磁珠富集法构建了藏鸡基因组微卫星富集文库，分离微卫星序列并对其进行分析。将藏鸡基因组DNA经Sau3AI酶切后纯化回收，连接特定接头。用生物素标记的（CA）12探针与藏鸡基因组酶切回收片段杂交，捕获200～900bp片段，随后将获得的片段连接到pMD18．T载体上，转化至JM109中，成功构建藏鸡微卫星富集文库。从1200个转化子中获得了353个阳性克隆，随机挑选53个测序，根据测序结果成功设计了18对藏鸡微卫星引物，最终筛选出6个具有多态性的微卫星标记，其HC值均大于0．5，同时可以用于研究藏鸡遗传多样性。实验结果表明磁珠富集法能够有效提高分离微卫星标记的效率。